Об актуальных изменениях в КС узнаете, став участником программы, разработанной совместно с ЗАО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу выдаются удостоверения установленного образца.
Программа, разработана совместно с ЗАО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу, выдаются удостоверения установленного образца.
Обзор документа
Проект Приказа Министерства сельского хозяйства РФ «Об утверждении Ветеринарных правил осуществления профилактических, диагностических, лечебных, ограничительных и иных мероприятий, установления и отмены на территории Российской Федерации карантина и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов бешенства.» (подготовлен Минсельхозом России 23.03.2016)
В целях повышения эффективности борьбы с бешенством животных и в соответствии со статьей 2.2 Закона Российской Федерации от 14 мая 1993 г. N 4979-1 «О ветеринарии» (Ведомости Съезда народных депутатов Российской Федерации и Верховного Совета Российской Федерации, 1993, N 24, ст. 857; Собрание законодательства Российской Федерации, 2002, N 1, ст. 2; 2004, N 27, ст. 2711; N 35, ст. 3607; 2005, N 19, ст. 1752; 2006, N 1, ст. 10; N 52, ст. 5498; 2007, N 1, ст. 29; N 30, ст. 3805; 2008, N 24, ст. 2801; 2009, N 1, ст. 17, ст. 21; 2010, N 50, ст. 6614; 2011, N 1, ст. 6; N 30, ст. 4590; 2015, N 29, ст.4339, ст. 4359, ст. 4369) и пунктом 5.2.9 Положения о Министерстве сельского хозяйства Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 12 июня 2008 г. N 450 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2008, N 25, ст. 2983; N 32, ст. 3791; N 42, ст. 4825; N 46, ст. 5337; 2009, N 1, ст. 150; N 3, ст. 378; N 6, ст. 738; N 9, ст. 1119, ст. 1121; N 27, ст. 3364; N 33, ст. 4088; 2010, N 4, ст. 394; N 5, ст. 538; N 16, ст. 1917; N 23, ст. 2833; N 26, ст. 3350; N 31, ст. 4251, 4262; N 32, ст. 4330; N 40, ст. 5068; 2011, N 6, ст. 888; N 7, ст. 983; N 12, ст. 1652; N 14, ст. 1935; N 18, ст. 2649; N 22, ст. 3179; N 36, ст. 5154; 2012, N 28, ст. 3900; N 32, ст. 4561; N 37, ст. 5001; 2013, N 10, ст. 1038; N 29, ст. 3969; N 33, ст. 4386; N 45, ст. 5822; 2014, N 4, ст. 382; N 10, ст. 1035; N 12, ст. 1297; N 28, ст. 4068; 2015, N 2, ст. 491; N 11, ст. 1611, N 26, ст. 3900; N 35, ст. 4981; N 38, ст. 5297; N 47, ст. 6603) приказываю:
Утвердить прилагаемые Ветеринарные правила осуществления профилактических, диагностических, ограничительных и иных мероприятий, установления и отмены карантина и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов бешенства животных.
Приложение
к приказу Минсельхоза России
от N
Ветеринарные правила осуществления профилактических, диагностических, ограничительных и иных мероприятий, установления и отмены карантина и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов бешенства животных
1.1. Настоящие Ветеринарные правила осуществления профилактических, диагностических, ограничительных и иных мероприятий, установления и отмены карантина, и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов бешенства (далее — Правила) устанавливают обязательные для исполнения требования к осуществлению профилактических, диагностических, ограничительных и иных мероприятий, установлению и отмене на территории Российской Федерации карантина и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов бешенства животных, организации и проведению мероприятий по ликвидации бешенства, предотвращению его возникновения и распространения на территории Российской Федерации, определению границ территории, на которую должен распространяться режим ограничительных мероприятий и (или) карантина, в том числе в части определения очага болезни животных, осуществления эпизоотологического зонирования, включая определение видов зон в целях дифференциации ограничений, установленных решением о введении режима ограничительных мероприятий и (или) карантина, ограничений производства, перемещения, хранения и реализации товаров, подлежащих ветеринарному контролю (надзору), из перечня, утвержденного актом, составляющим право Евразийского экономического союза, и требования к особенностям применения таких ограничений, в том числе проведению мероприятий в отношении производственных объектов, находящихся в карантинной зоне.
2.1. Бешенство — Бешенство (гидрофобия) — острая вирусная зоонозная инфекция, характеризующаяся симптомами полиэнцефалита. Вирус передается главным образом со слюной при укусах.
Заболевание характеризуется длительным скрытым (бессимптомным) периодом и сопровождается тяжелым поражением центральной нервной системы (головного и спинного мозга, твердых оболочек мозга, менингеальных оболочек).
Бешенством болеют все теплокровные животные. Установлено, что повышенной чувствительностью к возбудителю бешенства отличаются дикие хищники семейства собачьих (лисица, енотовидная собака, волк, шакал, песец) и семейства куньих, а также летучие мыши, мангусты и другие виверровые, грызуны некоторых видов и домашняя кошка. Чувствительность человека, собаки, крупного рогатого скота, овец и коз, лошадей определяется как умеренная, средняя. Чувствительность птиц характеризуется как пониженная. Кошки более восприимчивы к бешенству, чем собаки, и выделяют в несколько раз большее количество вируса, чем остальные животные и собаки.
2.2. Возбудитель бешенства животных и человека — рабдовирус рода Lyssavirus, семейства Rhabdoviridae.
Вирус отличается значительной лабильностью биологических свойств. Известно несколько биологических вариантов. Вирус неустойчив во внешней среде, быстро инактивируется подавляющим большинством дезинфицирующих средств, Вирус термолабилен: при 60° С инактивируется через 10 мин, а при 100° С — мгновенно. К низким температурам он устойчив и в течение всей зимы сохраняется в мозге зарытых в землю трупов животных. В гниющем материале остается жизнеспособным в течение 2-3 недель. При 4°С в кусочках мозга вирус сохраняет инфекционность несколько месяцев, после лиофилизации — несколько лет.
2.3 Резервуаром и главными источниками возбудителя бешенства являются дикие хищники, собаки и кошки. С учетом характера резервуара возбудителя различают природный, антропургический (городской) и ассоциированный типы энзоотий бешенства.
Природный очаг — очаг в котором циркуляция вируса осуществляется в популяциях диких плотоядных животных, кровососущих насекомых и насекомоядных летучих мышей.
Антропургический очаг (городской) — очаг в котором самостоятельная циркуляция вируса осуществляется в популяции одомашненных животных в искусственно созданной человеком экологической среде
Ассоциированный очаг (природно-антропургический) — очаг в котором осуществляется обмен вирусом между популяциями диких и одомашненных животных.
2.4. Преимущественно вирус проникает в организм через поврежденную кожу или слизистую оболочку, неповрежденная кожа непроницаема для вируса. Дальнейшее распространение и размножение возбудителя зависит от характера поражения ткани и места его внедрения, особенно большую роль играет иннервация пораженного участка. Чем богаче нервными окончаниями ткань в области ворот инфекции, тем больше возможность развития болезни.
Заражение человека и животных происходит при непосредственном контакте с источниками возбудителя бешенства в результате укуса или ослюнения поврежденных кожных покровов или наружных слизистых оболочек.
3.1. В целях предотвращения возникновения и распространения бешенства организации и граждане владельцы животных:
— соблюдать установленные правила содержания и регистрации собак, кошек, пушных зверей и хищных животных;
— доставлять принадлежащих им собак и кошек в региональные государственные учреждения ветеринарии для осмотра, диагностических исследований и вакцинации антирабической вакциной;
— не допускать собак, не вакцинированных против бешенства, в личные подворья, на фермы, в стада, отары и табуны;
— принимать меры к недопущению диких животных к стадам, отарам, табунам, животноводческим помещениям;
— перемещение животных (продажа, покупка и вывоз) собак, кошек и пушных зверей за пределы области (края, республики) разрешается при наличии оформленного ветеринарного сопроводительного документа с отметкой о вакцинации против бешенства. Допускается перемещение собак и кошек, перевозимых для личного пользования, в количестве не более 2 голов без карантинирования в сопровождении ветеринарного паспорта животного. В паспорте должны быть отметки, свидетельствующие, что животное вакцинировано в соответствии с настоящими Правилами и при этом любая последующая вакцинация против бешенства проводилась в период действия предшествующей вакцинации. В течение 5 дней до начала перемещения должен быть проведен клинический осмотр животного и в паспорте сделана соответствующая отметка ветеринарным врачом, дающая право на перемещение животного в течение 120 дней при условии, что за этот период не истекает срок действия вакцинации (ревакцинации) против бешенства.
3.2. В целях своевременного выявления и профилактики распространения бешенства диких животных юридические лица, индивидуальные предприниматели, граждане, заключившие охотхозяйственные соглашения, и федеральные органы исполнительной власти при наличии подведомственных им охотхозяйств (заказников), особо охраняемых природных территорий федерального значения:
— направляют в лабораторию (испытательный центр), входящую в систему органов и учреждений государственной ветеринарной службы Российской Федерации, или иную лабораторию (испытательный центр), научно-исследовательское учреждение аккредитованные в национальной системе аккредитации, для исследования на бешенство трупы диких хищников (лисиц, енотовидных собак, песцов, волков, корсаков, шакалов), обнаруженные в охотничьих угодьях, на территориях заповедников, заказников, в зеленых зонах крупных населенных пунктов;
— регулируют численность диких хищных животных, проводят отстрел бродячих собак и кошек в охотничьих угодьях;
3.3 Собаки, находящиеся на улицах и в иных общественных местах без сопровождающего лица, и безнадзорные кошки подлежат отлову. Порядок отлова этих животных, их содержания и использования относится к полномочиям органов государственной власти субъектов Российской Федерации.
3.4. Органы коммунального хозяйства, жилищно-эксплуатационные организации, администрация рынков, мясо- и молокоперерабатывающих предприятий, магазинов, столовых, ресторанов, домовладельцы обязаны содержать в надлежащем санитарном состоянии территории предприятий, рынки, свалки, площадки для мусора и других отходов, не допускать скопление безнадзорных собак и кошек в таких местах, принимать меры, исключающие возможность проникновения собак и кошек в подвалы, на чердаки и в другие нежилые помещения.
3.5. Во всех населенных пунктах Российской Федерации все собаки, независимо от их принадлежности, а в необходимых случаях и кошки подлежат обязательной профилактической иммунизации против бешенства с использованием зарегистрированных в соответствии с законодательством Российской Федерации антирабических вакцин, в порядке и в сроки, предусмотренные наставлениями по их применению.
3.6. Для профилактики бешенства среди диких плотоядных животных применяются вирусвакцины для оральной иммунизации, зарегистрированные в соответствии с законодательством Российской Федерации, используемые в соответствии с наставлениями по их применению.
3.7. В зонах стационарного неблагополучия по бешенству диких хищников регулярно проводят в соответствии с утвержденным планом противоэпизоотических мероприятий:
— плановую профилактическую вакцинацию сельскохозяйственных животных (прежде всего — крупного рогатого скота), подвергающихся риску заражения;
— обязательную оральную иммунизацию диких хищников против бешенства.
3.8. В целях предотвращения заноса вируса бешенства на территорию Российской Федерации запрещается ввозить на территорию Российской Федерации пушных зверей, кроликов, собак, кошек и диких плотоядных из неблагополучных хозяйств и территорий, из благополучных менее 6 месяцев, не вакцинированных против бешенства ранее, чем за 20 дней до ввоза, при этом любая последующая вакцинация против бешенства проводилась в период действия предшествующей вакцинации.
4.1. При возникновении подозрения на заболевание бешенством организации и граждане — собственники животных, юридические лица, индивидуальные предприниматели, граждане, заключившие охотхозяйственные соглашения и федеральные органы исполнительной власти при наличии подведомственных им охотхозяйств (заказников), особо охраняемых природных территорий федерального значения немедленно (в течение 24 часов) сообщают (устно или письменно) должностному лицу органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения о подозрении на заболевание животных бешенством, о случаях заболевания или необычном поведении диких животных (отсутствие страха перед человеком, неспровоцированное нападение на людей или животных) и случаях покуса сельскохозяйственных и домашних животных дикими хищниками, собаками или кошками, принимают необходимые меры к надежной изоляции подозрительных по заболеванию или покусанных животных.
Покусавшие людей или животных собаки, кошки и другие животные (кроме явно больных бешенством) подлежат немедленной доставке владельцем или специальной бригадой по отлову безнадзорных собак и кошек в ближайшее государственное ветеринарное учреждение для осмотра и карантинирования под наблюдением специалистов в течение 10 дней.
В отдельных случаях, по разрешению руководителя государственного ветеринарного учреждения, животное, покусавшее людей или животных, может быть оставлено у владельца, выдавшего письменное обязательство содержать это животное в изолированном помещении в течение 10 дней и представлять его для осмотра в сроки, указанные ветеринарным специалистом данного учреждения, осуществляющим наблюдение.
Результаты наблюдения за карантинированным животным регистрируют в специальном журнале и в письменном виде сообщают учреждению, где прививают пострадавшего человека, и в территориальное управление Роспотребнадзора по месту жительства пострадавшего.
По окончании срока карантинирования клинически здоровые животные после предварительной вакцинации могут быть возвращены владельцам — при условии их изолированного содержания в течение 30 дней. Животных, заболевших бешенством, уничтожают.
4.2. При возникновении подозрения на заболевание бешенством животных на объектах, подведомственных федеральным органам исполнительной власти в области обороны, в сфере внутренних дел, в сфере исполнения наказаний, в сфере государственной охраны и в области обеспечения безопасности, руководители ветеринарных (ветеринарно-санитарных) служб указанных органов немедленно (в течение 24 часов) сообщают (устно или письменно) о подозрении на заболевание бешенством животных должностному лицу органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации (на территории которого расположен соответствующий объект), осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения (подразделения); организуют и осуществляют отбор проб биологического материала и направляют эти пробы в лабораторию (испытательный центр), входящую в систему органов и учреждений государственной ветеринарной службы Российской Федерации, или иную лабораторию (испытательный центр), научно-исследовательские учреждения аккредитованные в национальной системе аккредитации для исследования на бешенство.
В случае невозможности осуществления отбора проб патологического материала руководители ветеринарных (ветеринарно-санитарных) служб органов, указанных в настоящем подпункте, оказывают содействие специалистам госветслужбы в проведении отбора и направления проб биологического материала.
4.3. Должностное лицо органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения (подразделения) в течение 24 часов после получения информации о подозрении на возникновение очага бешенства:
— выезжает на место предполагаемого эпизоотического очага, совместно со специалистами органов, уполномоченных осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический надзор определяет границы предполагаемого эпизоотического очага (квартиры, жилые дома, личные подворья граждан, животноводческие помещения, скотобазы, летние лагеря, участки пастбищ, охотничьи хозяйства, пастбища, часть лесного массива, урочища, другие территории и другие объекты, где обнаружены больные бешенством животные). Границы эпизоотического очага определяются с учетом эпизоотической ситуации, хозяйственных и ландшафтно-географических особенностей местности;
— проводит эпизоотологическое расследование с составлением акта;
— осуществляет отбор проб биологического материала и направляет указанные пробы в лабораторию (испытательный центр), входящую в систему органов и учреждений государственной ветеринарной службы Российской Федерации, или иную лабораторию (испытательный центр), аккредитованную в национальной системе аккредитации, для исследования на бешенство.
4.4. Должностное лицо учреждения (подразделения), подведомственного органу исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющему переданные полномочия в сфере ветеринарии, в течение 24 часов после получения информации о подозрении на возникновение очага бешенства, информирует о подозрении на заболевание бешенством руководителя органа местного самоуправления, на территории которого располагается предполагаемый эпизоотический очаг.
4.5. Должностное лицо органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения (подразделения):
— любым доступным способом информирует население муниципального образования, на территории которого возник предполагаемый очаг бешенства и владельцев животных о требованиях настоящих Правил по предотвращению распространения бешенства
— уточняет количество имеющегося на учете поголовья кошек, собак, пушных зверей на территории муниципального образования, восприимчивых продуктивных животных в хозяйствах в зоне предполагаемого очага бешенства, наличие и необходимость дополнительной потребности в биопрепаратах для вынужденной специфической профилактики (вакцинации) бешенства
4.6. Руководитель органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии при получении им информации (уведомления) о возникновении подозрения на бешенство, немедленно (в течение 24 часов) обеспечивает направление в населенный пункт (местность), где расположен предполагаемый очаг бешенства, специалистов госветслужбы для:
— клинического осмотра животных и проведения эпизоотологического обследования предполагаемого эпизоотического очага;
— уточнения вероятных источников, путей заноса возбудителя болезни;
— уточнения границ предполагаемого эпизоотического очага и возможных путей распространения болезни,
— организации проведения комплекса мероприятий по предупреждению распространения и ликвидации болезни в случае подтверждения подозрения на бешенство (установления диагноза на бешенство).
5.1. Лабораторные исследования материала от больных бешенством животных проводят учреждения, имеющие лицензию на работу с микроорганизмами I-II групп патогенности.
5.2. Работа по сбору, хранению, транспортировке и вирусологическому обследованию материалов от больных бешенством проводится в соответствие с действующими нормативными методическими документами.
5.3. Для исследования на бешенство в лабораторию направляют свежий труп или голову мелких животных, а от крупных — голову или головной мозг.
5.4. Лабораторные исследования на бешенство проводят немедленно. О результатах исследования сообщают в региональное государственное ветеринарное учреждение (ветеринарному специалисту, направившему биоматериал в лабораторию), и руководителю органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии — главному государственному ветеринарному инспектору субъекта Российской Федерации.
5.5. Для диагностики бешенства применяются методы микроскопического, серологического и молекулярно-генетического анализов, а также метод биологической пробы на мышах (является одним из обязательных при постановке диагноза).
5.6. Прижизненная диагностика бешенства практического применения не имеет в связи с ограниченной чувствительностью.
5.7. Положительный ответ, полученный каким-либо одним методом, аннулирует отрицательные результаты всех других тестов.
6. Установление карантина, ограничительные и иные мероприятия, направленные на ликвидацию очагов бешенства, а также на предотвращение распространения бешенства
6.1. Руководитель органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии при получении от специалистов госветслужбы и иных лиц информации об установлении диагноза на бешенство немедленно (в течение 24 часов):
— направляет в письменной форме информацию о возникновении бешенства на подведомственной территории руководителю высшего исполнительного органа государственной власти субъекта Российской Федерации, в федеральный орган исполнительной власти в области нормативно-правового регулирования в ветеринарии и федеральный орган исполнительной власти в области ветеринарного надзора, федеральный орган исполнительной власти в области санитарно-эпидемиологического надзора;
— направляет на рассмотрение высшему должностному лицу субъекта Российской Федерации представление об установлении ограничительных мероприятий (карантина);
— разрабатывает проект нормативного правового акта об установлении ограничительных мероприятий (карантина) с соответствующим перечнем ограничений к нему и направляет их на рассмотрение высшему должностному лицу субъекта Российской Федерации;
— разрабатывает и утверждает план мероприятий по ликвидации очага бешенства животных и предотвращения распространения возбудителя болезни, направляет проекты указанных документов на рассмотрение высшему должностному лицу субъекта Российской Федерации;
— направляет копию представления в федеральный орган исполнительной власти в области нормативно-правового регулирования в ветеринарии и федеральный орган исполнительной власти в области ветеринарного надзора.
— инициирует проведение заседания специальной (противоэпизоотической) комиссии соответствующего муниципального образования субъекта Российской Федерации;
6.2. Руководитель высшего исполнительного органа государственной власти субъекта Российской Федерации на основании представления руководителя органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии принимает решение об установлении ограничительных мероприятий (карантина) на территории субъекта Российской Федерации.
В случаях, когда территория, подлежащая к наложению ограничений, охватывает территории двух и более субъектов РФ, руководители высших исполнительных органов государственной власти этих субъектов или специальные (противоэпизоотические) комиссии осуществляют совместную координацию действий по определению границ и проводимых мероприятий.
В решении об установлении ограничительных мероприятий (карантина) должны быть определены эпизоотический очаг (очаги), инфицированный объект (объекты), иные объекты в зависимости от места, где установлено заболевание
6.3. Решением об установлении ограничительных мероприятий (карантин) вводятся следующие ограничительные мероприятия:
устанавливают постоянное наблюдение за группой животных (ферма, стадо, гурт, отара, табун), из которой выделены больные или подозрительные по заболеванию бешенством. Этих животных осматривают не реже трех раз в день и подвергают вынужденной вакцинации антирабической вакциной в соответствии с наставлением по ее применению. После вакцинации обязательна 60-дневная изоляция животных.
Клинически здоровых животных, покусанных дикими хищниками или собаками, разрешается, независимо от вакцинации против бешенства, убивать на мясо.
Убой производится на месте, в хозяйстве, полученная продукция используется на общих основаниях.
Молоко клинически здоровых животных неблагополучной по бешенству фермы (гурта, стада, отары, табуна) разрешается, независимо от проведенных прививок против бешенства, использовать в пищу людям или в корм животным после пастеризации при 80-85°С в течение 30 минут или кипячения в течение 5 минут.
Шерсть, полученную от клинически здоровых животных неблагополучной по бешенству группы возможно использовать только после дезинфекции паром при температуре 109-111°С в течении 30 минут.
Места, где находились животные, больные и подозрительные по заболеванию бешенством, предметы ухода за животными, одежду и другие вещи, загрязненные слюной и другими выделениями больных бешенством животных, подвергают дезинфекции.
— в неблагополучных по бешенству населенных пунктах не допускается проведение выставок собак и кошек, выводок и натаски собак. Прекращается торговля домашними животными, запрещается вывоз собак и кошек за пределы неблагополучного пункта и отлов (для вывоза в зоопарки, с целью расселения в других районах и т.д.) диких животных на карантинированной территории и в угрожаемой зоне.
6.4. Специалисты учреждения государственной ветеринарной службы подведомственного органу исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии (далее — ветеринарные специалисты подведомственного учреждения) и территориального органа уполномоченные осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический надзор в неблагополучных по бешенству пунктах:
— проводят среди населения разъяснительную работу об опасности заболевания бешенством и мерах его предупреждения;
— организуют подворный (поквартирный) обход неблагополучного населенного пункта для выявления лиц, нуждающихся в прививках против бешенства, проверки условий содержания собак, кошек и других животных, выявления больных бешенством, подозрительных по заболеванию и подозреваемых в заражении животных;
6.5. Ветеринарные специалисты подведомственного учреждения организуют в неблагополучных по бешенству пунктах следующие мероприятия
— проводят умерщвление всех выявленных больных бешенством животных, а также собак и кошек, подозрительных по заболеванию, кроме покусавших людей или животных, которых изолируют и оставляют под наблюдением в течении 10 дней;
— трупы умерщвленных и павших от бешенства животных сжигают или утилизируют на предприятиях по производству мясокостной муки. Допускается захоронение на скотомогильниках.
— снятие шкур с трупов запрещается;
— при выявлении случаев бешенства диких животных совместно с органами охраны природы и охотничьего хозяйства принимают все доступные меры (отстрел, отлов, затравка в норах) к снижению численности диких хищников, независимо от сроков охоты, установленных в данной местности.
6.6. В случае установления карантина по бешенству на территории субъекта Российской Федерации на основании решения высшего должностного лица субъекта Российской Федерации (руководителя высшего исполнительного органа государственной власти субъекта Российской Федерации) копия указанного решения в течение дня, следующего за днем его принятия, направляется в федеральный орган исполнительной власти в области нормативно-правового регулирования в ветеринарии и федеральный орган исполнительной власти в области ветеринарного надзора.
В решении об установлении карантина должен быть указан перечень ограничений на оборот животных, продуктов животноводства, кормов и кормовых добавок, а также срок, на который устанавливается карантин.
6.7. Федеральный орган исполнительной власти в области нормативно-правового регулирования в ветеринарии принимает решение об установлении на территории субъекта Российской Федерации карантина по бешенству в случае непринятия высшим должностным лицом субъекта Российской Федерации (руководителем высшего исполнительного органа государственной власти субъекта Российской Федерации) решения об установлении карантина.
В случае принятия решения об установлении карантина указанное решение действует до его отмены федеральным органом исполнительной власти в области нормативно-правового регулирования в ветеринарии.
6.8. В случае появления угрозы возникновения и распространения бешенства на территориях двух и более субъектов Российской Федерации решением федерального органа исполнительной власти в области нормативно-правового регулирования в ветеринарии может быть установлен карантин на территориях двух и более субъектов Российской Федерации.
7.1 Карантин с неблагополучного по бешенству хозяйства, пункта, района (области, края, республики) снимают после, проведения всего комплекса ветеринарно-санитарных и противоэпизоотических мероприятий в соответствии с требованиями настоящих Ветеринарных правил, в срок, установленный решением об установлении ограничительных мероприятий (карантина).
Перед снятием карантина государственный ветеринарный инспектор органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии совместно с ветеринарным специалистом подведомственного учреждения и представителем органа исполнительной власти уполномоченного на проведение санитарно-эпидемиологического надзора проверяют полноту выполнения плана мероприятий по ликвидации очага бешенства животных и предотвращения распространения возбудителя болезни и вносят по данному вопросу конкретные предложения с составлением акта. Акт направляют руководителю органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии для оформления и подготовки материалов на снятие карантина бешенству животных. В случае выявления невыполнения утвержденного плана мероприятий по ликвидации очага бешенства животных и предотвращения распространения возбудителя болезни инициируется проведение заседания специальной (противоэпизоотической) комиссии соответствующего муниципального образования субъекта Российской Федерации.
7.2. Руководитель органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии при получении от должностного лица учреждения, подведомственного органу исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии, заключения о выполнении предусмотренных ветеринарным законодательством Российской Федерации специальных мероприятий по ликвидации очагов бешенства, направляет в течение дня представление руководителю высшего исполнительного органа государственной власти субъекта Российской Федерации об отмене ограничительных мероприятий (карантина) на подведомственной территории, где был зарегистрирован очаг бешенства.
7.3. Руководитель высшего исполнительного органа государственной власти субъекта Российской Федерации в течение дня принимает решение об отмене (или продлении) ограничительных мероприятий (карантина) на территории, где был зарегистрирован очаг бешенства.
7.4. Карантин по бешенству отменяет руководитель высшего исполнительного органа государственной власти субъекта Российской Федерации на основе представления руководителя органа исполнительной власти в области ветеринарии — главного государственного ветеринарного инспектора субъекта Российской Федерации, по истечении двух месяцев со дня последнего случая заболевания животных бешенством при условии выполнения запланированных противоэпизоотических и профилактических мероприятий.
Представлен проект Ветеринарных правил осуществления профилактических, диагностических, ограничительных и иных мероприятий, установления и отмены карантина и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов бешенства животных.
Так, закрепляются положения о профилактике бешенства, о реализации мероприятий при подозрении на инфекцию, о лабораторной диагностике.
источник
4.1. При возникновении подозрения на заболевание бешенством организации и граждане – собственники животных, юридические лица, индивидуальные предприниматели, граждане, заключившие охотхозяйственные соглашения и федеральные органы исполнительной власти при наличии подведомственных им охотхозяйств (заказников), особо охраняемых природных территорий федерального значения немедленно (в течение 24 часов) сообщают (устно или письменно) должностному лицу органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения о подозрении на заболевание животных бешенством, о случаях заболевания или необычном поведении диких животных (отсутствие страха перед человеком, неспровоцированное нападение на людей или животных) и случаях покуса сельскохозяйственных и домашних животных дикими хищниками, собаками или кошками, принимают необходимые меры к надежной изоляции подозрительных по заболеванию или покусанных животных.
Покусавшие людей или животных собаки, кошки и другие животные (кроме явно больных бешенством) подлежат немедленной доставке владельцем или специальной бригадой по отлову безнадзорных собак и кошек в ближайшее государственное ветеринарное учреждение для осмотра и карантинирования под наблюдением специалистов в течение 10 дней.
В отдельных случаях, по разрешению руководителя государственного ветеринарного учреждения, животное, покусавшее людей или животных, может быть оставлено у владельца, выдавшего письменное обязательство содержать это животное в изолированном помещении в течение 10 дней и представлять его для осмотра в сроки, указанные ветеринарным специалистом данного учреждения, осуществляющим наблюдение.
Результаты наблюдения за карантинированным животным регистрируют в специальном журнале и в письменном виде сообщают учреждению, где прививают пострадавшего человека, и в территориальное управление Роспотребнадзора по месту жительства пострадавшего.
По окончании срока карантинирования клинически здоровые животные после предварительной вакцинации могут быть возвращены владельцам — при условии их изолированного содержания в течение 30 дней. Животных, заболевших бешенством, уничтожают.
4.2. При возникновении подозрения на заболевание бешенством животных на объектах, подведомственных федеральным органам исполнительной власти в области обороны, в сфере внутренних дел, в сфере исполнения наказаний, в сфере государственной охраны и в области обеспечения безопасности, руководители ветеринарных (ветеринарно-санитарных) служб указанных органов немедленно (в течение 24 часов) сообщают (устно или письменно) о подозрении на заболевание бешенством животных должностному лицу органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации (на территории которого расположен соответствующий объект), осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения (подразделения); организуют и осуществляют отбор проб биологического материала и направляют эти пробы в лабораторию (испытательный центр), входящую в систему органов и учреждений государственной ветеринарной службы Российской Федерации, или иную лабораторию (испытательный центр), научно-исследовательские учреждения аккредитованные в национальной системе аккредитации для исследования на бешенство.
В случае невозможности осуществления отбора проб патологического материала руководители ветеринарных (ветеринарно-санитарных) служб органов, указанных в настоящем подпункте, оказывают содействие специалистам госветслужбы в проведении отбора и направления проб биологического материала.
4.3. Должностное лицо органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения (подразделения) в течение 24 часов после получения информации о подозрении на возникновение очага бешенства:
— выезжает на место предполагаемого эпизоотического очага, совместно со специалистами органов, уполномоченных осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический надзор определяет границы предполагаемого эпизоотического очага (квартиры, жилые дома, личные подворья граждан, животноводческие помещения, скотобазы, летние лагеря, участки пастбищ, охотничьи хозяйства, пастбища, часть лесного массива, урочища, другие территории и другие объекты, где обнаружены больные бешенством животные). Границы эпизоотического очага определяются с учетом эпизоотической ситуации, хозяйственных и ландшафтно-географических особенностей местности;
— проводит эпизоотологическое расследование с составлением акта;
— осуществляет отбор проб биологического материала и направляет указанные пробы в лабораторию (испытательный центр), входящую в систему органов и учреждений государственной ветеринарной службы Российской Федерации, или иную лабораторию (испытательный центр), аккредитованную в национальной системе аккредитации, для исследования на бешенство.
4.4. Должностное лицо учреждения (подразделения), подведомственного органу исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющему переданные полномочия в сфере ветеринарии, в течение 24 часов после получения информации о подозрении на возникновение очага бешенства, информирует о подозрении на заболевание бешенством руководителя органа местного самоуправления, на территории которого располагается предполагаемый эпизоотический очаг.
4.5. Должностное лицо органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения (подразделения):
— любым доступным способом информирует население муниципального образования, на территории которого возник предполагаемый очаг бешенства и владельцев животных о требованиях настоящих Правил по предотвращению распространения бешенства
— уточняет количество имеющегося на учете поголовья кошек, собак, пушных зверей на территории муниципального образования, восприимчивых продуктивных животных в хозяйствах в зоне предполагаемого очага бешенства, наличие и необходимость дополнительной потребности в биопрепаратах для вынужденной специфической профилактики (вакцинации) бешенства
4.6. Руководитель органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии при получении им информации (уведомления) о возникновении подозрения на бешенство, немедленно (в течение 24 часов) обеспечивает направление в населенный пункт (местность), где расположен предполагаемый очаг бешенства, специалистов госветслужбы для:
— клинического осмотра животных и проведения эпизоотологического обследования предполагаемого эпизоотического очага;
— уточнения вероятных источников, путей заноса возбудителя болезни;
— уточнения границ предполагаемого эпизоотического очага и возможных путей распространения болезни,
— организации проведения комплекса мероприятий по предупреждению распространения и ликвидации болезни в случае подтверждения подозрения на бешенство (установления диагноза на бешенство).
Дата добавления: 2017-02-24 ; просмотров: 679 | Нарушение авторских прав
источник
Купить ГОСТ 26075-84 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО «ЦНТИ Нормоконтроль».
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
- Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
- Курьерская доставка (7 дней)
- Самовывоз из московского офиса
- Почта РФ
Распространяется на все виды животных и устанавливает методы лабораторной диагностики заболевания бешенством, вызываемого рабдовирусом.
Ограничение срока действия снято: Протокол № 3-93 МГС от 12.03.93 (ИУС 5-93)
2 Метод иммунофлуоресценции
3 Метод подавления иммунофлуоресценции
4 Метод реакции преципитации
5 Метод выявления телец бабеша-негри
6 Метод биологической пробы
7 Метод специфической биологической пробы
×
| Дата введения: | 01.07.1984 |
|---|---|
| Добавлен в базу: | 01.09.2013 |
| Заверение срока действия: | 01.01.2015 |
| Актуализация: | 01.01.2019 |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БЕШЕНСТВА
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ
РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР ИСПОЛНИТЕЛИ
ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР
Зам. начальника Главного управления ветеринарии П. П. Рахманин
УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 9 января 1984 г. № 48
сыворотка гипериммунная антирабическая (или иммуноглобулин);
сыворотка нормальная или физиологический раствор, pH 7,2-7,4.
7.2.1. Для проведения специфической биопробы отбирают 12 белых мышей (п. 6.3.1). Материал для заражения мышей готовят по п. 6.2.
7.2.2. Подготовленную для заражения суспензию разливают в две пробирки по 3 см 3 . Затем в одну из них вносят 3 см 3 антирабической гилериммунной сыворотки или иммуноглобулин, в другую — 3 см 3 нормальной сыворотки или физиологический раствор pH 7,2—7,4. Обе пробирки выдерживают в водяной бане в течение 10 мин при 37°С.
Каждой смесью заражают по шесть белых мышей интрацереб-рально в дозе 0,015—0,03 см 3 или в губу в дозе 0,1—0,2 см 3 .
7.4.1. Положительным на бешенство результатом специфической биопробы считают гибель мышей, зараженных материалом, обработанным нормальной сывороткой или физиологическим раствором в течение 30 сут. При этом мыши, инфицированные материалом после обработки антирабической иммунной сывороткой или иммуноглобулином, должны остаться живыми.
7.4.2. Отрицательный диагноз на бешенство может быть дан только по истечении 30 сут постановки биопробы, если нет специфической гибели мышей.
Редактор Р- С. Федорова Технический редактор В. Н. Малькова Корректор Н. Б. Жуховцева
Сдано в наб. 17.01.84 Подп. к печ. 15.03.84 0,75 уел. п. л. 0,75 уел. кр.-отт. 0,62 уч.-изд. л.
Ордена «Знак Почета» Издательство стандартов, 123557, Москва, Новопресненскнй пер., 3. Калужская типография стандартов, ул. Московская, 256. Зак. 280
УДК 636:576.8.07:006.354 Группа С79
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ Методы лабораторной диагностики бешенства
Methods of laboratory diagnostics of rabies
Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 9 января
1984 г. № 48 срок действия установлен
Несоблюдение стандарта преследуется по закону
Настоящий стандарт распространяется на все виды животных и устанавливает методы лабораторной диагностики заболевания бешенством, вызываемого рабдовирусом.
Стандарт применяют при диагностике заболевания животных в лабораториях ветеринарных научно-исследовательских учреждений, республиканских и областных ветеринарных лабораториях
Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 3452—81.
1.1. Для проведения исследований на бешенство в лабораторию направляют свежие трупы мелких животных целиком, от крупных животных — головной мозг.
Для постановки биопробы допускается использовать пробы мозга. консервированные в 30—50%-ном растворе глицерина,
1.2. Отобранный для исследования патологический материал упаковывают во влагонепроницаемую тару и в металлических контейнерах доставляют в лабораторию.
1.3. Патологический материал сопровождают документом, содержащим следующие данные:
наименование и адрес отправителя;
анамнестические и клинико-эпизоотологические данные.
Издание официальное Перепечатка воспрещена
(6) Издательство стандартов, 1984
2. МЕТОД ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ
Сущность метода заключается в соединении меченых антител со специфическим антигеном и наблюдении светящихся комплексов «антитело-антиген» в полях зрения люминесцентного микроскопа.
Термостат с температурой нагрева 37°С.
Пробирки бактериологические по ГОСТ 25336-82.
Набор инструментов для вскрытия черепной полости и извлечения головного мозга животных.
Горелка газовая или спиртовая.
Диагностический иммуноглобулин флуоресцирующий антирабический (ДАФИ).
Масло нефлуоресцирующее иммерсионное по ГОСТ 13739-78.
Раствор фосфатный буферный, pH 7,4.
2.2.1. Из каждого отдела головного мозга (аммонова рога, мозжечка, коры больших полушарий и продолговатого мозга) готовят по два препарата — мазка-отпечатка.
Не допускаются для исследования пробы, консервированные глицерином, фиксированные этиловым спиртом, формалином и другими средствами, вызывающими денатурацию и разрушение антигенов или создающими дополнительный («свой») фон свечения.
2.2.2. Препараты высушивают на воздухе и фиксируют в охлажденном ацетоне при плюс 4 или минус 12°С в течение 4—12 ч. Затем препараты извлекают из ацетона, высушивают на воздухе 10—15 мин и помещают их во влажную камеру (чашки Петри с увлажненным дном).
2.2.3. Диагностический антирабический флуоресцирующий иммуноглобулин (ДАФИ) в рабочем разведении наносят равномерно на всю поверхность препарата при помощи пипетки (примерно 0,1 см 3 на один препарат) ( закрывают камеру с препаратами, помешают в термостат и выдерживают 30 мин при 37°С. Затем предметные стекла с препаратом троекратно промывают, погружая их каждый раз на 10 мин в сосуд, наполненный фосфатным
буфером pH 7,4, промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
На окрашенные препараты наносят иммерсионное нефлуоресцирующее масло.
2.3. Проведение исследования
2-3.1. Подготовленные препараты просматривают под люминесцентным микроскопом с иммерсионной системой.
2.4.1. При положительных результатах исследования в препаратах, содержащих антиген вируса бешенства, обнаруживают разной величины и формы ярко светящиеся желто-зеленым цветом гранулы в нейронах и вне клеток. Размер их колеблется от едва заметных в виде песчинок образований до 15—20 мм-
Не пораженная вирусом бешенства мозговая нервная ткань светится тусклым серовато-желтым или зеленоватым цветом.
3. МЕТОД ПОДАВЛЕНИЯ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ
Сущность метода заключается в способности рабического антигена, связанного с нефлуоресцирующими антителами, зторично не входить в соединение с флуоресцирующим специфическим конъюгатом. Это свойство используется для доказательства специфичности свечения комплекса «антиген-антитело» при исследовании препаратов, предварительно не обрабатываемых нефлуоресцирующими антителами.
3.1. Аппаратура, материалы, реактивы и растворы
3.1,1- Аппаратура, материалы, реактивы и растворы, указанные в п. 2.1, и дополнительно:
иммуноглобулин 5%-ный антирабический нефлуоресцирующий моноспецифический;
раствор физиологический нейтральный.
3.2. Подготовка к исследованию
3.2.1. На фиксированные препараты, приготовленные из исследуемых участков головного мозга, наносят пипеткой 5%-ный антирабический нефлуоресцирующий моноспецифический иммуноглобулин, выдерживают их в течение 30 мин во влажной камере в термостате при 37 °С. Затем препараты промывают двукратно нейтральным физиологическим раствором и окрашивают антирабическим флуоресцирующим иммуноглобулином (ДАФИ) по п. 2.2.3.
3.3. Проведение исследования
3.3.1. Препараты просматривают под люминесцентным микроскопом с иммерсионной системой.
3.4.1. В препаратах, содержащих антиген вируса бешенства, предварительно обработанных нефлуоресцирующим и затем флуо-
ресцирующим иммуноглобулином, свечения не должно быть, а в препаратах, ранее обработанных только флуоресцирующим* иммуноглобулином наблюдают специфическое свечение.
4, МЕТОД РЕАКЦИИ ПРЕЦИПИТАЦИИ
Сущность метода заключается в свойстве антител-преципи i и-нов и гомологичных им антигенов диффундировать в агаровом геле и при соединении образовывать видимые визуально линии преципитатов-комплексов «антитело-антиген».
Этим методом допускается исследовать несвежий патологический материал, контаминированный бактериальный микрофлорой-
Осветитель для бактериологических работ.
Пипетки мерные и пастеровские по ГОСТ 20292-74.
Трубка металлическая тонкостенная диаметром 4—5 мм.
Метиловый оранжевый, 1%-ный раствоор в 50%-ном этиловом спирте по ГОСТ 5962-67.
Диагностический иммуноглобулин антирабический.
Антиген отрицательный контрольный.
Антиген положительный контрольный.
Гель агаровый биофабричного изготовления или приготовленный по рецептуре:
агар-агар «Дифко» или аналогичный — 15 г, натрий хлористый — 8,5 г,
1%-ный раствор метилового оранжевого в 50%-ном этиловом спирте —10 см 3 ,
вода дистиллированная —1000 см 3 .
Агаровый гель с pH 7,2—7,4 разливают в стерильную посуду, автоклавируют при 0,5 атм в течение 30 мин, хранят в холодильнике при 4°С.
4.2.1. Реакцию преципитации (РП) ставят на обезжиренных предметных стеклах, -на которые предварительно наносят каплю расплавленного агара, пипеткой равномерно распределяя ее по стеклу, и делают тонкий мазок. На застывший слой агара наливают сверху 2,5 см 3 агарового геля толщиной приблизительно 2 мм.
После застывания агара делают в нем лунки металлической тонкостенной трубочкой диаметром 4—5,6 мм согласно трафарету. Агаровые столбики осторожно извлекают ученическим пером, не допуская отслаивания от стекла тонкого слоя агарового геля.
Ь—кора (правое полушарие); С— аммонов рог (левый); Д—-аммонов рог (правый); Л—мозжечок; Ж—
продолговатый мозг; 1, 2, 3, 4— лунки с разведением глобчяина соответственно 1:2, 1:4, 1:8* 1:16
Положительная РП со всеми разведениями глобулина Черт. 2
В РП исследуют от крупных животных (лошадей, крупного рогатого скота, собак, лисиц и др.) следующие части головного мозга—кору полушарий левой и правой сторон, аммоновы рога— левый и правый, мозжечок и продолговатый мозг. У мелких животных РП ставят с какими-либо тремя отделами мозга. От мышей исследуют весь головной мозг, который растирают в ступке или в самой черепной коробке в массу пастообразной консистенции.
Подготовленные предметные стёкла помещают во влажную камеру (чашки Петри с увлажненным дном) и при постановке реакции лунки заполняют патологическим материалом и диагностическим антирабическим иммуноглобулином (черт. 1—4).
В центральные лунки, обозначенные на трафарете А,В,С,Д.Е,Ж, вносят исследуемый патологический материал, в периферические лунки 1,2,3,4, (см. черт. 1) — диагностический антирабический иммуноглобулин (1—2 капли) в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 (от исходного разведения) на физиологическом растворе.
Одновременно ставят контрольные опыты с положительными и отрицательным антигенами, но каждый на отдельном стекле, используя те же разведения иммуноглобулина.
После заполнения лунок соответствующими компонентами чашки Петри (влажные камеры) помещают в термостат при 37°С на 6 ч. Затем выдерживают чашки при комнатной температуре еще 42 ч.
источник
Бешенство (Б) – остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением ЦНС. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек.
Болезнь регистрируется в различных регионах земного шара. Не отмечено случаев распространения болезни в Австралии, Великобритании, Японии. Заболевание почти всегда заканчивается смертью. Имеются фактически документированные случаи выздоровления от бешенства человека и собак после экспериментальной инфекции.
Вирус бешенства (ВБ) относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. В настоящее время установлено, что ВБ имеет 4 серотипа, что обусловлено, видимо, различием в составе мембранных белков. Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны, но различаются по вирулентности. ВБ обладает ГА и ГАД свойствами. Между инфекционной и ГА активностью существует линейная зависимость. Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют ВНА, КСА, антиГА и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) АТ.
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений (они имеют меньшее значение) и, главным образом, результатов лабораторных исследований.
Лабораторная диагностика заключается в исследовании головного мозга животных с целью выявления вирусного АГ в ИФ, РДП, обнаружении телец Бабеша — Негри и биопробе на белых мышах.
В Российской Федерации в настоящее время организовано производство наборов для диагностики Б в ИФ и РДП в ВНИТИБП и КазНИВИ.
Выделение вируса. В лабораторию для исследования направляют свежие трупы мелких животных, от крупных животных — голову или головной мозг. В некоторых случаях допускается консервирование головного мозга в 50%-ном глицерине. Труп или голова должны быть тщательно упакованы в полиэтиленовый мешок, мозг — в банку с притертой стеклянной или резиновой пробкой, залитой парафином. Материал упаковывается во влагонепроницаемую тару. Для вирусологических исследований пригоден только не консервированный мозг. Необходимо помнить, что вскрытие трупа, извлечение мозга и другие операции с патологическим материалом следует проводить в условиях стерильности и строгого соблюдения мер личной профилактики: прочно фиксируют голову животного, защищают руки 2-мя парами перчаток (хирургические и анатомические), для защиты глаз надевают очки, а на нос и рот-6-слойную марлевую повязку.
Лабораторные исследования материала на бешенство проводят вне всякой очереди; результаты немедленно сообщают врачу хозяйства и главному врачу района (города).
Индикация и идентификация вируса. Порядок проведения исследований: из каждого отдела головного мозга левой и правой сторон (аммонова рога, мозжечка, коры полушарий и продолговатого) готовят по 4 мазка-отпечатки для ИФ и обнаружения телец Бабеша — Негри; с мозговой тканью ставят РДП; при отрицательных результатах ставят биопробу.
Обнаружение специфических телец-включений. Мазки-отпечатки окрашивают по Селлерсу, Муромцеву или другими методами. После окрашивания препараты просматривают в световом микроскопе с иммерсионной системой. Положительным результатом считают наличие специфических телец Бабеша — Негри (при окраске по Селлерсу — четко очерченные овальные или продолговатые гранулярные образования розово-красного цвета в протоплазме, при окраске по Муромцеву — светло-фиолетовые с темно-синими включениями тельца Бабеша — Негри, чаще они расположены вне нервных клеток.
Наиболее характерная особенность телец Бабеша — Негри — их внутренняя структура, позволяющая абсолютно точно дифференцировать их. Внутри видны маленькие зернышки — базофильные зернистости темно-голубого, даже черного цвета величиной 0,2-0,5 мкм.
Диагностическая ценность обнаружения телец-включений для доказательства заражения ВБ общепризнана. Однако и у здоровых животных, в особенности у кошек и белых мышей, имеются образования, присутствие которых может вызвать диагностические затруднения. В отдельных случаях в мозге кошки можно с уверенностью дифференцировать подобные включения от телец Бабеша — Негри, и здесь рекомендуется воспользоваться методами идентификации, в особенности ИФ. Равным образом и у собак, погибших в результате отравления змеиным ядом или поражения электрическим током, можно найти тельца-включения, напоминающие тельца Бабеша – Негри. Тельца Бабеша — Негри выявляют лишь в 65-85% случаев бешенства, поэтому отсутствие их не является отрицательным ответом, и материал исследуется в других тестах (ИФ, РДП, биопроба).
ИФ. Один из основных тестов при диагностике Б. При высококвалифицированном выполнении получают в 99-100% совпадения с методом биопробы. Обычно в диагностической практике используют прямой метод ИФ, который проводят с применением антирабического флюоресцирующего Ig. Фиксацию препаратов в охлажденном (8-10°С) ацетоне проводят не менее 4-х ч. В качестве отрицательного контроля используют мазки-отпечатки головного мозга здоровых белых мышей. Учитывают результаты визуально в люминесцентном микроскопе на основе оценки интенсивности свечения комплекса АГ-АТ. АГ ВБ выявляется в виде ярких желто-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины в клетках (чаще вне клеток). Диагноз считают установленным, если в нескольких полях зрения обнаруживают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленым свечением или множество мельчайших точек, В контроле подобного свечения не должно быть.
Для доказательства специфичности свечения комплекса АГ-АТ используют метод подавления ИФ, который заключается в способности рабического АГ, связанного с нефлюоресцирующими AT, вторично не вступать в соединение с флюоресцирующими специфическими AT. Для этого на фиксированные препараты, приготовленные из исследуемого головного мозга, наносят 5%-ный антирабический нефлюоресцирующий Ig, выдерживают 30 мин при 37°С во влажной камере, промывают физраствором, а затем окрашивают флюоресцирующим антирабическим Ig общепринятым прямым методом. В обработанных таким образом препаратах флюоресценции не должно быть.
Метод ИФ дает возможность обнаруживать ВБ в клетках роговицы глаз и предварительно поставить диагноз прижизненно: во время болезни животных, а также за 1-2 дня и более до клинического её проявления. Метод может быть использован для исследования подозреваемых в заболевании Б животных, а также клинически здоровых собак и кошек, покусавших людей и животных. Для этого готовят отпечатки с роговицы, соблюдая все правила личной безопасности, раскрывают глазную щель животного большим и указательным пальцами и на слегка выпяченное глазное яблоко надавливают поверхностью предметного стекла, отступив 0,5 см от конца. Нужно следить, чтобы животное не моргало третьим веком, так как со стекла удаляются эпителиальные клетки и получается некачественный мазок. С каждого глаза делают не менее 2 препаратов, содержащих по 2 отпечатка. Для контроля аналогичным образом готовят отпечатки роговицы от здоровых животных. Их можно приготовить в хозяйстве. Отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в течение 4 ч при 4°С, упаковывают и отправляют в лабораторию. Окрашивают препараты, как при ИФ, по общепринятой методике.
В препаратах, полученных от больных животных или находящихся в конце инкубационного периода болезни, в цитоплазме многих эпителиальных клеток наблюдаются разной формы ярко светящиеся гранулы разного размера — от пылевидных точек до 2 мкм и более. С целью получения достоверных результатов в каждом препарате просматривают по 50-100 клеток, а всего от животного — не менее 200-400 клеток. Результаты микроскопии считают положительными, если в отпечатках роговицы животного обнаруживают 11% и более клеток с характерными очажками свечения. Необходимо иметь в виду, что в препаратах от здоровых животных (контроль), вследствие аутофлюоресценции, могут встречаться единичные клетки с подобными по форме и свечению очажками.
Важно отметить, что ИФ дает возможность ускорить ответ при окончательной постановке диагноза путем биопробы, поскольку диагноз при Б может быть установлен только на 4-8-й день после заражения мышей исследуемым материалом, а инкубационный период заболевания мышей может достигать и 20 дн. ИФ может выявлять ВБ в тканях подчелюстной слюнной железы. Из подчелюстных слюнных желез готовят препараты-мазки, беря материал не менее чем из 6 разных участков железы, так как распределение в ней вируса неравномерно. Часто, чтобы получить отпечаток, приходится делать сильный нажим, поскольку из-за обилия муцина на стекле остается мало материала.
Показана возможность идентификации ВБ в коже методом ИФ, С этой целью берут пробы кожи головы, а также фолликулы сенсорных и тактильных волос морды или латеральных сенсорных сосочков (на щеке собаки). Пробы хранят при -20 или -70°С. Из них делают криосрезы, которые обрабатывают флюоресцирующим глобулином. Результаты ИФ анализа, полученные при идентификации ВБ в коже, в высокой степени коррелируют с данными, полученными при исследовании мозга того же животного. Показана близкая корреляция между обнаружением АГ вируса в пробах мозга и тканях губы методом ИФ.
РДП. Применяют для обнаружения АГ ВБ в неконсервированном головном мозге животных, павших от уличного бешенства, или мышат, используемых в биопробе. РДП ставят микрометодом на предметных стеклах, используя 1-1,5%-ныЙ агаровый гель по общепринятой методике. Наибольший процент положительных результатов выявляют при использовании следующего трафарета: А — аммонов рог (правая сторона); В — кора головного мозга (правая сторона); С — мозжечок (правая сторона);
Д — продолговатый мозг (правая сторона); + (плюс) — положительный контроль; — (минус) — отрицательный контроль; 1, 2, 3, 4 — лунки с разведением специфического иммуноглобулина 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 соответственно
Из каждого отдела головного мозга с помощью пинцета готовят гомогенную пастообразную массу, которую и помещают в соответствующие лунки. От мышей исследуют весь головной мозг. Из отделов головного мозга левой стороны готовят АГ аналогичным образом ( на каждую экспертизу в общей сложности требуется 4 предметных стекла с агаровьм гелем). Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч. При наличии 1 или 2-3 линий преципитации между лунками, содержащими АГ и иммуноглобулин, реакцию считают положительной.
РДП проста по выполнению и специфична, но процент выявления вирусного АГ в исследуемом материале составляет 45-70. При исследовании головного мозга мышей, полученного при положительной биопробе, РДП выявляет до 100% случаев. Отсутствие в исследуемом материале телец Бабеша — Негри, специфической флюоресценции и отрицательная РДП не дают основания исключить наличие вируса. В этом случае окончательный диагноз ставят по результатам биопробы на белых мышах с последующей идентификацией вируса.
Биопроба. Принято считать, что биопроба является более эффективным методом, чем обнаружение телец Бабеша — Негри, ИФ и др. Однако и она в отдельных случаях оказывалась отрицательной, несмотря на подтверждение диагноза Б путем обнаружения телец-включении и ИФ. Процент отрицательных результатов по биопробе колебался от 1,3 до 12.
Сведения о различной эффективности биопробы могут быть объяснены рядом факторов: выбора экспериментального животного, количества их в опыте, способа заражения, способа и срока хранения материала до поступления в лабораторию. Может играть роль и явление интерференции инфекционных частиц неактивными частицами, если для инокуляции используют недостаточно разведенный материал.
В мозге и слюнных железах лисиц и скунсов, павших от бешенства, обнаружено вещество, ингибирующее инфекционность вируса, что не позволяет провести диагностику болезни у этих животных методом внутримозгового заражения мышей. Наличие ингибирующего вещества в исследуемом материале не препятствует выявлению вирусного АГ методом ИФ; для скунсов и лисиц это самый чувствительный метод диагностики.
Из животных всех видов (кролики, морские свинки, взрослые белые мыши и хомячки), использованных для биопробы, многие отдают предпочтение мышам-сосунам, поскольку они более чувствительны к разным штаммам ВБ и менее опасны в работе. Сирийские хомячки по чувствительности не уступают мышам, но они менее доступны.
РСК. Выявление специфического АГ в РСК при диагностике бешенства применяется реже, чем другие методы. Из присланного для исследования мозга готовят АГ. Для этого мозговую ткань (особенно богаты АГ, связывающим комплемент, кусочки таламуса и стволового отдела мозга) растирают в вероналовом буфере в соотношении 1:10 и оставляют при комнатной температуре на 1 ч, после чего суспензию инактивируют при 56°С в течение 5 ч. Такая обработка убивает вирус и снимает антикомплементарность мозговой ткани, не повреждая специфический АГ. Суспензию центрифугируют 15 мин при 3500 мин- 1 из надосадочной жидкости, которая представляет собой материал для исследования на наличие АГ, готовят 2-кратно возрастающие разведения от 1:2 до 1:64 и используют для исследования в РСК.
ИФА. В ИФА специфическое окрашивание АГ в клетках мозга павших от бешенства животных выявляют как в свежевзятых, хранившихся в глицерине, а также в пробах, хранившихся без глицерина при 20°С 8-18 ч. Данный тест пригоден для рутинной диагностики бешенства у животных, для выявления АГ ВБ в тканевых парафиновых срезах при фиксации препаратов 10%-ным р-ром формалина с рН 5,3 и последующей обработки препаратов, заключенных в парафин, пепсином.
В отличие от РН на мышах и в культуре клеток ИФА позволяет выявить AT у животных в течение нескольких часов, ИФА — наиболее перспективный лабораторный метод обнаружения AT и индикации самого вируса. Экспресс-методом диагностики бешенства является техника захвата и метод ИФ для выявления АГ ВВ. Доказано, что метод выявления АГ ВБ в парафинизированных срезах пероксидазо-антиперокисдазным методом значительно превосходит метод ИФА. В 1987 г. создан набор для быстрой энзимиммунодиагностики бешенства (RREID), приемлемый для эпидемиологических и лабораторных исследований.
РН. Используется редко. Рекомендуется модификация с разведением ВБ и постоянной дозы γ-глобулина. ИН 2 указывает на АГ специфичность выделенного вируса.
Вариантная идентификация с помощью монАТ. С помощью монАТ к гликопротеинам ВБ селектированы АГ варианты, среди которых выделены фенотипически термолабильные (авирулентные) варианты. При использовании 2-х групп монАТ показано, что штаммы дикования отличаются от шт. Fixe (Пастера), CVS, Flury HEP, ERA и «утиных» штаммов по АГ детерминантам. Изучение с помощью монАТ 7-ми штаммов, выделенных от больных Б людей, позволило выявить определенные отличия их от вакцинного штамма в отношении АГ детерминант.
Общепризнано, что AT отличия между дикими штаммами удается обнаружить, используя монАТ против нуклеокапсидного AT N, которые реагируют с цитоплазматическими включениями зараженных вирусом клеток; против гликопротеина (G АГ), которые реагируют с мембранами инфицированных клеток, лизируют эти клетки в присутствии комплемента и нейтрализуют вирус. В связи с возможной АГ вариабельностью поверхностного гликопротеина ВБ из различных географических зон в качестве протективного АГ использовали рибонуклеопротеин, характеризующийся консервативностью АГ структуры. Таким образом, не только G белок, но и РНП ВБ обладают протективной активностью.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Эти методы для бешенства нетипичны, поскольку используются только с целью проверки поствакцинального иммунитета. Для обнаружения и титрования поствакцинальных AT используют РН, которую ставят общепринятым методом. В качестве АГ используют фиксированный ВБ. РН на клетках ВНК-21 была более чувствительной, чем непрямая ИФ при выявлении AT в сыворотках вакцинированных лис. Кроме того, предложены РТГА и ELISA.
РТГА. Пока еще не нашла широкого применения в диагностической практике из-за наличия в сыворотках крови неспецифических ингибиторов, к которым ВБ высокочувствителен, а главное, ГА АГ, не подвергавшиеся достаточной очистке, обладали низкой чувствительностью. Для приготовления ГА АГ ВБ предложено использовать шт. Москва, выращенный в культуре клеток ВНК-21, после его обработки сапонином с последующей очисткой и концентрированием. ГА отделяют от других компонентов вириона ультрацентрифугированием. Полученный препарат имел степень очистки 99,92%, обладал высокой ГА активностью (1:128), хорошо сохраняющейся в течение 1 мес при рН 5-9.
Перед постановкой РТГА следует проводить умеренную 2-кратную трипсинизацию гусиных эритроцитов для их сенсибилизации. При использовании 0,25%-ной взвеси трипси-низированных эритроцитов (лучше 10 7 клеток в 1 мл) чувствительность РТГА повышается в 4 раза. Для разбавления АГ и сывороток применяют боратно-солевой р-р (рН 9) с добавлением 0,4% бычьего сывороточного альбумина. Взвесь эритроцитов готовят в солевом р-ре с кислым рН, чтобы после соединения со смесью вируса и сывороток, рН которой 9, окончательный рН установился бы в пределах 6,2. После внесения в лунки суспензии эритроцитов панель встряхивают, заклеивают прозрачной пленкой и ставят на лед. Результаты РТГА учитывают через 40-50 мин, а с эритроцитами 2-дн цыплят или макаки-резус — через 1-1,5 ч.
Разработан радиоиммунологический анализ, основанный на способности AT связываться с меченым 125 1-АГ ВБ. Меченый IgG, выделенный из антирабической гипериммунной сыворотки, можно применять для обнаружения АГ ВБ твердофазным РИА. Лучшие результаты получены при использовании фосфатно-солевого р-ра (рН 6,0) с ионной силой 0,01 М и меченого IgG с активностью 200-250 тыс. имп./мин.
Твердофазный конкурентный РИА применим для выявления антирабических AT в сыворотке и гибридомных супернатантах.
Дифференциальная диагностика. Необходимо исключить болезнь Ауески, при которой больные животные неагрессивны, не бывает извращения аппетита. У собак исключают нервную форму чумы. Подозрение на бешенство может возникнуть при инфекционном энцефаломиелите лошадей. Комплекс лабораторных исследований позволяет поставить точный диагноз на бешенство. Предложен новый метод дифференциации различных штаммов ВБ, основанный на рестриктазном расщеплении продуктов амплификации в ПЦР сегмента гена N.
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
источник