Как проводятся анализы на бешенство

Далеко не каждый человек знает, как себя правильно вести после укуса животного. Некоторые отмахиваются от этой ситуации. Но промедление может стоить человеку жизни. Такое заболевание, как бешенство, не лечится. Однако спасти себя можно, вовремя проведя вакцинацию. Если взрослого или ребенка укусило животное, нужно узнать, как и где сдать анализ на бешенство у человека. Это будет подробно рассмотрено далее.

Анализ крови на бешенство у человека является практически единственным способом вовремя распознать наличие болезни в организме. Чтобы понимать, насколько серьезными могут быть последствия, нужно рассмотреть особенности этого заболевания. Бешенством называется недуг, вызванный вирусной инфекцией. Она поражает головной, спинной мозг. Без своевременного лечения болезнь приводит к смерти.

Бешенству подвержены все млекопитающие в природе. Вирус передается от одного организма к другому через биологические жидкости. Чаще всего это слюна. Люди в большинстве случаев заражаются вирусом в момент укуса животного. По статистике, чаще всего это бывают собаки, кошки, еноты, кролики, ежи, лисы, летучие мыши и т. д. Практически любое дикое или домашнее животное может быть носителем вируса.

Анализ на бешенство у человека после укуса позволяет выявить вирус еще до появления характерных симптомов. Стоит отметить, что даже если животное не имеет признаков бешенства, это еще не значит, что оно не является носителем инфекции. На первой стадии у него появляется усиленное слюноотделение. При этом появляется четкая боязнь воды. Настроение быстро меняется от угнетенного до агрессивного.

По статистике, в мире ежегодно от этого недуга погибает 55 тыс. человек. В нашей стране за последние 8 лет от бешенства умерло 75 человек. Проблема в том, что заболевание не поддается никакому лечению. Если не были предприняты меры сразу после укуса, смерть неизбежна. Даже при попадании слюны больного животного на слизистые оболочки вирус начинает развиваться в организме.

Есть ли анализ на бешенство у человека? Это довольно сложная диагностическая процедура, которая должна быть дифференцирована от других заболеваний. В Московской области, по статистике, основными носителями вируса являются дикие ежи и лисы. Заражение происходит в момент укуса человека, который собирает ягоды или грибы в лесу, а также людей на пикнике. Часто такие звери заражают бродячих собак или домашний скот. Уже от них вирус может передаваться человеку.

В 60 % случаев человек заражается от собак. Гораздо реже вирус передается от кошек (10 % случаев). В 24 % случаев бешенством заражаются из-за укуса лисы. Причем животное может выглядеть нормальным. Оно становится заразным за 3-10 дней до появления первых признаков бешенства.

После попадания в организм вирус стремительно распространяется по нервным стволам, достигая центральной нервной системы. Далее он по тем же путям попадает в периферийные участки. В результате поражается вся нервная система. Вирус по нервным стволам попадает и в слюнные железы, начиная выделяться со слюной. Скорость, с которой он продвигается в организме, составляет около 3 мм/ч.

Активно размножаясь в нервных тканях, вирус вызывает их отек, некротические изменения и кровотечения. Симптомы появляются постепенно. При появлении первых признаков бешенства у человека остается максимум 20 дней до наступления летального исхода. При этом в таком состоянии повлиять на болезнь нельзя. Это необратимый процесс. Только пока болезнь не успела достигнуть центральной нервной системы, ее можно победить путем введения специальных препаратов.

Анализ на бешенство у человека после укуса собаки или иного животного нужно сдать как можно раньше. Однако порой приходится предпринимать срочные меры до того, как будут получены результаты теста. Это заболевание не терпит промедления. Инкубационный период составляет от 30 дней до 3 месяцев. Причем этот процесс индивидуален. Известны случаи, когда инкубационный период длился всего 12 дней или растягивался до 1 года. Это зависит от места укуса или попадания вируса в организм.

Болезнь протекает в 3 стадии. На каждой из них появляются определенные симптомы. Первая стадия называется депрессией. В области укуса появляется жжение, зуд, боли, хотя рана может уже даже зажить. Иногда в этом месте возникает новое воспаление. Температура тела поднимается до 37,2 ºС. При этом появляются первые признаки психических нарушений. Человек чувствует страх, тревогу, тоску. Он замкнут, плохо спит. Эта стадия длится всего до 3 дней. Затем недуг переходит в стадию возбуждения.

На втором этапе протекания болезни появляется повышенная возбудимость и страх воды. При попытках пить глотательные мышцы болезненно сокращаются, наступает приступ удушья. Страх постоянно усиливается. В результате даже при упоминании о воде человек чувствует приступ спазма дыхательных и глотательных мышц.

На этой стадии человек остро реагирует на любой возбудитель. Даже из-за дуновения воздуха в лицо могут начаться судороги. Зрачки при этом расширены. Наблюдается сильное слюно- и потоотделение. На пике приступа человек чувствует ярость, агрессию, пытаясь навредить окружающим. Развиваются галлюцинации. Иногда наступает остановка дыхания и сердца. В промежутках между приступами сознание проясняется. Этот период длится 2-3 дня. Если за это время во время приступа не наступила смерть, бешенство переходит в третью стадию.

На этом этапе наступают параличи. Это говорит о необратимых изменениях в коре головного мозга, подкорковых образованиях. Наступает снижение двигательной и чувствительной функции. Раньше этот период ошибочно принимали за улучшение состояния из-за прекращения судорог и прочих проявлений второй стадии. Однако это далеко не так. Температура повышается до критической отметки 42 ºС. Спустя максимум сутки смерть наступает из-за паралича дыхательного центра и сердца. Чаще всего от момента появления первых симптомов до смерти проходит всего 5-8 дней.

Сдать анализ на бешенство у человека нужно после посещения инфекциониста. Диагностика проводится комплексно. Для этого проводится забор крови, мочи и тканей, на которые попала слюна. У человека, который заболел бешенством, в крови обнаруживается лимфоцитарный лейкоцитоз. При этом наблюдается анэозинофилия. Антиген к вирусу бешенства обнаруживается в отпечатках, взятых с поверхности роговой оболочки глаз.

Если была констатирована смерть, у человека берут анализ тканей аммонового рога. Здесь при наличии вируса обнаруживают тельца Бабеша-Негри.

Стоит отметить, что при диагностике наблюдаются схожие с другими заболеваниями проявления. Нужно определить, вызвано подобное состояние бешенством или такими заболеваниями, как столбняк, истероневроз, белой горячкой, отравлением стрихнином или атропином и т. д. Есть определенные отличия у подобных состояний.

Анализ крови на бешенство у человека позволяет избежать постановки неправильного диагноза. Это позволяет спасти ему жизнь при обнаружении других заболеваний. Если же диагноз подтвердится, помочь человеку будет невозможно.

Из-за незнания многие люди поступают неправильно после укуса животным. Вместо посещения врача-инфекциониста они стремятся сдать анализы. Стоит отметить, что даже в самых известных клиниках эту процедуру не проводят. Например, не получится сдать анализ крови на бешенство у человека в «Инвитро». Здесь человеку сразу же предложат обратиться к инфекционисту.

Существует ряд частных и государственных клиник, которые проводят подобные анализы. Диагностика очень специфична. В данном случае она не позволяет сначала выявить заболевание, а потом приступить к лечению. По этой причине анализ на бешенство у человека в «Инвитро» и прочих известных лабораториях сдать не получится. Лечение назначают в любом случае, если имеет место факт укуса животным.

Стоит отметить, что хоть сдать анализ на бешенство у человека в «Инвитро» не получится, можно выполнить подобную процедуру для животного. Если этот зверь домашний, у хозяина обязательно берут номер телефона и наблюдают за состоянием животного. Также проводят специальные анализы для таких питомцев. Чаще всего наблюдать за животным, которое укусило человека, невозможно (зверь часто убегает, найти его становится невозможно).

При появлении характерных симптомов врач назначит пройти обследование. Если человек не предпринял своевременных действий после укуса или попадания слюны на слизистые, открытые раны, диагностика позволит лишь установить факт развития этого недуга в организме.

Существует несколько вариантов, где сдать анализ на бешенство человеку. После посещения инфекциониста в случае необходимости следует обратиться в частную или государственную лабораторию. При появлении первых признаков болезни врач обязательно госпитализирует больного. Здесь у него берут на обследование кровь, мочу. Также обязательно проводится биопсия кожи с поврежденного участка.

Можно также сдать анализ в частной клинике. Например, подобную диагностику проводит в Москве «СитиЛаб». Стоимость анализа крови составляет около 350-380 руб. Стоимость анализа мочи составляет 350 руб. Стоимость взятия биоматериала оплачивается отдельно.

Также выявить вирус при появлении симптомов врачи могут при исследовании кожи, которая берется с затылка больного, из слезной, слюнной, спинномозговой жидкости.

Общий анализ крови позволяет исключить повышенный уровень СОЭ и лейкоцитарной формулы. Также определяются антитела, которые вырабатываются иммунитетом больного человека к возбудителю инфекции.

Могут быть взяты отпечатки с роговицы глаза. Одним из основных методов диагностики является проведение анализа ПЦР на исследование генетического материала вируса. При помощи электронной микроскопии исследуются ткани мозга.

Существуют и другие методы, которые применяются современной медициной при диагностике бешенства. Так, например, может быть назначена электроэнцефалограмма (ЭЭГ). Это позволяет оценить работу головного мозга, определить определенные отклонения в электрических потенциалах.

Анализ на бешенство у человека после укуса кошки, собаки или иного животного проводится в течение 7 рабочих дней. При этом правильный результат можно получить только после инкубационного периода заболевания. Поэтому нужно знать, как вести себя после укуса. Если такая неприятность произошла со взрослым или ребенком, нужно промыть рану проточной водой и обработать ее антисептиком.

Далее на поврежденную поверхность накладывается стерильная повязка. Пострадавший человек должен обратиться в больницу. Его осматривает инфекционист или травматолог. В этот же день пациенту вводится вакцина, которая способствует созданию иммунитета против бешенства. Пока вирус не успел проникнуть далеко, это позволяет эффективно бороться с ним.

Если животное, укусившее человека, домашнее, его наблюдают в течение 10 дней. При этом продолжается проведение вакцинирования. Препарат вводят каждому пациенту, который обратился за помощью к врачу, даже если травма произошла месяц или несколько месяцев назад.

Прежде чем будет сделан анализ на вирус бешенства у человека, проводится вакцинация. Препарат должен вводиться в соответствии с установленными правилами. Это позволяет сформировать иммунитет, предотвратив развитие болезни. Вакцина вводится в день обращения пациента к врачу, а затем на 3-й и 7-й день после контакта с животным. Если в течение 10 дней у домашнего питомца или дикого зверя не появились признаки бешенства, были проведены соответствующие анализы, которые не подтвердили наличие вируса в слюне, вакцинация прекращается.

Если наблюдение за животным невозможно или были выявлены признаки его инфицирования, вакцину продолжают вводить на 14-й, 30-й, 90-й день после контакта.

Кроме этого в место укуса вводят антитела, которые позволяют максимально быстро побороть вирус непосредственно в месте укуса. Этот метод применяется в первые часы после происшествия. Вещество нужно ввести не позднее, чем через 7 суток после контакта с животным.

Анализ на бешенство у человека не позволяет эффективно бороться недугом. Поэтому его проводят только в крайних случаях (при появлении характерных симптомов). Нужно знать, что есть люди, которые входят в группу риска. Для них обязательно проводится вакцинация раз в год.

Такие меры необходимо предпринимать жителям сельской местности, у которых есть непривитые животные. В группу риска попадают люди, путешествующие по развивающимся странам или просто выезжающие часто на природу, контактирующие с дикими зверями. К этой категории относятся охотники, звероловы, ветеринары, а также работники питомников и зоопарков. Вакцинацию проходят медицинские сотрудники, которые работают с вирусом в лаборатории.

Чтобы не потребовалось делать анализ на бешенство у человека или проходить вакцинацию, нужно придерживаться элементарных правил безопасности. Выезжая на природу с детьми, нужно объяснить малышам, как опасны могут быть дикие звери. Нужно отучить ребенка гладить бездомных котов и собак, прочих животных.

Если в доме живут коты, их не выпускают на улицу, чтобы избежать случайного заражения. Собак, которых выгуливают на улице, обязательно вакцинируют по всем правилам. Даже если человека укусило знакомое домашнее животное, нужно обратиться к врачу.

Рассмотрев особенности проведения анализа на бешенство у человека, можно понять, как правильно действовать после укуса или попадания слюны на слизистые. Это позволит избежать серьезных последствий.

источник

Бешенство представляет собой вирус, передающийся человеку через инфицированное животное вследствие укуса или путем попадания зараженной слюны. Данное заболевание не поддается лечению, ведь до сих пор медицина не нашла противодействие подобному заражению. Бешенство начинает проявляться только через несколько дней, летальный исход наступает через пару дней после начала заражения. Дабы не столкнуться с этой проблемой, можно предотвратить ее появление путем вакцинации. Так же прививка может оказать противодействие в первые же часы после укуса.

При укусе животным необходимо незамедлительно сдать анализ на бешенство. Данный вирус передается человеку от зараженного животного. Наиболее распространенные случаи заражения от диких не привитых животных (лисица, волк, мышь, енот) или домашних, которые не были привиты в течение года(собака, кошка, рогатый скот).

Заразиться от больного животного можно в процессе следующих обстоятельств:

во время укуса зараженного животного;
при попадании слюнных выделений на слизистую человека или поврежденные участки кожи. Это может быть рана или обычная царапина.

При любом виде контакта со слюной зараженного животного, необходимо незамедлительно обратиться в медицинское учреждение для проведения профилактических мер, так как лечению данный вид заражения не поддается. Не исключено заражение в процессы вдыхания воздуха или частиц пыли, которые содержат инфекцию, в медицинской практике есть случаи инфицирования в процессе обработки лисьих шкур. Контакт с фекалиями или мочой больного животного не грозит заболеванием, то же самое касается и неповрежденной кожи. Мясо без обработки не содержит в себе вируса, профилактика после употребления необработанного мяса не нужна.

Важно знать, что вирус бешенства не передается от людей к человеку, поэтому не нужно опасаться такого человека, нужно своевременно ему помочь.

Инфицирование не сопровождается симптомами мгновенно, для их выявления может понадобиться несколько дней, но на этой стадии любые действия по спасению будут уже бессмысленны. Инкубационный период в среднем бывает около месяца, но может достигать и года. Каким же образом проявляется бешенство? Наиболее выраженные признаки:

отек, зуд, покраснение на месте укуса животным;
лихорадка, повышение температуры тела;
отсутствие сил, постоянная усталость, недомогание;
частые головные боли;
нарушение нормального сна, бессонница;
обострение к зрительным и слуховым раздражителям;
судороги;
депрессивное настроение, чувство апатии;
постоянная смена страха и тревоги на агрессию и беспокойство;
расстройства в работе дыхательной системы и проблемы с глотанием;
учащение сердечного ритма, одышка;
увеличение слюноотделения;
неясность сознания, галлюцинации;
паралич конечностей или другой части тела.

Данный период представляет собой промежуток от заражения вирусом до момента появления первых признаков недуга. Он длиться в течение месяца, но диапазон составляет от пары дней до целого года. Такие случаи крайне редки и случаются один раз на миллион случаев.

Скорость развития инкубационного периода напрямую зависит от расположения инфекции к головному мозгу. Чем ближе данный вирус, тем быстрее наступит неминуемая гибель. Укус лица или плеча будет способствовать более быстрому развитию событий, инкубационный период в таком случае может наступить уже через пару дней. Этот период крайне важен для человека, потому что за это время нужно успеть сдать кровь и узнать результаты анализа на бешенство у человека. Оперативная вакцинация дает шанс на спасение жизни.

После первых видимых проявлений наступают более выраженные признаки заражения. Существует две разновидности бешенства, которое прогрессирует:

в большинстве случаев, в 80 из 100 наступает буйное бешенство;
тихое бешенство, его еще называют паралитическое. Оно встречается реже.

Заключительная стадия – острый неврологический период.

В период буйного бешенства у людей может наблюдаться несвойственное им гиперактивное поведение, которое сменяется относительным непродолжительным спокойствием. Люди в этот момент ведут себя странно. Могут проявляться следующие признаки данного типа:

возбуждение, часто граничащее с агрессией и озлобленностью. Человек может начать драку, наносить вред, не задумываясь о последствиях;
усиленное слюноотделение, неконтролируемое;
жар, высокая температура тела, горячка;
чрезмерная потливость;
галлюциногенные всплески, путаница в реальности;
мурашки, волосы на коже становятся дыбом;
стойкая эрекция у мужчин.

Во время буйства у людей, зараженных вирусом бешенства, может развиваться боязнь воды – гидрофобия. Возникают затруднения в дыхательной системе, появляются трудности с глотанием. Во время глотания мышцы охватывают спазм, что делает невозможным совершение такого знакомого рефлекса. Спазм может длиться всего несколько секунд, но повторяется при очередной попытке. Далее человек боится совершать попытки из-за страха снова испытать спазм. Могут так же проявляться и другие фобии, например, страх воздуха или яркого света.

Уже через пару дней человек впадает в кому, организм испытывает легочную или сердечную недостаточность и вскоре погибает.

Такой тип вызван слабостью в мышечной структуре. Мышцы не только теряют силу, но и лишены чувствительности, а иногда и частично парализованы. Например, в кистях или стопах может возникнуть легкое онемение, перерастающее в неспособность двигать какими-то элементами конечностей. Такой недуг может распространиться по всему телу и полностью обездвижить человека.

Фобии при таком типе бешенства обычно не возникают. Участь человека все также предопределена: вначале кома, затем летальный исход.

Чтобы врач мог диагностировать бешенство, необходимо подтвердить его следующими данными:

Факт взаимодействия с зараженным или бездомным животным, которое не было привито в течение года. Под контактом подразумевается взаимодействие со слюной больного животного, укус, обработка ран и пр.
Первые проявления инфицирования.
Материалы для анализа зараженного или подозрительного животного при возможности.
Результаты обследования человека с признаками бешенства.

При диагностике используют следующие способы обследования:

Забор тканей участка кожи для выявления антител в борьбе с вирусным заболеванием. Ткани берут с задней поверхности шеи либо же, как материал используется отпечаток роговицы глаза.
ПЦР. Материал для исследования – слюна или спинномозговая жидкость. Но такой анализ довольно дорогостоящий и выполняется не во всех лабораториях.
Исследование спинномозговой жидкости и анализ крови на определение уровня моноцитов.
Исследование участков головного мозга, которое доступно только после констатации смерти больного. В ходе подтверждения диагноза в нервных клетках находятся точки – тельца Негри, которые однозначно свидетельствуют о бешенстве.

Эффективных методов для лечения проявлений бешенства человечество до сих пор не открыло. Ранее все люди, независимо от своевременности обращения к врачу, заканчивали смертью. Но современная медицина предлагает использовать вакцинацию не только как профилактические меры, но и в качестве противодействия во время инкубационного периода заражения.

В истории есть только пара случаев выздоровления после комплекса противовирусного медикаментозного воздействия, однако в реальной жизни это работает крайне редко и почти никого не спасает от гибели.

Эффективность лечения возможна только сразу же после укуса, в процессе заражения. Своевременные действия могут обезопасить от развития симптоматики и смерти, но нельзя медлить. При заражении вирусом бешенства важна каждая минута, ведь именно она может стоить человеческой жизни.

источник

Бешенство (Б) – остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением ЦНС. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек.

Болезнь регистрируется в различных регионах земного шара. Не отмечено случаев распространения болезни в Австралии, Великобритании, Японии. Заболевание почти всегда заканчивается смертью. Имеются фактически документированные случаи выздоровления от бешенства человека и собак после экспериментальной инфекции.

Вирус бешенства (ВБ) относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. В настоящее время установлено, что ВБ имеет 4 серотипа, что обусловлено, видимо, различием в составе мембранных белков. Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны, но различаются по вирулентности. ВБ обладает ГА и ГАД свойствами. Между инфекционной и ГА активностью существует линейная зависимость. Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют ВНА, КСА, антиГА и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) АТ.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений (они имеют меньшее значение) и, главным образом, результатов лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика заключается в исследовании головного мозга животных с целью выявления вирусного АГ в ИФ, РДП, обнаружении телец Бабеша — Негри и биопробе на белых мышах.

В Российской Федерации в настоящее время организовано производство наборов для диагностики Б в ИФ и РДП в ВНИТИБП и КазНИВИ.

Выделение вируса. В лабораторию для исследования направляют свежие трупы мелких животных, от крупных животных — голову или головной мозг. В некоторых случаях допускается консервирование головного мозга в 50%-ном глицерине. Труп или голова должны быть тщательно упакованы в полиэтиленовый мешок, мозг — в банку с притертой стеклянной или резиновой пробкой, залитой парафином. Материал упаковывается во влагонепроницаемую тару. Для вирусологических исследований пригоден только не консервированный мозг. Необходимо помнить, что вскрытие трупа, извлечение мозга и другие операции с патологическим материалом следует проводить в условиях стерильности и строгого соблюдения мер личной профилактики: прочно фиксируют голову животного, защищают руки 2-мя парами перчаток (хирургические и анатомические), для защиты глаз надевают очки, а на нос и рот-6-слойную марлевую повязку.

Лабораторные исследования материала на бешенство проводят вне всякой очереди; результаты немедленно сообщают врачу хозяйства и главному врачу района (города).

Индикация и идентификация вируса. Порядок проведения исследований: из каждого отдела головного мозга левой и правой сторон (аммонова рога, мозжечка, коры полушарий и продолговатого) готовят по 4 мазка-отпечатки для ИФ и обнаружения телец Бабеша — Негри; с мозговой тканью ставят РДП; при отрицательных результатах ставят биопробу.

Обнаружение специфических телец-включений. Мазки-отпечатки окрашивают по Селлерсу, Муромцеву или другими методами. После окрашивания препараты просматривают в световом микроскопе с иммерсионной системой. Положительным результатом считают наличие специфических телец Бабеша — Негри (при окраске по Селлерсу — четко очерченные овальные или продолговатые гранулярные образования розово-красного цвета в протоплазме, при окраске по Муромцеву — светло-фиолетовые с темно-синими включениями тельца Бабеша — Негри, чаще они расположены вне нервных клеток.

Наиболее характерная особенность телец Бабеша — Негри — их внутренняя структура, позволяющая абсолютно точно дифференцировать их. Внутри видны маленькие зернышки — базофильные зернистости темно-голубого, даже черного цвета величиной 0,2-0,5 мкм.

Диагностическая ценность обнаружения телец-включений для доказательства заражения ВБ общепризнана. Однако и у здоровых животных, в особенности у кошек и белых мышей, имеются образования, присутствие которых может вызвать диагностические затруднения. В отдельных случаях в мозге кошки можно с уверенностью дифференцировать подобные включения от телец Бабеша — Негри, и здесь рекомендуется воспользоваться методами идентификации, в особенности ИФ. Равным образом и у собак, погибших в результате отравления змеиным ядом или поражения электрическим током, можно найти тельца-включения, напоминающие тельца Бабеша – Негри. Тельца Бабеша — Негри выявляют лишь в 65-85% случаев бешенства, поэтому отсутствие их не является отрицательным ответом, и материал исследуется в других тестах (ИФ, РДП, биопроба).

ИФ. Один из основных тестов при диагностике Б. При высококвалифицированном выполнении получают в 99-100% совпадения с методом биопробы. Обычно в диагностической практике используют прямой метод ИФ, который проводят с применением антирабического флюоресцирующего Ig. Фиксацию препаратов в охлажденном (8-10°С) ацетоне проводят не менее 4-х ч. В качестве отрицательного контроля используют мазки-отпечатки головного мозга здоровых белых мышей. Учитывают результаты визуально в люминесцентном микроскопе на основе оценки интенсивности свечения комплекса АГ-АТ. АГ ВБ выявляется в виде ярких желто-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины в клетках (чаще вне клеток). Диагноз считают установленным, если в нескольких полях зрения обнаруживают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленым свечением или множество мельчайших точек, В контроле подобного свечения не должно быть.

Для доказательства специфичности свечения комплекса АГ-АТ используют метод подавления ИФ, который заключается в способности рабического АГ, связанного с нефлюоресцирующими AT, вторично не вступать в соединение с флюоресцирующими специфическими AT. Для этого на фиксированные препараты, приготовленные из исследуемого головного мозга, наносят 5%-ный антирабический нефлюоресцирующий Ig, выдерживают 30 мин при 37°С во влажной камере, промывают физраствором, а затем окрашивают флюоресцирующим антирабическим Ig общепринятым прямым методом. В обработанных таким образом препаратах флюоресценции не должно быть.

Метод ИФ дает возможность обнаруживать ВБ в клетках роговицы глаз и предварительно поставить диагноз прижизненно: во время болезни животных, а также за 1-2 дня и более до клинического её проявления. Метод может быть использован для исследования подозреваемых в заболевании Б животных, а также клинически здоровых собак и кошек, покусавших людей и животных. Для этого готовят отпечатки с роговицы, соблюдая все правила личной безопасности, раскрывают глазную щель животного большим и указательным пальцами и на слегка выпяченное глазное яблоко надавливают поверхностью предметного стекла, отступив 0,5 см от конца. Нужно следить, чтобы животное не моргало третьим веком, так как со стекла удаляются эпителиальные клетки и получается некачественный мазок. С каждого глаза делают не менее 2 препаратов, содержащих по 2 отпечатка. Для контроля аналогичным образом готовят отпечатки роговицы от здоровых животных. Их можно приготовить в хозяйстве. Отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в течение 4 ч при 4°С, упаковывают и отправляют в лабораторию. Окрашивают препараты, как при ИФ, по общепринятой методике.

В препаратах, полученных от больных животных или находящихся в конце инкубационного периода болезни, в цитоплазме многих эпителиальных клеток наблюдаются разной формы ярко светящиеся гранулы разного размера — от пылевидных точек до 2 мкм и более. С целью получения достоверных результатов в каждом препарате просматривают по 50-100 клеток, а всего от животного — не менее 200-400 клеток. Результаты микроскопии считают положительными, если в отпечатках роговицы животного обнаруживают 11% и более клеток с характерными очажками свечения. Необходимо иметь в виду, что в препаратах от здоровых животных (контроль), вследствие аутофлюоресценции, могут встречаться единичные клетки с подобными по форме и свечению очажками.

Важно отметить, что ИФ дает возможность ускорить ответ при окончательной постановке диагноза путем биопробы, поскольку диагноз при Б может быть установлен только на 4-8-й день после заражения мышей исследуемым материалом, а инкубационный период заболевания мышей может достигать и 20 дн. ИФ может выявлять ВБ в тканях подчелюстной слюнной железы. Из подчелюстных слюнных желез готовят препараты-мазки, беря материал не менее чем из 6 разных участков железы, так как распределение в ней вируса неравномерно. Часто, чтобы получить отпечаток, приходится делать сильный нажим, поскольку из-за обилия муцина на стекле остается мало материала.

Показана возможность идентификации ВБ в коже методом ИФ, С этой целью берут пробы кожи головы, а также фолликулы сенсорных и тактильных волос морды или латеральных сенсорных сосочков (на щеке собаки). Пробы хранят при -20 или -70°С. Из них делают криосрезы, которые обрабатывают флюоресцирующим глобулином. Результаты ИФ анализа, полученные при идентификации ВБ в коже, в высокой степени коррелируют с данными, полученными при исследовании мозга того же животного. Показана близкая корреляция между обнаружением АГ вируса в пробах мозга и тканях губы методом ИФ.

РДП. Применяют для обнаружения АГ ВБ в неконсервированном головном мозге животных, павших от уличного бешенства, или мышат, используемых в биопробе. РДП ставят микрометодом на предметных стеклах, используя 1-1,5%-ныЙ агаровый гель по общепринятой методике. Наибольший процент положительных результатов выявляют при использовании следующего трафарета: А — аммонов рог (правая сторона); В — кора головного мозга (правая сторона); С — мозжечок (правая сторона);
Д — продолговатый мозг (правая сторона); + (плюс) — положительный контроль; — (минус) — отрицательный контроль; 1, 2, 3, 4 — лунки с разведением специфического иммуноглобулина 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 соответственно

Из каждого отдела головного мозга с помощью пинцета готовят гомогенную пастообразную массу, которую и помещают в соответствующие лунки. От мышей исследуют весь головной мозг. Из отделов головного мозга левой стороны готовят АГ аналогичным образом ( на каждую экспертизу в общей сложности требуется 4 предметных стекла с агаровьм гелем). Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч. При наличии 1 или 2-3 линий преципитации между лунками, содержащими АГ и иммуноглобулин, реакцию считают положительной.

РДП проста по выполнению и специфична, но процент выявления вирусного АГ в исследуемом материале составляет 45-70. При исследовании головного мозга мышей, полученного при положительной биопробе, РДП выявляет до 100% случаев. Отсутствие в исследуемом материале телец Бабеша — Негри, специфической флюоресценции и отрицательная РДП не дают основания исключить наличие вируса. В этом случае окончательный диагноз ставят по результатам биопробы на белых мышах с последующей идентификацией вируса.

Биопроба. Принято считать, что биопроба является более эффективным методом, чем обнаружение телец Бабеша — Негри, ИФ и др. Однако и она в отдельных случаях оказывалась отрицательной, несмотря на подтверждение диагноза Б путем обнаружения телец-включении и ИФ. Процент отрицательных результатов по биопробе колебался от 1,3 до 12.

Сведения о различной эффективности биопробы могут быть объяснены рядом факторов: выбора экспериментального животного, количества их в опыте, способа заражения, способа и срока хранения материала до поступления в лабораторию. Может играть роль и явление интерференции инфекционных частиц неактивными частицами, если для инокуляции используют недостаточно разведенный материал.

В мозге и слюнных железах лисиц и скунсов, павших от бешенства, обнаружено вещество, ингибирующее инфекционность вируса, что не позволяет провести диагностику болезни у этих животных методом внутримозгового заражения мышей. Наличие ингибирующего вещества в исследуемом материале не препятствует выявлению вирусного АГ методом ИФ; для скунсов и лисиц это самый чувствительный метод диагностики.

Из животных всех видов (кролики, морские свинки, взрослые белые мыши и хомячки), использованных для биопробы, многие отдают предпочтение мышам-сосунам, поскольку они более чувствительны к разным штаммам ВБ и менее опасны в работе. Сирийские хомячки по чувствительности не уступают мышам, но они менее доступны.

РСК. Выявление специфического АГ в РСК при диагностике бешенства применяется реже, чем другие методы. Из присланного для исследования мозга готовят АГ. Для этого мозговую ткань (особенно богаты АГ, связывающим комплемент, кусочки таламуса и стволового отдела мозга) растирают в вероналовом буфере в соотношении 1:10 и оставляют при комнатной температуре на 1 ч, после чего суспензию инактивируют при 56°С в течение 5 ч. Такая обработка убивает вирус и снимает антикомплементарность мозговой ткани, не повреждая специфический АГ. Суспензию центрифугируют 15 мин при 3500 мин- 1 из надосадочной жидкости, которая представляет собой материал для исследования на наличие АГ, готовят 2-кратно возрастающие разведения от 1:2 до 1:64 и используют для исследования в РСК.

ИФА. В ИФА специфическое окрашивание АГ в клетках мозга павших от бешенства животных выявляют как в свежевзятых, хранившихся в глицерине, а также в пробах, хранившихся без глицерина при 20°С 8-18 ч. Данный тест пригоден для рутинной диагностики бешенства у животных, для выявления АГ ВБ в тканевых парафиновых срезах при фиксации препаратов 10%-ным р-ром формалина с рН 5,3 и последующей обработки препаратов, заключенных в парафин, пепсином.

В отличие от РН на мышах и в культуре клеток ИФА позволяет выявить AT у животных в течение нескольких часов, ИФА — наиболее перспективный лабораторный метод обнаружения AT и индикации самого вируса. Экспресс-методом диагностики бешенства является техника захвата и метод ИФ для выявления АГ ВВ. Доказано, что метод выявления АГ ВБ в парафинизированных срезах пероксидазо-антиперокисдазным методом значительно превосходит метод ИФА. В 1987 г. создан набор для быстрой энзимиммунодиагностики бешенства (RREID), приемлемый для эпидемиологических и лабораторных исследований.

РН. Используется редко. Рекомендуется модификация с разведением ВБ и постоянной дозы γ-глобулина. ИН 2 указывает на АГ специфичность выделенного вируса.

Вариантная идентификация с помощью монАТ. С помощью монАТ к гликопротеинам ВБ селектированы АГ варианты, среди которых выделены фенотипически термолабильные (авирулентные) варианты. При использовании 2-х групп монАТ показано, что штаммы дикования отличаются от шт. Fixe (Пастера), CVS, Flury HEP, ERA и «утиных» штаммов по АГ детерминантам. Изучение с помощью монАТ 7-ми штаммов, выделенных от больных Б людей, позволило выявить определенные отличия их от вакцинного штамма в отношении АГ детерминант.

Общепризнано, что AT отличия между дикими штаммами удается обнаружить, используя монАТ против нуклеокапсидного AT N, которые реагируют с цитоплазматическими включениями зараженных вирусом клеток; против гликопротеина (G АГ), которые реагируют с мембранами инфицированных клеток, лизируют эти клетки в присутствии комплемента и нейтрализуют вирус. В связи с возможной АГ вариабельностью поверхностного гликопротеина ВБ из различных географических зон в качестве протективного АГ использовали рибонуклеопротеин, характеризующийся консервативностью АГ структуры. Таким образом, не только G белок, но и РНП ВБ обладают протективной активностью.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Эти методы для бешенства нетипичны, поскольку используются только с целью проверки поствакцинального иммунитета. Для обнаружения и титрования поствакцинальных AT используют РН, которую ставят общепринятым методом. В качестве АГ используют фиксированный ВБ. РН на клетках ВНК-21 была более чувствительной, чем непрямая ИФ при выявлении AT в сыворотках вакцинированных лис. Кроме того, предложены РТГА и ELISA.

РТГА. Пока еще не нашла широкого применения в диагностической практике из-за наличия в сыворотках крови неспецифических ингибиторов, к которым ВБ высокочувствителен, а главное, ГА АГ, не подвергавшиеся достаточной очистке, обладали низкой чувствительностью. Для приготовления ГА АГ ВБ предложено использовать шт. Москва, выращенный в культуре клеток ВНК-21, после его обработки сапонином с последующей очисткой и концентрированием. ГА отделяют от других компонентов вириона ультрацентрифугированием. Полученный препарат имел степень очистки 99,92%, обладал высокой ГА активностью (1:128), хорошо сохраняющейся в течение 1 мес при рН 5-9.

Перед постановкой РТГА следует проводить умеренную 2-кратную трипсинизацию гусиных эритроцитов для их сенсибилизации. При использовании 0,25%-ной взвеси трипси-низированных эритроцитов (лучше 10 7 клеток в 1 мл) чувствительность РТГА повышается в 4 раза. Для разбавления АГ и сывороток применяют боратно-солевой р-р (рН 9) с добавлением 0,4% бычьего сывороточного альбумина. Взвесь эритроцитов готовят в солевом р-ре с кислым рН, чтобы после соединения со смесью вируса и сывороток, рН которой 9, окончательный рН установился бы в пределах 6,2. После внесения в лунки суспензии эритроцитов панель встряхивают, заклеивают прозрачной пленкой и ставят на лед. Результаты РТГА учитывают через 40-50 мин, а с эритроцитами 2-дн цыплят или макаки-резус — через 1-1,5 ч.

Разработан радиоиммунологический анализ, основанный на способности AT связываться с меченым 125 1-АГ ВБ. Меченый IgG, выделенный из антирабической гипериммунной сыворотки, можно применять для обнаружения АГ ВБ твердофазным РИА. Лучшие результаты получены при использовании фосфатно-солевого р-ра (рН 6,0) с ионной силой 0,01 М и меченого IgG с активностью 200-250 тыс. имп./мин.

Твердофазный конкурентный РИА применим для выявления антирабических AT в сыворотке и гибридомных супернатантах.

Дифференциальная диагностика. Необходимо исключить болезнь Ауески, при которой больные животные неагрессивны, не бывает извращения аппетита. У собак исключают нервную форму чумы. Подозрение на бешенство может возникнуть при инфекционном энцефаломиелите лошадей. Комплекс лабораторных исследований позволяет поставить точный диагноз на бешенство. Предложен новый метод дифференциации различных штаммов ВБ, основанный на рестриктазном расщеплении продуктов амплификации в ПЦР сегмента гена N.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

В настоящее время прижизненный лабораторный анализ на бешенство у собак не разработан. Точный диагноз ставят только после вскрытия животного и обнаружения в головном мозге вирусного антигена и специфических телец Бабеша – Негри. Это обусловлено тем, что возбудитель не проникает в кровь, поэтому найти его методом гематологического исследования невозможно.

Многие владельцы домашних питомцев достаточно поверхностно знают о том, что такое бешенство у собак, каковы первые настораживающие симптомы заболевания и чем грозит укус зараженного животного.

Чаще всего беспечность проявляют жители мегаполисов, наивно полагая, что в условиях города заразиться бешенством невозможно из-за отсутствия в нем представителей дикой природы. Однако такое мнение является ошибочным, так как в данном случае основными переносчиками возбудителя являются бродячие собаки и кошки, крысы и летучие мыши, населяющие свалки, подвалы, чердаки и заброшенные здания.

Бешенство представляет собой смертельно опасное заболевание, протекающее с поражением центральной нервной системы. Больное животное представляет собой угрозу для людей, так как в период развития клинических признаков проявляет неконтролируемую агрессию. После укуса спасти человека может только своевременное введение антирабической вакцины, так как лечение противовирусными препаратами не дает эффекта и болезнь заканчивается летальным исходом.

Распознать больное животное можно по характерным клиническим признакам. Но опасность заключается в том, что у бешенства существует латентный период, длящийся от двух недель до полугода, во время которого собака может заразить человека или другое животное.

Важно! Вирус бешенства выделяется со слюной, и определенное время может сохраняться во внешней среде. Поэтому инфицирование может произойти даже без наличия укуса при соприкосновении с зараженными предметами.

Клиническая картина заболевания может значительно варьировать в зависимости от стадии и формы бешенства. Владельцам стоит знать, что первым симптомом является кардинальное изменение поведения животного. Общительный и ласковый питомец может стать замкнутым, обидчивым, избегающим контакта и отказывающимся от корма. И, наоборот, сдержанный ранее пес может проявлять чрезмерную ласковость и общительность.

Для начальной стадии тихой формы бешенства характерны резкие смены настроения, когда добродушный питомец начинает проявлять беспричинную неконтролируемую агрессию. По мере поражения головного мозга развивается водобоязнь. Собака ищет уединения, скрывается от света, резко реагирует на знакомые звуки и запахи. В результате обильного и постоянного слюнотечения на губах появляется пена.

На заключительной стадии появляются:

Летальный исход наступает через 2-3 суток от блокировки дыхательного центра.

Наиболее часто встречающаяся буйная форма бешенства характеризуется наличием трех фаз развития.

Продромальная стадия:

частое чередование периодов спокойствия и возбуждения;
поедание несъедобных предметов;
стремление к уединению в темном месте;
клонические судороги;
водобоязнь;
охота за мнимыми насекомыми.

Маниакальная стадия:

неконтролируемая беспричинная агрессия;
частые приступы рвоты;
косоглазие;
обильное слюнотечение;
параличи;
изменение тембра лая;
постоянно отвисшая челюсть и выпавший язык.

Паралитическая стадия:

отсутствие интереса к внешним раздражителям;
резкое снижение массы тела;
параличи.

Все три стадии длятся от 5 до 10 дней и заканчиваются летальным исходом.

Для возвратной формы бешенства характерно приступообразное течение, проявляющееся резким появлением симптомов маниакальной стадии и внезапным их исчезновением. Каждый последующий приступ по силе превосходит предыдущий, и через 2-3 раза наступает смерть.

Ученым до сих пор не удалось выяснить природу абортивной формы бешенства. Загадка заключается в том, что после заражения у животного появляются симптомы продромальной стадии заболевания, которые через 2-4 дня бесследно исчезают и собака становится здоровой.

В мировой практике зарегистрированы единичные случаи данной формы, после чего животные жили еще несколько лет без проявлений рецидивов болезни.

При развитии атипичной формы отсутствует маниакальная стадия, поэтому в клинике заболевания отсутствует агрессия. Вместо этого наблюдается:

расстройство пищеварения, сопровождаемое рвотой и поносом;
отказ от пищи;
атрофия мышц корпуса и конечностей;
малоподвижность.

Собака погибает от стремительно развивающегося истощения.

Важно! Коварность данной формы заключается в отсутствии характерных для бешенства признаков. Ее легко перепутать с энтеритом и чумой плотоядных, начать симптоматическое лечение животного и подвергнуть свою жизнь смертельной опасности при попадании вируса на поврежденные кожные покровы.

После смерти животного ветеринарный специалист отправляет труп в лабораторию с соблюдением всех правил предосторожности, предусмотренных законодательством, с целью исключения распространения вируса. От собак крупных пород может направляться только голова или головной мозг.

Важно! Исследование материала на бешенство должно проводиться бесплатно и без очереди. О результатах в обязательном порядке сообщается главному врачу города или района.

В лаборатории проводят следующие исследования:

просматривание окрашенных мазков-отпечатков головного мозга под световым микроскопом с целью обнаружения телец Бабеша-Негри;

постановка реакции с антирабическим флюоресцирующим иммуноглобулином с последующим просматриванием мазков-отпечатков в поле люминесцентного микроскопа;

реакция диффузной преципитации (применяется реже, так как процент выявления возбудителя составляет от 45 до 70%);

биопроба на белых мышах, являющаяся наиболее эффективным методом диагностики бешенства.

Разработан еще ряд исследований, позволяющих установить наличие вируса бешенства (РСК, ИФА, РН, РТГА), но они не нашли широкого применения из-за сложности выполнения и малой эффективности.

Некоторые страны требуют, чтобы в ветеринарных документах на ввозимых собак был указан результат анализа крови на антитела к вирусу бешенства, вырабатываемые в организме животного после прививки.

Данное исследование целесообразно проводить не ранее 30 дней, но не позднее 1 года после вакцинации. В этот период количество антител в крови уже достигает количества не менее 0,05 МЕ/мл (IU/ml), являющегося минимальной допустимой концентрацией.

К сожалению, в России существуют единичные лаборатории, прошедшие аккредитацию и получившие разрешение на проведение подобных тестов. К тому же данное исследование является достаточно дорогостоящим.

источник

Как проводятся анализы на бешенство

Добавить комментарий Отменить ответ