Экспресс анализ на бешенство кошек

Существует ли анализ на бешенство у кошек и как своевременно распознать болезнь? Бешенство или водобоязнь – опасное заболевание, которое вызывает вирус Rabies, было известно еще древним восточным врачевателям. Прошли столетия, но до сих пор этот вирус продолжает держать в страхе всю планету. Защититься от заражения человеку помогает антирабическая вакцина, но она эффективна только когда недуг находится в инкубационном периоде. А как же быть с нашими мурлыкающими питомцами, которые не защищены от контактов с вирусоносителями? Какие способы диагностики бешенства существуют?

Кошка может заразиться бешенством от укуса зараженного дикого зверя или домашнего питомца, кошки или собаки; съев дохлую зараженную крысу или мышь. Проникнув в организм кошки, вирус достигает нервных волокон. Через них он устремляется к головному мозгу, где начнет размножаться. Постепенно вирус расходится по всему организму. Нарушения, которые вызывает бешенство, не обратимы. В результате функционирования вируса в организме нейроны головного мозга погибают, что приводит к смерти заразившегося.

Первые симптомы заболевания появляются после завершения инкубационного периода. Но кошка представляет угрозу для человека еще в самом начале заражения. Она может укусить или поцарапать, что приведет к еще одному заражению. Болезнь может иметь разные формы: буйную, тихую и атипичную. Характерными симптомами бешенства являются:

• обильное слюнотечение, которое приводит к намоканию шерсти;
• гидрофобия,
• отсутствие или извращение аппетита,
• отвисание челюсти, неровная походка,
• нападение животного на встречных людей, собак и кошек.

Определить бешенство у кота не просто. Если вы заметили за своим животным неадекватное поведение, признаки которого схожи с бешенством, нужно держаться от него подальше. Ведь теперь кошку нельзя будет остановить привычными способами, а для вас она будет представлять смертельную угрозу. Следующим шагом должен быть вызов ветеринарной службы, которая поможет изловить кота. Важно понимать, что достоверной прижизненной диагностики бешенства не существует.

После отлова животное помещают в отдельную клетку, где непрерывно наблюдают за его поведением. В случае подтверждения диагноза, кошку усыпляют. При анализе крови кошки на бешенство ткани мозга после ее смерти исследуют на наличие телец Бабеша-Негри. После появления первых симптомов бешенства, кошка обречена на смерть. Проводить лечение и изъятие крови у живого животного при подозрении на бешенство не станет ни один врач. Причина этому – слишком высокий риск заразиться.

Единственным методом профилактики бешенства является введение специальной антирабической вакцины, которая защитит кошку от заражения. Вакцинацию можно проводить котятам с трехмесячного возраста после того, как у них выпадут зубки. Взрослым котам и кошкам вакцину вводят ежегодно.

Прививают только здоровых животных. Беременным и кормящим кошкам вакцинироваться нельзя. Получить прививку от бешенства можно в любой ветеринарной клинике. Иммунитет после вакцинации сохраняется от 12 до 36 месяцев.

Анализ на антитела к бешенству необходим при вывозе животного в другую страну. Для исследования используется кровь кошки, с помощью которой можно определить привита она или нет. Положительный результат анализа крови говорит о наличии иммунитета у кошки перед бешенством. Средняя стоимость анализа на бешенство у кота составляет около 1000 рублей. Пройти экспресс-тест также можно в специализированных ветеринарных клиниках.

источник

Бешенство собак — заболевание, вызываемое вирусом Rabies virus. Этот вирус поражает нервные клетки и передается со слюной при укусе и через поврежденную кожу и слизистые оболочки. Особая опасность заключается в том, что бешенство опасно для всех видов домашних и диких теплокровных животных, и человека. При появлении клинических признаков летальность составляет почти 100%. От момента попадания вируса в организм до первых симптомов может пройти от нескольких дней до года. При экстренной вакцинации сразу после укуса обычно болезнь не развивается. Клинически это заболевание у собак проявляется отказом от еды, водобоязнью, агрессией или наоборот излишне ласковым поведением, затем появляются судороги и животное погибает. От момента появления первых симптомов редко проходит более 10 дней.

В соответствии с Санитарными правилами СП 3.1.096-96 и Ветеринарными правилами ВП 13.3.1103-96:

• «5.1. Диагноз «бешенство» ставят на основании комплекса эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.
• 5.2. Для исследования на бешенство в лабораторию направляют свежий труп или голову мелких животных, а от крупных — голову или головной мозг.»

• Микроскопическое исследование головного мозга для выявления телец Бабеша- негри.
• Метод флюоресцирующих антител (МФА). Для этого исследуют головной мозг или роговицу. Особенность данного исследования в том, что можно провести исследование живого животного в течении всего нескольких часов. Для данного исследования животное надежно фиксируют и под местным анестетиком делают несколько мазков-отпечатков с роговицы. После чего обрабатывают стекла антирабической сывороткой меченной флюоресцирующей краской и исследуют в люминесцентном микроскопе. К сожалению, в Красноярске данный метод не проводится.
• Биологическая проба – заражение мышей.

В связи с тем, в РФ нередко выявляются случаи заражения бешенством домашних и диких животных, то для ввоза наших животных в некоторые страны, необходимо соблюдать особые условия. Стандартным является наличие ежегодной вакцинации у чипированного животного с обязательной отметкой в паспорте. Но для стран Евросоюза, Тайваня, Японии, ОАЭ, Израиля необходимо еще и тест на количество антирабических антител в крови животного. Зачем проводится это исследование? Антитела – это специфические белки в организме животного, которые уничтожают вирусы. Дело в том, что антитела начинают вырабатываться в организме животного сразу после вакцинации, течении трех недель они повышаются, а потом постепенно снижаются. Большинство импортных производителей вакцин от бешенства гарантируют достаточно высокий уровень антител в крови животного до трех лет при соблюдении инструкции. Напряженность иммунитета(количество антител) зависит от многих факторов: общего состояния здоровья животного, скорости иммунной реакции, качества вакцины и многих других. Обычно уровень антител в крови должен быть не менее 0,5 МЕ/мл. Перед переездом нужно внимательно ознакомиться с условиями въезда в страну заранее. Важно! Исследование на уровень антител может выполнять только лаборатория, прошедшая международную аккредитацию в референс центре AFSSA в Нанси, Франция.

Список аккредитованных лабораторий:

• г.Владимир, мкр. Юрьевец, ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
• г.Москва, 2-ой Рощинский проезд, д.8, стр.5, этаж 1, комнаты 2,3,18.ООО «НовиСтем»
• Россия, Владимирская область,Петушинский район, ПГТ Вольгинский,ул. Старовского, д. 27ООО «Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины» («ИБВМ»)
• ФГБУ «ВГНКИ» г. Москва, Звенигородское щоссе 5
• г.Москва, ул. Гамалеи, д. 16, стр.2 НИИ профилактики болезней человека и животных

Для того чтобы пройти это исследование на бешенство, ваше животное должно быть:

• старше 4 месяцев
• чипировано
• привито от бешенства (не ранее чем 30 дней назад и 2 месяца до окончания срока действия вакцины)

Во многих странах при ввозе животных из России необходимо ни только паспорт с своевременно поставленной вакциной, но и анализ, подтверждающий высокий титр антител. Данный анализ можно сделать в указанных выше лабораториях России. В удобное для Вас время в нашей ветклинике необходимо сдать кровь для получения сыворотки, затем мы опечатаем пробу в вакуумную пробирку и готовим сопроводительное письмо с копией ветеринарного паспорта (заполненным на английском языке) в строго вертикальном положении. Хранится кровь либо в замороженном виде, либо при температуре +4С +8С в течение 9 суток. Исследование проводится от 3 дней до 2 недель.

Далее владелец осуществляет отправку по указанным адресам и в течении недели-месяца, лаборатория присылает ответ.

Полная информация о ценах в разделе прайс-лист.
ЗАПИСАТЬСЯ НА ПРИЕМ

источник

Подозревать бешенство у кошки хозяин может всякий раз, как только животное, по его мнению, поведёт себя не адекватно. К сожалению, даже банальные конфликты (потянул ребёнок за хвост, киска рыкнула) могут закончиться подозрениями.

Чтобы обезопасить себя и домочадцев, быть уверенному в здоровье четвероногого, следует разобраться в формах проявления и какие анализы на бешенство у кошек можно сделать.

Бешенство — заболевание вирусное, контагиозное (заразное), антропозоонозное (общее для человека и животного). Более всего подвержены заражению дикие животные: волк, шакал, песец, лиса, мангуст, а также собака и домашняя кошка.

Эпизоотия может проходить:

• по природному типу. Заражение происходит при укусах дикими представителями фауны;
• по-городскому. Это случается при укусах бродячими собаками, кошками или случайно забежавшими лисами или волками.

Вирус находится в слюне больного животного. В момент укуса происходит нарушение целостности кожи, и возбудитель быстро проникает к ближайшим нервным клеткам и ганглиям.

Возможно заражение и без укуса. При контактах, больное животное фыркает и у него обильное слюнотечение. Капельки слюны попадают на слизистые оболочки, кожу, корма, предметы ухода и просто зависают в воздухе. Эти пути заражения также имеют место.

Кроме того, вирус найден в:

• почках и моче;
• глазных тканях и слезе;
• кишечнике и фекальных массах;
• лёгких и выделениях из носовых отверстий.

Однако основной путь заражения занесение вируса в рану при укусах. Возбудитель, попадая во внешнюю среду, быстро теряет свою вирулентность. Даже если температура не превышает 4-6 ᵒC, но солнечные лучи имеют прямое воздействие, вирус инактивируется за 5-6 дней.

Чем выше показатели термометра, тем быстрее происходит ингибирование и гибель вириона. Нагрев до 70 ᵒC убивает возбудителя моментально. Пониженные температуры консервируют микроорганизм. Мороз сохраняет патогенность вириона месяцами.

Совет! Самые доступные дезинфицирующие средства способны моментально убить вирус. В домашних условиях достаточно быстро намылить место укуса или обработать аптечным йодом.

Заболевание по-разному проявляется у животных. При этом одни и те же виды могут реагировать на внедрение вируса как типичной, так и атипичной клиникой.

Тихую форму бешенства иногда сопоставляют с инкубационным, скрытым периодом. Животное ни как не проявляет признаки и кажется абсолютно здоровым.
Этот период ещё совмещают с паралитической формой. Животное не проявляет агрессии, а после паралича погибает.

При такой форме у кошачьих можно наблюдать:

• беспокойство;
• интерес к месту укуса;
• бурную реакцию на обычные вещи;
• слюнотечение;
• стремление найти укромный уголок.

Такая форма наиболее часто сопровождает работу вируса у кошек.

Эта форма наиболее мало зарегистрирована у кошек. Некоторые специалисты склонны соединять воедино тихую и паралитическую форму. Сопровождается:

• затруднённым глотанием;
• не возможностью лакать воду при повышенной жажде;
• параличом жевательных мышц, языка, глотки;
• слюнотечением;
• параличом мышц тела и конечностей.

Иногда животное не проявляет каких-либо признаков, а после быстрого паралича наблюдается смерть.

Форма, которая вобрала в себя признаки всех, либо проявляется совершенно неожиданно. Проявиться может:

• гастроэнтеритом;
• бронхопневмонией;
• быстрой сменой выздоровления и вновь появлением признаков.

Как правило, для кошачьих такая форма не характерна. Вирус редко приводит к абортам у кошек. Есть данные, что после аборта кошка выздоравливала (случаи единичны).

Диагностика бешенства проводится:

Прижизненная диагностика основана на анализе клинических признаков и эпизоотологических данных. Принято считать, что если при наблюдении за животным в течение 10 дней симптомов «буйности» не проявляется, то диагноз бешенство не подтверждается.

Для проведения исследования кроме других биологических материалов можно провести анализ сыворотки крови. Такие анализы (серологические исследования) проводят, как правило, для определения экспозиции перед и после вакцинации. Это даёт возможность определить время иммунного ответа. Экспертизу оптимально провести через 4-5 недель после вакцинации.

Исследования проводятся на протяжении 14 дней. Исследования проводят в основном, для вывоза животного за границу. Перед проведением следует интересоваться в посольстве какие именно исследования и сроки проведения должны быть.
Взятие крови проводят одноразовым шприцем. Транспортируют в лабораторию при низких плюсовых температурах в термо сумках. Материал пригоден к исследованиям на протяжении 3-х суток.

Сыворотку получают методом отстаивания или центрифугирования. Хранение сыворотки проводят при температуре минус 20ᵒC.

Исследование проводят с помощью:

• полимеразной цепной реакции. Следует отметить, что провести ПЦР может только высоко оснащённая лаборатория. Метод очень дорогостоящий;
• ИФА (иммуноферментный анализ);
• РП (реакция преципитации);
• РСК (реакция связывания комплемента).

Прежде чем обращаться в лабораторию необходимо чётко знать на какие методы она аккредитована (может ли она провести исследования).

После гибели животного в лабораторию доставляют полностью труп. На районном уровне делаются мазки отпечатки с отделов головного мозга, и проводится биопроба.
Мазки отпечатки отправляются в лабораторию, которая может провести флуоресцентную микроскопию (как правило, это областная государственная лаборатория).

На результат экспертизы влияет множество факторов:

• время взятия материала (от падежа до мазка);
• уровень мастерства специалиста, который обрабатывает материал;
• уровень мастерства того, кто делает мазки-отпечатки;
• уровень квалификации того, кто проводит флуоресцентную микроскопию.

Взирая на выше сказанное, следует следующее: даже если в экспертном заключении
будет сказано, что вируса бешенства не обнаружено, то конечное заключение делается только на основании результатов биопробы. Нельзя делать заключения только по микроскопии.

Биопрба ставится на белых мышах. Их заражают суспензией из отделов головного мозга подозреваемого животного в день вскрытия, и ведут наблюдение. Если в течение 30 дней мыши живы — бешенство можно отрицать. Гибель мышей в первые 1-2 дня считается не типичной.

Если труп кошки пролежал при плюсовых температурах 2-3 дня, то такой материал уже исследованиям не подлежит.

При постановке диагноза «Бешенство» местность, где проживала кошка, объявляется не благополучной, и проводятся карантинные мероприятия. Меры принимают по результатам флуоресцентного микроскопирования.

Важно! Бывает так, что флуоресценция дала положительно, а мышки живы. Бывает и наоборот. К сожалению, бешенство очень коварное заболевание и профилактика наилучшая форма обезопасить себя и своего четвероногого.

источник

Экспресс-тест для выявления специфических антигенов вируса бешенства.

Бешенство (водобоязнь, гидрофобия) – острое вирусное заболевание, которое возникает у собаки после укуса больным животным. Бешенство у собак симптомы имеет особые.

Из-за болезни поражается нервная система: повышается возбудимость, появляется водобоязнь, паралич дыхательной мускулатуры, конечностей. Всегда исходом заболевания является смерть. Поэтому важно знать, как определить бешенство у собаки.

В наше время бешенство у собак очень распространено. В тех местах, где есть очаги бешенства животных, люди находятся также под угрозой. Как правило, распространяют бешенство, прежде всего, бродячие бездомные собаки. Сами же они заражаются преимущественно от диких животных.

Инкубационный период бешенства у собак (скрытый) длится 3-6 недель. У щенков он занимает 5-7 дней. Часто скрытый период длится долго, у отдельных взрослых особей собак достигает одного года.

Использование набора реагентов для иммунохроматографического выявления специфических антигенов вируса бешенства:

Материал для исследования.
• К вирусу восприимчивы многие виды животных (в том числе собаки, кошки, хорьки, енотовидные собаки, лисицы, летучие мыши, КРС и др.) и человек.
• Материал для исследования – слюна или 10%-ный гомогенат головного мозга. Для получения последнего смешивают 10% гомогенизированной мозговой ткани и 90% натрий-фосфатного буфера (PBS).
• Время хранения образцов при +15°С +25°С – 4 часа, при +2°С +8°С – 24 часа, более длительное хранение возможно при -20°С или ниже.
• Перед выполнением теста хранившиеся в холодильнике образцы должны быть помещены в комнатную температуру на 20 – 30 минут.

Процедура проведения анализа.

1. С помощью зонд-тампона соберите образец слюны или 10% гомогената головного мозга животного и внесите в пробирку с раствором для экстракции.
2. Вращая тампон в пробирке, дайте образцу перейти в раствор.
3. Извлеките тест-устройство из упаковки и поместите на хорошо освещённую горизонтальную поверхность.
4. С помощью пипетки внесите 4 капли (100 μl) жидкости из пробирки с образцом в окошко «S» (sample) тест – устройства. Не торопитесь. Вносите капли по одной, с интервалом в 2-3 секунды.
5. Прочитайте результат через 5 – 10 минут. По истечении 10 минут результаты считывать не следует.

Чтение результатов.

(+) Положительный. Видны две линии («С» — контрольная и
«Т» — тестовая). В образце обнаружены искомые антигены. Даже очень слабая интенсивность окраски Т-линии говорит о положительном результате.

(-) Отрицательный. Видна только линия «С» — контрольная. Искомые антигены в образце не обнаружены.

(*) Ошибка. Видна только Т-линия, либо не видно ни одной линии. Нарушены условия хранения или проведения теста. Проверьте срок годности набора, повторите тест заново, строго следуя инструкции.

Важные замечания.
• При интерпретации результатов теста должны учитываться все имеющиеся анамнестические и клинические данные.
• Иммунохроматографический анализ является скрининг-методом. Несмотря на его высокую чувствительность (96% против RT-PCR) и специфичность (98% против RT-PCR), для подтверждения диагноза бешенства требуются дополнительные исследования.

Особые указания.
• Не используйте повторно компоненты набора.
• Не смешивайте компоненты наборов разных серий.
• Не используйте набор по истечении срока годности.
• Использованные компоненты набора должны рассматриваться, как потенциально опасные в инфекционном отношении.
• Только для in-vitro диагностики.
• Только для ветеринарии.
• Набор хранится при температуре +2°С+30 °С.
• Если набор хранился в холодильнике, то перед применением его следует поместить на 20-30 минут в комнатную температуру.

источник

Экспресс тест для определения вируса бешенства у животных, кошек, собак

по применению экспресс-теста для определения вируса бешенства Rabies Virus Ag

Одношаговый кассетный экспресс-тест для визуальной детекции антигена возбудителя бешенства животных Rabies Virus Ag в слюне или тканях мозга. Время исследования: 5-10 минут.

СБОР ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ И ПОДГОТОВКА

— 10 × фольгированных упаковок, каждая из которых содержит одну кассету, одну пипетку и осушитель

— 10 × пробирок с буферным раствором (0,7 мл каждая)

— Руководство по эксплуатации

1. Соберите аппликатором необходимые образцы.

2. Вставьте аппликатор с образцом в емкость с буфером и перемешайте.

3. Выньте кассету из защитной упаковки. Обозначьте тест-систему данными пациента или иным идентификатором и используйте как можно быстрее.

4. С помощью капельницы нанесите 3 капли (

150 мкл) буфера с образцом на зону образец «S» тест-системы, не торопясь, одну за другой. Держать пипетку вертикально. ВНИМАНИЕ: за один прием не вливать в лунку порцию пробы более чем из одной капли.

5. Подождите 5 – 10 минут и считайте результаты. Важно, чтобы перед считыванием результата фон был чистым. Необходимо считать результат не позднее 10 минут!

> Отрицательный: Только одна окрашенная полоса в контрольной зоне (C). Нет окрашенной полосы в тестовой зоне (T).

> Положительный: Вдобавок к розовой полосе в контрольной зоне (C) появляется отдельная розовая полоса в тестовой зоне (T).

> Непригодный результат: Полное отсутствие полос или отсутствие полосы в контрольной зоне (C). Непригодный результат может быть следствием неправильного проведения анализа или непригодности тест-системы.

Повторите анализ на новой тест-системе.

1. Результаты тестов должны учитываться врачом совместно со всеми доступными клиническими данными. Точный клинический диагноз может быть установлен только врачом на основании оценки всех имеющихся клинических и лабораторных данных.

2. Данная тест-система предназначена для определения антигена возбудителя бешенства животных Rabies Virus Ag в слюне или тканях мозга. Эта тест-система предназначена только для in vitro диагностики. Данный тест является качественным и не предназначен для количественного определения уровня или повышения количества антигена.

3. Данная тест-система позволяет выявить наличие антигена возбудителя бешенства животных Rabies Virus Ag в пробе и не может быть единственным основанием для постановки диагноза.

4. Если результаты теста отрицательные при наличии клинической симптоматики, рекомендуется использовать дополнительные методы исследования. Отрицательный результат не может в различные периоды исключить возможность возбудителя бешенства животных Rabies Virus Ag.

ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ ТЕСТ-СИСТЕМЫ

Тест-систему необходимо хранить при температуре 2 — 30C в пределах указанного на упаковке срока годности. Следует избегать воздействия на тест-систему прямых солнечных лучей, сырости и тепла.

1. Только для in vitro диагностики.

2. Не используйте тест-систему с истекшим сроком годности.

3. Тест-система не может быть использована повторно.

4. Не всегда возможно сравнивать результаты от различных тест-систем.

5. Используйте новую пробирку и пипетку для забора каждой пробы, чтобы предотвратить смешивание образцов и обеспечить точность результатов.

Используйте меры предосторожности и помещайте все использованные материалы в контейнер для биологически опасных отходов.

источник

Компания «Удачный полёт» оказывает содействие в получении результата теста на наличие антител к бешенству.

Название документа

Особые условия

Содействие в получении ветеринарного свидетельства формы №1, №4

в зависимости от сложности ситуации

40 00 рублей на одно животное

Содействие в обмене ветеринарного свидетельства формы №1 на международный сертификат формы №5а

в зависимости от количества животных

от 6000 рублей

Содействие в оформлении ветеринарного паспорта

при перемещении за пределы РФ, только в связке с получением ветсвидетельства формы №1

25 00 рублей

Содействие в получении результатов теста на наличие антител к бешенству

в зависимости от срочности получения результатов

от 140 00 рублей

Евросертификат, сертификат на ввоз в другие страны

в страны, требующие данный сертификат

2000 рублей

Содействие в получении разрешения на ввоз животного в разные страны

в страны, требующие данное разрешение

Стоимость требует уточнения в зависимости от страны ввоза

Содействие в получении разрешения на вывоз и ввоз животных из / в Россию

требуется при перевозке CARGO

20 00 рублей

Здравствуйте дорогой читатель. В этой статье нам бы хотелось рассказать Вам подробнее, что такое тест на наличие антител к вирусу бешенства, в каких случая он требуется, когда и где его нужно сдавать, сколько стоит и иные подробности. Итак, обо всё по порядку:

1. Некоторые страны, и в особенности страны Ближнего Востока, имеют обязательное требование наличие данного анализа при ввозе собак и кошек в их страну. К этим странам относятся Южная Корея, ОАЭ, ЮАР, Малайзия, Израиль, Великобритания и прочие государства. Собственно говоря, для чего они это делают, если у всех ввозимых животных есть в наличии ветеринарные паспорта, в которых указано, что ввозимые кошки и собаки привиты от бешенства и пройден срок инкубации? Делают они потому, что наша страна входит, по их мнению, в ряд стран с эпидемиологически опасными регионами по бешенству. Правда тут резонен вопрос — почему другие государства, к примеру США и страны Европы, так не считаю? Ответ, дорогой читатель, мы предлагаем Вам додумать самостоятельно.

Правда, справедливости ради, стоит отметить, что есть страны (например Южная Корея), которые позволяют ввозить собак и кошек, если их возраст ещё не достиг положенного возраста для вакцинации против бешенства, равный 3-ём месяцем. Правда тут сразу возникает иная сложность уже в России, где сейчас уже невозможно получить ветеринарное свидетельство №1 с формулировкой «Не привит по возраст». Подробнее об этой теме мы писали в этой статье: Читать.

2. Когда же позволительно сдавать тест на наличие антител к бешенству? Ответ кроется в самом вопросе — когда в крови Вашей собаки или кошки уже сумели выработаться антитела к данной вирусной болезни и срок этот равен от 30-ти дней после самой проведённой вакцинации, а также если от даты сделанной прививки прошло не более 1-го года.

3. Анализ на наличие антител к бешенству считается успешным, если их наличие в крови животного не менее 0,05 МЕ/мл ( IU / ml ) . Если данный показатель меньше указанных цифр, то даже не стоит пытаться отправлять животное в страну импортёр с таким результатом. В противном случае Вашу собаку или кошку в лучшем случае вышлют из страны обратно, в менее лучшем случае животное привьют от бешенства ещё раз и посадят на карантин в 30-ть дней с выставлением, в конце прохождения инкубационного периода, весьма круглую сумму для оплаты услуг содержания животного на карантине. Ну и, при самом негативном сценарии, животное просто подлежит усыплению.

4. Где же можно сдать анализ на наличие антител к бешенству? К сожалению надо констатировать, что лабораторий, аккредитованных проводить подобный тест, совсем немного:

а) Федеральный центр охраны здоровья животных в г. Владимир;

б) Центр молекулярной диагностики ФГБУ «ВГНКИ» в г. Москва;

в) НИИ диагностики и профилактики болезней человека и животных в г. Москва.

5. Стоимость анализа на наличие антител к бешенству зависит от выбранной лаборатории, а также от срочности его выполнения. Так, для ориентира, на момент написания статьи (01/10/2016), сроки и стоимость в лаборатории ВГНКИ следующая:

а) Срок изготовления течении 2-ух недель — 5000 рублей;

б) Срок изготовления течении 3-ёх рабочих дней — 10 000 рублей.

Уважаемый читатель, если Вы проживаете далеко, от указанных выше городов, регионе, а также если просто нуждаетесь в содействии при получении результата теста на наличие в крови Вашей собаки или кошке антител к вирусу бешенства, то Вы можете обратиться к нам за помощью, воспользовавшись наиболее удобным для Вас способом связи в разделе КОНТАКТЫ

источник

Бешенство (Б) – остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением ЦНС. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек.

Болезнь регистрируется в различных регионах земного шара. Не отмечено случаев распространения болезни в Австралии, Великобритании, Японии. Заболевание почти всегда заканчивается смертью. Имеются фактически документированные случаи выздоровления от бешенства человека и собак после экспериментальной инфекции.

Вирус бешенства (ВБ) относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. В настоящее время установлено, что ВБ имеет 4 серотипа, что обусловлено, видимо, различием в составе мембранных белков. Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны, но различаются по вирулентности. ВБ обладает ГА и ГАД свойствами. Между инфекционной и ГА активностью существует линейная зависимость. Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют ВНА, КСА, антиГА и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) АТ.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений (они имеют меньшее значение) и, главным образом, результа­тов лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика заключается в исследовании головного мозга животных с целью выявления вирусного АГ в ИФ, РДП, обнаружении те­лец Бабеша — Негри и биопробе на белых мышах.

В Российской Федерации в настоящее время организовано производство наборов для диагностики Б в ИФ и РДП в ВНИТИБП и КазНИВИ.

Выделение вируса. В лабораторию для исследования направляют свежие трупы мел­ких животных, от крупных животных — голову или головной мозг. В некоторых случаях до­пускается консервирование головного мозга в 50%-ном глицерине. Труп или голова должны быть тщательно упакованы в полиэтиленовый мешок, мозг — в банку с притертой стеклянной или резиновой пробкой, залитой парафином. Материал упаковывается во влагонепроницае­мую тару. Для вирусологических исследований пригоден только не консервированный мозг. Необходимо помнить, что вскрытие трупа, извлечение мозга и другие операции с патологи­ческим материалом следует проводить в условиях стерильности и строгого соблюдения мер личной профилактики: прочно фиксируют голову животного, защищают руки 2-мя парами перчаток (хирургические и анатомические), для защиты глаз надевают очки, а на нос и рот-6-слойную марлевую повязку.

Лабораторные исследования материала на бешенство проводят вне всякой очереди; результаты немедленно сообщают врачу хозяйства и главному врачу района (города).

Индикация и идентификация вируса. Порядок проведения исследований: из каждого отдела головного мозга левой и правой сторон (аммонова рога, мозжечка, коры полушарий и продолговатого) готовят по 4 мазка-отпечатки для ИФ и обнаружения телец Бабеша — Негри; с мозговой тканью ставят РДП; при отрицательных результатах ставят биопробу.

Обнаружение специфических телец-включений. Мазки-отпечатки окрашивают по Селлерсу, Муромцеву или другими методами. После окрашивания препараты просматрива­ют в световом микроскопе с иммерсионной системой. Положительным результатом считают наличие специфических телец Бабеша — Негри (при окраске по Селлерсу — четко очерченные овальные или продолговатые гранулярные образования розово-красного цвета в протоплаз­ме, при окраске по Муромцеву — светло-фиолетовые с темно-синими включениями тельца Бабеша — Негри, чаще они расположены вне нервных клеток.

Наиболее характерная особенность телец Бабеша — Негри — их внутренняя структура, по­зволяющая абсолютно точно дифференцировать их. Внутри видны маленькие зернышки — базофильные зернистости темно-голубого, даже черного цвета величиной 0,2-0,5 мкм.

Диагностическая ценность обнаружения телец-включений для доказательства заражения ВБ общепризнана. Однако и у здоровых животных, в особенности у кошек и белых мышей, имеются образования, присутствие которых может вызвать диагностические затруднения. В отдельных случаях в мозге кошки можно с уверенностью дифференцировать подобные включения от телец Бабеша — Негри, и здесь рекомендуется воспользоваться методами иден­тификации, в особенности ИФ. Равным образом и у собак, погибших в результате отравле­ния змеиным ядом или поражения электрическим током, можно найти тельца-включения, напоминающие тельца Бабеша – Негри. Тельца Бабеша — Негри выявляют лишь в 65-85% случаев бешенства, поэтому отсутствие их не является отрицательным ответом, и материал исследу­ется в других тестах (ИФ, РДП, биопроба).

ИФ. Один из основных тестов при диагностике Б. При высококвалифицированном вы­полнении получают в 99-100% совпадения с методом биопробы. Обычно в диагностической практике используют прямой метод ИФ, который проводят с применением антирабического флюоресцирующего Ig. Фиксацию препаратов в охлажденном (8-10°С) ацетоне проводят не менее 4-х ч. В качестве отрицательного контроля используют мазки-отпечатки головного мозга здоровых белых мышей. Учитывают результаты визуально в люминесцентном микро­скопе на основе оценки интенсивности свечения комплекса АГ-АТ. АГ ВБ выявляется в ви­де ярких желто-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины в клетках (чаще вне клеток). Диагноз считают установленным, если в нескольких полях зрения обнаружи­вают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленым свечением или множество мельчайших точек, В контроле подобного свечения не должно быть.

Для доказательства специфичности свечения комплекса АГ-АТ используют метод по­давления ИФ, который заключается в способности рабического АГ, связанного с нефлюоресцирующими AT, вторично не вступать в соединение с флюоресцирующими специфиче­скими AT. Для этого на фиксированные препараты, приготовленные из исследуемого голов­ного мозга, наносят 5%-ный антирабический нефлюоресцирующий Ig, выдерживают 30 мин при 37°С во влажной камере, промывают физраствором, а затем окрашивают флюоресци­рующим антирабическим Ig общепринятым прямым методом. В обработанных таким обра­зом препаратах флюоресценции не должно быть.

Метод ИФ дает возможность обнаруживать ВБ в клетках роговицы глаз и предвари­тельно поставить диагноз прижизненно: во время болезни животных, а также за 1-2 дня и более до клинического её проявления. Метод может быть использован для исследования по­дозреваемых в заболевании Б животных, а также клинически здоровых собак и кошек, по­кусавших людей и животных. Для этого готовят отпечатки с роговицы, соблюдая все прави­ла личной безопасности, раскрывают глазную щель животного большим и указательным пальцами и на слегка выпяченное глазное яблоко надавливают поверхностью предметного стекла, отступив 0,5 см от конца. Нужно следить, чтобы животное не моргало третьим ве­ком, так как со стекла удаляются эпителиальные клетки и получается некачественный мазок. С каждого глаза делают не менее 2 препаратов, содержащих по 2 отпечатка. Для кон­троля аналогичным образом готовят отпечатки роговицы от здоровых животных. Их можно приготовить в хозяйстве. Отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в тече­ние 4 ч при 4°С, упаковывают и отправляют в лабораторию. Окрашивают препараты, как при ИФ, по общепринятой методике.

В препаратах, полученных от больных животных или находящихся в конце инкубаци­онного периода болезни, в цитоплазме многих эпителиальных клеток наблюдаются разной формы ярко светящиеся гранулы разного размера — от пылевидных точек до 2 мкм и более. С целью получения достоверных результатов в каждом препарате просматривают по 50-100 клеток, а всего от животного — не менее 200-400 клеток. Результаты микроскопии считают положительными, если в отпечатках роговицы животного обнаруживают 11% и более кле­ток с характерными очажками свечения. Необходимо иметь в виду, что в препаратах от здо­ровых животных (контроль), вследствие аутофлюоресценции, могут встречаться единичные клетки с подобными по форме и свечению очажками.

Важно отметить, что ИФ дает возможность ускорить ответ при окончательной постанов­ке диагноза путем биопробы, поскольку диагноз при Б может быть установлен только на 4-8-й день после заражения мышей исследуемым материалом, а инкубационный период забо­левания мышей может достигать и 20 дн. ИФ может выявлять ВБ в тканях подчелюстной слюнной железы. Из подчелюстных слюнных желез готовят препараты-мазки, беря матери­ал не менее чем из 6 разных участков железы, так как распределение в ней вируса нерав­номерно. Часто, чтобы получить отпечаток, приходится делать сильный нажим, поскольку из-за обилия муцина на стекле остается мало материала.

Показана возможность идентификации ВБ в коже методом ИФ, С этой целью берут пробы кожи головы, а также фолликулы сенсорных и тактильных волос морды или лате­ральных сенсорных сосочков (на щеке собаки). Пробы хранят при -20 или -70°С. Из них де­лают криосрезы, которые обрабатывают флюоресцирующим глобулином. Результаты ИФ анализа, полученные при идентификации ВБ в коже, в высокой степени коррелируют с дан­ными, полученными при исследовании мозга того же животного. Показана близкая корре­ляция между обнаружением АГ вируса в пробах мозга и тканях губы методом ИФ.

РДП. Применяют для обнаружения АГ ВБ в неконсервированном головном мозге жи­вотных, павших от уличного бешенства, или мышат, используемых в биопробе. РДП ставят микро­методом на предметных стеклах, используя 1-1,5%-ныЙ агаровый гель по общепринятой ме­тодике. Наибольший процент положительных результатов выявляют при использовании следующего трафарета: А — аммонов рог (правая сторона); В — кора головного мозга (правая сторона); С — мозжечок (правая сторона);
Д — продолговатый мозг (правая сторона); + (плюс) — положительный контроль; — (минус) — отрицательный контроль; 1, 2, 3, 4 — лунки с разведе­нием специфического иммуноглобулина 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 соответственно

Из каждого отдела головного мозга с помощью пинцета готовят гомогенную пастооб­разную массу, которую и помещают в соответствующие лунки. От мышей исследуют весь головной мозг. Из отделов головного мозга левой стороны готовят АГ аналогичным образом ( на каждую экспертизу в общей сложности требуется 4 предметных стекла с агаровьм ге­лем). Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч. При наличии 1 или 2-3 линий преципитации между лунками, содержащими АГ и иммуноглобулин, реакцию считают положительной.

РДП проста по выполнению и специфична, но процент выявления вирусного АГ в ис­следуемом материале составляет 45-70. При исследовании головного мозга мышей, полу­ченного при положительной биопробе, РДП выявляет до 100% случаев. Отсутствие в иссле­дуемом материале телец Бабеша — Негри, специфической флюоресценции и отрицательная РДП не дают основания исключить наличие вируса. В этом случае окончательный диагноз ставят по результатам биопробы на белых мышах с последующей идентификацией вируса.

Биопроба. Принято считать, что биопроба является более эффективным методом, чем обнаружение телец Бабеша — Негри, ИФ и др. Однако и она в отдельных случаях оказыва­лась отрицательной, несмотря на подтверждение диагноза Б путем обнаружения телец-включении и ИФ. Процент отрицательных результатов по биопробе колебался от 1,3 до 12.

Сведения о различной эффективности биопробы могут быть объяснены рядом факторов: выбора экспериментального животного, количества их в опыте, способа заражения, способа и срока хранения материала до поступления в лабораторию. Может играть роль и явление интерференции инфекционных частиц неактивными частицами, если для инокуляции ис­пользуют недостаточно разведенный материал.

В мозге и слюнных железах лисиц и скунсов, павших от бешенства, обнаружено вещество, ингибирующее инфекционность вируса, что не позволяет провести диагностику болезни у этих животных методом внутримозгового заражения мышей. Наличие ингибирующего вещества в исследуемом материале не препятствует выявлению вирусного АГ методом ИФ; для скун­сов и лисиц это самый чувствительный метод диагностики.

Из животных всех видов (кролики, морские свинки, взрослые белые мыши и хомячки), использованных для биопробы, многие отдают предпочтение мышам-сосунам, поскольку они более чувствительны к разным штаммам ВБ и менее опасны в работе. Сирийские хо­мячки по чувствительности не уступают мышам, но они менее доступны.

РСК. Выявление специфического АГ в РСК при диагностике бешенства применяется реже, чем другие методы. Из присланного для исследования мозга готовят АГ. Для этого мозговую ткань (особенно богаты АГ, связывающим комплемент, кусочки таламуса и стволового от­дела мозга) растирают в вероналовом буфере в соотношении 1:10 и оставляют при комнат­ной температуре на 1 ч, после чего суспензию инактивируют при 56°С в течение 5 ч. Такая обработка убивает вирус и снимает антикомплементарность мозговой ткани, не повреждая специфический АГ. Суспензию центрифугируют 15 мин при 3500 мин- 1 из надосадочной жидкости, которая представляет собой материал для исследования на наличие АГ, готовят 2-кратно возрастающие разведения от 1:2 до 1:64 и используют для исследования в РСК.

ИФА. В ИФА специфическое окрашивание АГ в клетках мозга павших от бешенства животных выявляют как в свежевзятых, хранившихся в глицерине, а также в пробах, хранившихся без глицерина при 20°С 8-18 ч. Данный тест пригоден для рутинной диагностики бешенства у животных, для выявления АГ ВБ в тканевых парафиновых срезах при фиксации препаратов 10%-ным р-ром формалина с рН 5,3 и последующей обработки препаратов, заключенных в парафин, пепсином.

В отличие от РН на мышах и в культуре клеток ИФА позволяет выявить AT у животных в течение нескольких часов, ИФА — наиболее перспективный лабораторный метод обнару­жения AT и индикации самого вируса. Экспресс-методом диагностики бешенства является тех­ника захвата и метод ИФ для выявления АГ ВВ. Доказано, что метод выявления АГ ВБ в парафинизированных срезах пероксидазо-антиперокисдазным методом значительно пре­восходит метод ИФА. В 1987 г. создан набор для быстрой энзимиммунодиагностики бешенства (RREID), приемлемый для эпидемиологических и лабораторных исследований.

РН. Используется редко. Рекомендуется модификация с разведением ВБ и постоянной дозы γ-глобулина. ИН 2 указывает на АГ специфичность выделенного вируса.

Вариантная идентификация с помощью монАТ. С помощью монАТ к гликопротеинам ВБ селектированы АГ варианты, среди которых выделены фенотипически термола­бильные (авирулентные) варианты. При использовании 2-х групп монАТ показано, что штаммы дикования отличаются от шт. Fixe (Пастера), CVS, Flury HEP, ERA и «утиных» штаммов по АГ детерминантам. Изучение с помощью монАТ 7-ми штаммов, выделенных от больных Б людей, позволило выявить определенные отличия их от вакцинного штамма в отношении АГ детерминант.

Общепризнано, что AT отличия между дикими штаммами удается обнаружить, исполь­зуя монАТ против нуклеокапсидного AT N, которые реагируют с цитоплазматическими включениями зараженных вирусом клеток; против гликопротеина (G АГ), которые реаги­руют с мембранами инфицированных клеток, лизируют эти клетки в присутствии компле­мента и нейтрализуют вирус. В связи с возможной АГ вариабельностью поверхностного гликопротеина ВБ из различных географических зон в качестве протективного АГ исполь­зовали рибонуклеопротеин, характеризующийся консервативностью АГ структуры. Таким образом, не только G белок, но и РНП ВБ обладают протективной активностью.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Эти методы для бешенства нетипичны, поскольку используются только с целью проверки поствакцинального иммунитета. Для обнаружения и титрования поствакцинальных AT ис­пользуют РН, которую ставят общепринятым методом. В качестве АГ используют фиксиро­ванный ВБ. РН на клетках ВНК-21 была более чувствительной, чем непрямая ИФ при выяв­лении AT в сыворотках вакцинированных лис. Кроме того, предложены РТГА и ELISA.

РТГА. Пока еще не нашла широкого применения в диагностической практике из-за на­личия в сыворотках крови неспецифических ингибиторов, к которым ВБ высокочувствите­лен, а главное, ГА АГ, не подвергавшиеся достаточной очистке, обладали низкой чувстви­тельностью. Для приготовления ГА АГ ВБ предложено использовать шт. Москва, выращен­ный в культуре клеток ВНК-21, после его обработки сапонином с последующей очисткой и концентрированием. ГА отделяют от других компонентов вириона ультрацентрифугирова­нием. Полученный препарат имел степень очистки 99,92%, обладал высокой ГА активно­стью (1:128), хорошо сохраняющейся в течение 1 мес при рН 5-9.

Перед постановкой РТГА следует проводить умеренную 2-кратную трипсинизацию гу­синых эритроцитов для их сенсибилизации. При использовании 0,25%-ной взвеси трипси-низированных эритроцитов (лучше 10 7 клеток в 1 мл) чувствительность РТГА повышается в 4 раза. Для разбавления АГ и сывороток применяют боратно-солевой р-р (рН 9) с добавле­нием 0,4% бычьего сывороточного альбумина. Взвесь эритроцитов готовят в солевом р-ре с кислым рН, чтобы после соединения со смесью вируса и сывороток, рН которой 9, оконча­тельный рН установился бы в пределах 6,2. После внесения в лунки суспензии эритроцитов панель встряхивают, заклеивают прозрачной пленкой и ставят на лед. Результаты РТГА учитывают через 40-50 мин, а с эритроцитами 2-дн цыплят или макаки-резус — через 1-1,5 ч.

Разработан радиоиммунологический анализ, основанный на способности AT связы­ваться с меченым 125 1-АГ ВБ. Меченый IgG, выделенный из антирабической гипериммун­ной сыворотки, можно применять для обнаружения АГ ВБ твердофазным РИА. Лучшие ре­зультаты получены при использовании фосфатно-солевого р-ра (рН 6,0) с ионной силой 0,01 М и меченого IgG с активностью 200-250 тыс. имп./мин.

Твердофазный конкурентный РИА применим для выявления антирабических AT в сы­воротке и гибридомных супернатантах.

Дифференциальная диагностика. Необходимо исключить болезнь Ауески, при кото­рой больные животные неагрессивны, не бывает извращения аппетита. У собак исключают нервную форму чумы. Подозрение на бешенство может возникнуть при инфекционном энцефаломие­лите лошадей. Комплекс лабораторных исследований позволяет поставить точный диагноз на бешенство. Предложен новый метод дифференциации различных штаммов ВБ, основанный на рестриктазном расщеплении продуктов амплификации в ПЦР сегмента гена N.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

1. Биохимический анализатор Catalyst One компании IDEXX на котором выполняется биохимия крови животных и электролитов по 32 показателям, так же С-реактивный белок, фруктозамин, гормон щитовидной железы Т4. В основе этого биохимического метода лежит «технология сухого слайда».

Биохимический анализ крови в ветеринарной клинике «кентавр» с использованием «технологии сухого слайда» выполняется круглосуточно. Время выполнения анализа от 15 минут.

2. Ветеринарный гематологический анализатор. Общеклинический анализ крови выполняется за 10 минут на современном лазерном анализаторе ProCyte Dx. с 5-уровневой дифференциацией клеток крови и подсчетом ретикулоцитов.

3. Ветеринарный анализатор газов и электролитов крови. С его помощью определяются калий, натрий, хлор, pH, PCO2, HCO3, aniongap (аннионная разница), tCO2, PO2, SO2. в течении 15 минут.

Если биохимический, общеклинический анализ крови животных выполняется давно и успешно с целью диагностического обследования, то рутинный анализ электролитов и газов крови начал применяться в ветеринарных клиниках только последние несколько лет. До этого времени не было подходящих аппаратов, и ветеринарные специалисты недостаточно понимали актуальность данного метода диагностики.

Прежде всего, надо понять, что анализ электролитов и газов крови — это, по существу, определение основных элементов Na, K, Cl и кислотно-щелочного состояния крови. При различных патологических состояниях и болезнях собак, кошек (почечная недостаточность, отравления, желудочно-кишечные нарушения, инфекции, травмы и при многих других), рН крови, электролиты, концентрация углекислого газа, кислорода и других показателей меняется. И при многих этих заболеваниях необходимо внутривенно вводить растворы, то есть ставить капельницы.

Определение электролитного и кислотно-основного состояния крови позволяет вводить именно те препараты внутривенно, которые необходимы при конкретном заболевании. То есть, по существу, — правильно ставить капельницы, исходя из анализа электролитов и газов крови. Так же определение Na, K, Cl, кислотно-щелочного состояния крови собак, кошек дает ветеринарным врачам ценную диагностическую информацию о состоянии организма при многих заболеваниях.

4. Мочевой анализатор — выполняется общий анализ мочи. Отдельно выполняется микроскопия в моче для выявление мочевого песка, камней, клеток. Анализ мочи у кошек и собак необходим при различных заболеваниях мочевыделительной системы. К ним относятся болезни почек, мочевого пузыря, мочекаменная болезнь собак и кошек и др.

5. Анализатор желчных кислот и гормонов. Анализ желчных кислот необходим при заболеваниях печени у собак и кошек. Желчные кислоты крови у животных необходимо определять при подозрении на портосистемный шунт печени, гепатозе, гепатите, жировой дистрофии печени

В ветеринарной клинике «КЕНТАВР» есть все необходимое лабораторное оборудование для быстрого исследования анализов ваших животных и как следствие, постановки более точного диагноза, что крайне важно в экстренных случаях и для тяжело больных пациентов.

Так же в нашей лаборатории можно провести необходимые исследования крови, для плановых предоперационных животных, назначенные вашим лечащим врачом.
Современное оборудование лаборатории позволяет сделать экспресс — исследования крови и время ожидания результатов составляет всего 20-30 минут.

• Постановка точного диагноза.
• Выявление скрытых заболеваний животного.
• Контроль течения заболевания и лечения животного.
• Диспансеризация (желательно проводить 1 раз в год любому животному).

• ОКА крови (Общий клинический анализ крови) — это один из основных видов анализов, проводимых перед введением животного в наркоз, во время лечения вашего питомца, диагностики заболевания и ее течения.
• Биохимический анализ крови 10, 17,25 показателей — этот анализ позволяет иметь представление о работе внутренних органов печени, почек и др. и состоянии обмена веществ.
• ОКА мочи (Общий клинический анализ мочи) — показывает наличие воспаления в мочевыводящих путях, изменения в работе почек и органах мочеполовой системы.
• Анализ (мазок) на пироплазмоз (Бабезиоз) — позволяет определить в периферической крови возбудителя заболевания.
• Анализ газов и электролитного состава крови — концентрация газа в крови позволяет оценить дыхательную функцию организма, его кислотно-щелочной баланс, а так же оценить электролитный состав крови.

В наше время важна каждая минута и эта минута может спасти жизнь!

источник

Бешенство (Rabies) – инфекционное заболевание, опасное для животных и человека. Данное заболевание встречается во всех странах мира. Характеризуется 100% летальным исходом.

Возбудитель – РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Рабдовирусов. Данный вирус имеет тропность к нервной ткани. В наибольших титрах обнаруживается в головном мозге больных животных. Кроме того, находят вирусы и в спинном мозге, слюнных и слезных железах.
Различают:

1. «дикий» вирус, который циркулирует в естественных условиях и характеризуется высокой патогенностью для человека и животных.
2. И «фиксированный», полученный в лабораторных условиях, не патогенный для животных и человека при экстраневральном введении.

Вирус бешенства не устойчив к высоким температурам: при 60С о инактивируется через 10 минут, при 100С о — почти мгновенно. Но вот в замороженном мозге может сохранять жизнеспособность до нескольких месяцев. Также сохраняется несколько месяцев в гниющих тканях. Устойчив к действию растворов йода. Но быстро инактивируется дезрастворами на основе формалина, хлорамина и щелочи.

К вирусу бешенства восприимчивы все теплокровные. Наибольшей чувствительностью обладают дикие собачьи (такие как: лисицы, песцы, волки, енотовидная собака, шакалы), куньи, грызуны кошки. Менее восприимчивы птицы.

В дикой природе резервуарами вируса бешенства являются хищные животные и летучие мыши, в городе — бродячие собаки.
Источником заражения являются больные животные, у которых вирус выделяется со слюной. Наличие вируса в слюне отмечают уже за 8-10 дней до появления признаков болезни. Заражение происходит при укусе, при попадании слюны на слизистые оболочки или на поврежденные участки кожи.

После проникновения в организм вирус начинает размножаться в месте внедрения. И через 24 часа начинает проникать в нервную ткань. В нервах он продвигается в направлении спинного и головного мозга со скоростью 7 см/день. Добравшись до мозга вирус начинает усиленно размножаться, затем по нервам вирус попадает во все органы и в первую очередь в слюнные железы и глаза. Инкубационный период (от момента заражения до появления клинических признаков) составляет в среднем 14 – 60 дней, иногда может достигать 6-12 месяцев.
Клинические признаки.

Различают 3 вида течения болезни.

1. Классическое трехэтапное течениеили буйная форма. Вначале отмечается изменение поведения животного (1 этап), оно становится очень ласковым или наоборот пугливым, необщительным. Этот этап может длиться от нескольких часов до 4 дней. Затем наступает следующий этап — возбуждения (2 этап), который продолжается 1-4 дня. Животные становятся агрессивными, склонны к блуждающим передвижениям и нападением на животных и людей. Развивается анорексия, беспокойство, слюнотечение. И за 3-4 дня до смерти развиваются паралитическая, или депрессивная, стадия, характеризующаяся прогрессирующими параличами.
2. Паралитическая, или тихая, форма. Характеризуется развитием параличей без предшествующей стадии возбуждения. При этой форме отмечают слюнотечение, отвисание нижней челюсти, затрудненное глотание, анорексию. Затем развивается паралич мышц туловища и конечностей. Смерть животного наступает через 3-4 дня.
3. «Атипичное бешенство». Это хроническое субклиническое (без развития симптомов) течение болезни, которое может длиться до 3 месяцев.

Предварительный диагноз ставят на основании анамнеза и клинических симптомов. При подозрении на бешенство после смерти животного в лабораторию направляют труп животного. При невозможности этого – голову или головной мозг. При взятии материла необходимо соблюдать строгие меры предосторожности!
Лабораторная диагностика бешенства включает в себя несколько методов исследования.

1. Обнаружение телец Бабеша-Негри. Для постановки диагноза на бешенство в лаборатории проводят гистологическое исследование головного мозга умершего животного. Отмечают наличие рабических узелков в структурах дна четвертого желудочка мозга и наличие в головном мозге телец Бабеша-Негри (цитоплазматические эозинофильные включения, состоящий из частиц вируса бешенства). Их можно обнаружить в гипокампе, корковых и стволовых структурах мозга, в мозжечке и дорсальных ганглиях спинного мозга и эпителии роговицы глаза. Однако если тельца Бабеша-Негри не обнаруживаются, бешенство не исключается.
2. Выявление антигена методом флюоресцирующих антител (МФА) или методом иммунофлюоресцентного анализа (ИФА). Кроме этих реакций в настоящее время идет разработка нового метода диагностики в полимеразной цепной реакции (ПЦР).
3. Биологическая проба с заражением новорожденных мышат вирусом из взвеси головного мозга, слюнных желез.

Согласно законодательству РФ, в случаях покусов людей собаками или другими животными (кроме явно больных бешенством) пострадавшие должны немедленно обратиться в медицинские учреждения. А покусавшие их животные должны быть доставлены в ближайшее государственное ветеринарное учреждение для осмотра специалистами и карантина в течение 10 дней.

Для профилактики распространения бешенства предусмотрена ежегодная обязательная вакцинация собак и кошек антирабическими вакцинами.

В настоящее время для ввоза животных в ряд стран требуется документ подтверждающий количество валидных антител к вирусу бешенства. Для эффективной защиты от бешенства минимальный уровень вируснейтрализующих антител в крови должен составлять не менее 0,5 МЕ/мл. Данный вид исследования не является диагностическим и предназначен только для определения напряженности иммунитета против бешенства.
В Москве сдать кровь для определения титра антител к вирусу бешенства можно в Центре Молекулярной Диагностики, расположенном на Звенигородском шоссе, д.5. ЦДМ получил международную аккредитацию на проведение данного теста и выдает Международные сертификаты, действительные в течение всей жизни животного при соблюдении сроков ревакцинации.

Определение титров антител проводят не ранее чем через 30 дней после вакцинации. Поэтому если Вы планируете выезжать со своими питомцами в страны ЕС или другие страны, то необходимо заранее позаботиться о вакцинации и сдаче крови на этот тест (результаты выдаются через 7-14 дней).

Врач-лаборант ветеринарной лаборатории
«БиоВетЛаб» Лазарева Н.В.

Микоплазмозы – группа инфекционных заболеваний, вызываемых прокариотными одноклеточными микроорганизмами семейства Mycoplasmataceae.

Цистит (лат. Cystitis) – это воспаление слизистой оболочки мочевого пузыря, встречающееся у всех видов животных. Чаще воспалительные заболевания нижнего мочевого тракта регистрируют у кошек, чем у собак, при этом цистит у собак, вызванный бактериальной причиной, встречается чаще, чем у кошек.

источник

Методы выявления антигенов. При бешенстве для экспресс-диагностики можно использовать методы флуоресцирующих антител (МФА), реакции преципитации (РП) в агаровом геле, методы иммуноферментного анализа (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для прижизненной диагностики бешенства у человека требуется несколько тестов.

Определение антител к антигенам вируса бешенства. Выявление антител в сыворотке крови или в цереброспинальной жидкости — важный метод диагностики. Серологическое исследование рабиес-специфических антител проводится в сыворотке крови для определения пред- и постэкспозиционной вакцинации и определения времени бустерной иммунизации с целью повышения иммунного ответа.

Выделение вируса. Для выделения и идентификации вируса используют метод биопробы на белых мышах. Исследуемый материал суспендируют в физиологическом растворе, содержащем антибиотики и эмбриональную сыворотку крупного рогатого скота. Суспензия вводится интрацеребрально белым мышам массой 5–6 г. Для доказательства развития инфекции за мышами ежедневно наблюдают до 30-го дня после инокуляции. Мыши, у которых за этот период развивается заболевание, немедленно подвергаются эвтаназии, и ткани мозга исследуются методом прямой МФА.

Преимущество данного подхода состоит в возможности определить малые количества вируса бешенства в материале. Недостаток метода — необходимость многодневного (7–18 суток) ожидания между инокуляцией и проявлением первых признаков заболевания. Для сокращения инкубационного периода применяют мышей-сосунков. Для экспресс-диагностики можно использовать мышей в возрасте менее 3 дней: у мышей, забитых через 3 дня, уже выявляется антиген вируса в мозге, который можно выявить методом МФА.

Такой метод выделения вируса практикуется в качестве подтверждающего диагностического теста при отрицательных результатах по выявлению антигена и телец Бабеша – Негри и в случае укуса человека подозрительным на бешенство животным. Он обеспечивает надлежащую чувствительность и специфичность, т. е. расценивается на уровне диагностической значимости метода прямой иммунофлуоресценции. Кроме того, этот метод является основным для идентификации вариантов вируса и перспективен для разработки диагностических реагентов.

Выделение и идентификация вируса на культуре клеток. Основным недостатком выделения вируса при инфицировании лабораторных животных является длительность метода. Избежать этого можно при использовании культур клеток. Обычно для этих целей используют культуру клеток нейробластомы мышей, если нужно исследовать ткани головного мозга. Мозг суспендируют в культуральной питательной среде, суспензию наносят на монослой культуры клеток и инкубируют от одного до нескольких дней.

Чувствительность данной культуры к вирусу можно повысить обработкой ее ДЕАЕ декстраном. Монослой клеток затем отмывают, фиксируют на холоде ацетоном или смесью формалина с метанолом и исследуют методом иммунофлюоресценции. Если животное было инфицировано вирусом бешенства, то в монослое культуры клеток выявляются цитоплазматические включения антигена вируса бешенства.

Показано, что на клетках мышиной нейробластомы линии Na C1 300 в сочетании с МФА антиген вируса бешенства можно выявить через 2 дня. Чувствительность метода сравнима с методом изоляции вируса на мышах.

Хотя вирус бешенства обладает облигатной нейропатогенностью in vivo, он способен инфицировать широкий круг клеток-хозяев in vitro, что можно использовать для исследования других тканей и органов на наличие вируса бешенства. Установлено, что вирус бешенства размножается в клетках ВНК-21 и Vero, в первичных клетках куриных эмбрионов или почек хомяка. Показано, что адсорбция вируса и внедрение его в клетку происходят в течение 7 часов. Через 24–48 часов внутри клетки образуются новые вирусные частицы, через 72 часов происходит почкование их из клеточной оболочки в межклеточное пространство.

Для экспресс-диагностики бешенства могут быть использованы:

а) метод МФА — для выявления антигена вируса бешенства в отпечатках роговицы или заднего отдела шеи больного, содержащего луковицы волос;
б) метод ПЦР — для выявления РНК вируса в биоптатах тканей, слюне, спинномозговой или слезной жидкости;
в) метод ИФА — для выявления специфических антител (антигена) у больных с типичным или атипичным течением.
г) метод биопробы — для выделения вируса на ранних этапах заболевания или для выявления антител в крови или спинномозговой жидкости на поздних стадиях заболевания. Для экспресс-диагностики используется комплексный метод (биопроба + МФА), заключающийся в заражении исследуемым материалом 2-дневных новорожденных мышей и исследования их мозга на 3–4-е сутки в МФА.

Выбор методов прижизненной диагностики в значительной мере зависит от стадии болезни: метод, основанный на выявлении антигенов, как правило, обладает высокой чувствительностью в конце инкубационного периода, в течение первых нескольких дней заболевания, в то время как вируснейтрализующие антитела обычно появляются в спинномозговой жидкости и сыворотке крови после 7-10 дней от начала болезни.

Реакция иммунофлюоресценции. Метод основан на использовании антител, связанных с красителем, например, флюоресцеинизотиоцианатом. РИФ широко применяется для выявления вирусных антигенов в материале больных и для быстрой диагностики.

Метод обладает наиболее высокой степенью чувствительности, он положен в основу экспресс-диагностики и позволяет обнаруживать вирусные антигены в течение нескольких часов

Основные достоинство МФА: быстрота выполнения, высокая специфичность (100%). Затрачиваемое время на диагностику заболевания с его помощью — менее одного дня. Применяются прямой и непрямой варианты МФА.

Прямая иммунофлуоресценция остается наиболее предпочитаемым методом диагностики бешенства. Предметные стекла, содержащие мазки-отпечатки тканей мозга, или стекла с монослоем культуры тканей фиксируют в ацетоне в течение 1–4 часов. Затем препараты высушивают и обрабатывают флуоресцирующими поликлональными антинуклеокапсидными антителами (иммунофлуоресцентный реагент).

Этот реагент представляет собой конъюгат, приготовленный из специфических поликлональных антител IgG класса к нуклеокапсидному антигену вируса и флуоресцеина изоцианата (ФИТЦ). Специфические антитела получают путем гипериммунизации животных (кроликов, хомяков или лошадей) смесью эпитопов нуклеокапсида вируса.

В настоящее время для этих целей все шире используют мышиные моноклональные антитела к нуклеокапсиду вируса бешенства. После 30-минутной инкубации при 37° С диагностические препараты многократно отмывают физиологическим раствором и дистиллированной водой.

Антитела, меченные ФИТЦ, фиксируются только в местах локализации вирусных нуклеопротеидных антигенов. Затем препараты высушивают на воздухе и исследуют методом световой микроскопии, используя в качестве источника света ксеноновую лампу и соответствующий фильтр.

При непрямом варианте антиген сначала соединяют с неокрашенной специфической иммунной сывороткой. Затем на образовавшиеся нефлуоресцирующие комплексы антиген-антитело воздействуют меченой флуорохромом иммунной сывороткой, содержащей антитела к белкам специфической сыворотки. Непрямой вариант МФА наряду с выявлением антигена позволяет количественно определять антитела в исследуемой сыворотке путем соответствующего ее разведения.

Меченые ФИТЦ образования в клетках разных тканей выявляются в виде желто-зеленого флуоресцентного окрашивания на темном фоне (в виде округлой или овальной формы внутрицитоплазматических включений).

Иммуноферментный анализ. Метод основан на принципе сорбции белков на твердой фазе с последующим образованием комплексов антиген-антитело, выявляемых субстрат-индикаторным раствором. Добавляемый в лунки антиген специфически связывается с антителами. На слой антигена наносят исследуемые сыворотки в нужных разведениях. При наличии в них специфических антител последние связываются с антигеном. Для выявления связывания на слой антител наносят иммуноглобулин против глобулинов сыворотки людей, коньюгированный с пероксидазой хрена. Количество сорбирующего коньюгата пропорционально количеству связавшихся с антигеном антител сывороток людей. Это можно определить, используя индикаторный раствор (ортофенилилендиамин + перекись водорода), компоненты которого в результате действия пероксидазы коньюгата окрашивают жидкость в коричнево-желтый цвет. При обследовании неясных случаев применение ИФА дополнительно к методам РП или РСК позволяет увеличить достоверность лабораторной диагностики бешенства, благодаря большой чувствительности этого метода. Метод позволяет обнаруживать инфекционные и дефектные частицы.

Для определения антирабических антител в процессе вакцинации можно применять непрямой метод ИФА, используя в качестве антигена очищенный вирус, а для определения антител класса IgG в человеческой сыворотке — А-белок стафилококка, связанный с пероксидазой хрена. Результаты ИФА сравнимы с полученными в тестах вирусной нейтрализации на мышах. Метод позволяет выявлять присутствие IgМ в начале процесса иммунизации.

Иммуноферментные методы — весьма перспективны для выявления нуклеокапсидного антигена вируса при посмертной диагностике в тканях головного мозга. В их числе, например, быстрый иммуноферментный метод диагностики бешенства, основанный на приготовлении плашек сенсибилизированных антителами IgG изотипа к нуклеокапсиду первого серотипа, разведенных в карбонатном буфере.

Материал для исследования гомогенезируют в буфере или культуральной среде, осветляют центрифугированием, вносят в лунки и инкубируют в плашках. Фиксированный специфическими антителами нуклеокапсидный антиген идентифицируют добавлением пероксидазного конъюгата с антинуклеокапсидными противорабическими антителами иной видоспецифичности и хромогенного субстрата. Чувствительность метода составляет 0,8–1,0 нг/мл.

Этим методом можно выявлять антигены вирусов различных серотипов. Применение конъюгатов нуклеокапсидспецифичных антител, меченых биотином, повышает чувствительность метода до 0,1–0,2 нг/мл.

Методом ИФА успешно выявляется антиген нуклеокапсида [139], но материал, даже разложившийся, не должен фиксироваться формалином.

Метод полимеразной цепной реакции. Для экспресс-диагностики вируса бешенства и идентификации лиссавирусов наиболее удобен метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод ПЦР — самый надежный и быстрый для выделения вирионной РНК из любых проб, содержащих вирус в низкой концентрации. С его помощью можно создать много копий РНК вируса. Этот метод используется для подтверждения результатов МФА и для определения вируса в слюне, луковицах волос заднего отдела шеи и головы.

ПЦР основана на принципе естественной репликации ДНК. Суть метода заключается в многократном повторении циклов синтеза (амплификации) вирусоспецифической последовательности ДНК с помощью термостабильной Taq ДНК-полимеразы и двух специфических затравок, так называемых праймеров.

Каждый цикл состоит из трех стадий с различным температурным режимом. В каждом цикле удваивается число копий синтезируемого участка. Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат в качестве матрицы для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации, что позволяет за 25–35 циклов наработать достаточное число копий выбранного участка ДНК для ее определения, как правило, с помощью электрофореза в агарозном геле.

Особенно высокая чувствительность ПЦР при использовании праймеров, комплементарных N-гену, когда удается выявлять РНК вируса в пробах, содержащих вирус в титре 10 МЛД50. Методом ПЦР можно выявлять РНК вируса даже в разложившемся патологическом материале.

В настоящее время разработаны и широко используются на практике подтверждающие (конфирматорные) тесты, такие как ПЦР в обратно-транскриптазном исполнении (ОТ-ПЦР). Метод ОТ-ПЦР — высокочувствительный и наиболее эффективный. РНК экстрагируется из тканей инфицированного вирусом органа, транскрибируется в кДНК, которая затем амплифицируется методом ПЦР. Для постановки ОТ-ПЦР необходимы праймеры, полученные к консервативным областям генома вируса бешенства. Обычно используются гены, кодирующие нуклеопротеин или N-белок.

Метод ПЦР высокоспецифичен и очень чувствителен. Является одним из наиболее точных тестов детекции рабического антигена, позволяет диагностировать бешенство даже при наличии в материале хотя бы одного вириона. В основе теста лежит комплементарное достраивание РНК-матрицы, осуществляемое in vitro с помощью фермента РНК-полимеразы. В последние годы ПЦР находит все более широкое применение для диагностики и мониторинга вирусных инфекций. Однако методика проведения сложна, дорогостояща и пока недостаточно унифицирована для рутинного применения.

Цитологические методы в настоящее время имеют ограниченное диагностическое значение, но при ряде инфекций по-прежнему должны применяться. Исследуются материалы аутопсии, биопсии, мазки, которые после соответствующей обработки окрашиваются и анализируются под микроскопом. При бешенстве — это выявление включений в цитоплазме клеток (тельца Бабеша – Негри).

Выделение вируса. Выделение вируса может быть необходимым для подтверждения результатов тестов по определению антигена и для более детальной характеристики изолятов. И хотя этот метод является одним из самых старых и трудоемких методов диагностики, сегодня выделение вируса с последующей идентификацией с помощью одного из современных методов (ИФА с моноклональными антителами или ПЦР) является наиболее достоверным методом диагностики, т. н. «золотой стандарт».

Результативность методов диагностики бешенства может варьировать в зависимости от ряда факторов (стадии болезни, сроков забора материала, качества полученных проб, условий их хранения, опытности персонала, качества реактивов и др.). Если положительный результат подтверждает бешенство, то отрицательный не всегда свидетельствует об отсутствии болезни. Поэтому при бешенстве эксперты ВОЗ рекомендуют использовать несколько тестов, особенно МФА в сочетании с биопробой на новорожденных (2–3 дневных) белых мышах.

Все работы с материалом, предположительно содержащим вирус бешенства, равно как и с животными, подозрительными на бешенство, должны проводиться с соблюдением мер личной безопасности. Медицинские работники и ветеринарные врачи должны работать в халатах, перчатках, масках.

По окончанию работы боксы обрабатывают 3% раствором перекиси водорода.

Флаконы, ампулы и инструменты, а также оставшиеся материалы, содержащие вирус бешенства, и всю посуду после работы обеззараживают автоклавированием в течение 1 часов при 1,5 атм (режим «убивки»).

Средства индивидуальной защиты обеззараживают кипячением или автоклавированием. Рабочую поверхность стола и руки обеззараживают дезраствором (0,5% раствор хлорамина).

источник