Пероральная вакцина против бешенства

В статье приводятся данные по перспективности иммунопрофилактики плотоядных животных пероральной вакцинацией против бешенства. На диких плотоядных животных были изучены иммуногенные свойства тканевой и культуральной вакцин установлено, что оба вида вакцин обладают в достаточной степени иммуногенными свойствами, вызывали образование в высокой степени рабицидных антител.

Бешенство — это острое вирусное инфекционное заболевание, общее для человека и животных, вызывающее тяжелое поражение нервной системы и 100% смертельный исход. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек. Источником вируса бешенства являются дикие и домашние животные. Разносят бешенство из региона в регион мигрирующие дикие звери, которые могут контактировать с домашними.

К диким животным относятся — волки, лисы, енотовидные собаки, барсуки, летучие мыши, грызуны, к домашним — собаки, кошки, лошади, свиньи, мелкий и крупный рогатый скот. Количество домашних и диких животных, больных бешенством, в настоящее время растет во всем мире [1, 2, 3].

Главным резервуаром и источником возбудителя бешенства являются дикие животные (волки, лисы, еноты, песцы, хорьки и др.), бродячие собаки и кошки. В природных очагах Европы, прежде всего, болеют лисицы, енотовидные собаки, волки, шакалы, куницы, барсуки; в Северной Америке — лисицы, скунсы; в Центральной и Южной Америке — летучие мыши-вампиры; в Азии — волки, лисицы, шакалы, еноты и многие другие хищники. В природных очагах заражаются от диких животных, формируют городские и сельские очаги собаки и кошки [4, 5].

Заражение домашних животных происходит обычно при их непосредственном контакте с больными представителями дикой фауны и безнадзорными собаками и кошками. Домашние животные, как и человек, заражаются через укус или при ослюнявливании поврежденной поверхности кожного покрова.

Вирус бешенства непродолжительное время находится на месте внедрения, затем проникает в спинной и головной мозг, оттуда попадает в слюнные железы, где размножается на нервных узлах. Затем он выходит в протоки слюнных желез и на поверхность слизистой оболочки, заражая слюну. Вирус проникает также в область глаз, легкие, надпочечники, почки, скелетные мышцы, поджелудочную железу, молочные железы (выделяется с молоком).

Симптомы бешенства появляются лишь после распространения вируса по всему организму животного.

Наиболее характерные признаки заболевания — слюнотечение, агрессивность, параличи. Бешенство у животных может протекать в буйной и тихой форме. Наиболее опасная тихая форма бешенства, при которой признаки заболевания выражены слабо, поэтому ее поздно распознают и не принимают мер предосторожности [6, 7].

Ветеринарно-продовольственный департамент Эстонии сообщил сегодня о том, что начнет весеннюю вакцинацию от бешенства диких животных – лис и енотовидных собак. Вакцина в приманках будет разбрасываться с малых самолетов. Предыдущая вакцинация проводилась осенью. Вакцинация популяций диких животных осуществляется в Эстонии с осени 2005 года.

Опыт европейских стран показал, что наиболее успешный способ борьбы с бешенством диких животных — оральная вакцинация. Раскладка вакцины является наиболее перспективным способом решения проблемы иммунизации плотоядных животных против бешенства. По внешнему виду приманка представляет собой цилиндр или параллелепипед серого или темно-коричневого цвета. Изготавливается из продуктов съедобных для плотоядных животных и обладает специфическим запахом для их привлечения. Брикет изготовлен таким образом, что животное не может его проглотить целиком и раскусывает. Целостность капсулы с вакциной нарушается, и содержимое попадает на слизистую ротовой полости животного и, проникая в организм, формирует иммунный ответ на 21 день после вакцинации. В целях контроля поедаемости приманок в их состав введен биомаркер (тетрациклин), накапливающийся и сохраняющийся пожизненно в зубах и костных тканях животного и обнаруживаемый флюоресцентным методом при мониторинговых исследованиях [8, 9].

Объектами исследования были корсаки – степные лисицы. Испытывалась тканевая вакцина, изготовленная нами из мозга овец и культуральная вакцина, полученная на культурах из ткани почки. Напряженность иммунитета у диких плотоядных животных изучали 1 и 2-кратной пероральной вакцинацией [10].

Степень иммуногенности вакцин определяли серологическими исследования титров антител против бешенства в сыворотке крови у иммунизированных животных определяли в реакций диффузной преципитаций и нейтрализации интрацеребральным методом на белых мышах.

Изучение иммуногенности разработанных пероральных вакцин проводили на 9 корсаках. Результаты исследования иммунизации приведены в таблице 1.

Таблица 1 – Титры антирабицидных антител после пероральной вакцинации плотоядных животных

Исследованиями установлено, что пероральные вакцины, как тканевые, так и культуральные при однократном и двукратном скармливаний вызывают образование специфических антирабицидных антител в достаточно высоких титрах.

Наиболее высокие титры антител против бешенства были установлены у животных, которым применяли тканевую пероральную вакцину. У них титры антител были при однократной вакцинации в пределах 6,8±0,4 и при двукратной — 8,5±0,8.

У подопытных животных, которым применяли культуральные вакцины, при однократной вакцинаций титры антирабицидных антител были в пределах показателей 5,9±0,8 и при двукратной вакцинаций 10,5±2,1.

У контрольных животных, которые не были вакцинированы, специфические антирабицидные антитела не выявлены.

Проверку рабицидной активности сыворотки крови у вакцинированных животных проводили путем титрации на белых мышах. Для титрации вакцины брали 80 мышей в трех недельном возрасте, весом 12-13 граммов из расчета по 30 мышей для одного вида вакцины и разделили их на 2 группы по 5 мышей в каждой. Результаты проверки иммуногенности пероральных антирабических вакцин в реакций нейтрализаций приведены в таблице 2.

Таблица 2 — Проверка антирабицидных свойств сыворотки крови перорально вакцинированных собак на белых мышах в реакций нейтрализаций

Оба вида антирабических пероральных вакцин обеспечила сохранность на 100% зараженных фикс — вирусом животных. Все мыши, которым ввели разведения сывороток крови полученного от иммунизированных пероральными вакцинами остались живыми. Все белые мыши служившие контролем погибли.

Полученные нами пероральные вакцины обладают в досточной степени иммуногенными свойствами и можно применять для профилактики бешенства диких плотоядных животных.

источник

Бешенство остается в числе важнейших проблем здравоохранения. В мире от него ежегодно умирает около 50 000 человек, постэкспозиционную профилактику получают около 10 млн. человек. В России в 2004 г. было 17 случаев бешенства (в т.ч. 6 детей), в 2005 г. — 14 (4 детей), в 2007 — 8 (детей не было); Вакцина против бешенства вводится 200-300 тыс. лиц в год.

Источником и резервуаром вируса являются дикие плотоядные, особенно лисы и волки, а также собаки, кошки, а в странах Америки — летучие мыши. Человек заражается при укусе, при ослюнении поврежденной кожи или слизистых, редко через загрязненные слюной предметы, при разделке туш и т.п. Рабдовирус в слюне больного животного появляется не ранее, чем за 10 дней до развития у него симптомов бешенства, что определяет срок наблюдения при укусе домашним животным. Инкубационный период — от нескольких дней до 1 года (чаще 30-90 дней) зависит от инфицирующей дозы и места укуса: наиболее опасны укусы лица, пальцев и кистей рук, половых органов.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Экстренная (постэкспозиционная) — профилактика бешенства проводится лицам, контактировавшим с животным, предэкспозиционная — лицам ряда профессий — инактивированными вакцинами и специфическими иммуноглобулинами.

[7], [8], [9], [10], [11]

Для постэкспозиционного использования вакцины против бешенства противопоказаний нет.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]

[21], [22], [23], [24], [25], [26]

Перед применением в ампулу вносят 1 мл растворителя, раствор должен быть использован в течение не более 5 мин., его вводят медленно внутримышечно в Дозе 1 мл детям старше 5 лет и взрослым в дельтовидную мышцу, детям до 5 лет — в переднелатеральную поверхность бедра. Введение в ягодицу не допускается.

[27]

В ампулу с вакциной вносят 3 мл растворителя, при интенсивном встряхивании время полного растворения — не более 5 мин. Вводят в подкожную клетчатку живота, отступя от средней линии на 2-3 пальца, на уровне или ниже пупка (как исключение — в межлопаточную область). При ослюнении, поверхностных укусах, царапинах туловища или конечностей домашним животным, которое заболело в течение 10 дней после укуса, детям до 8 лет доза вакцины составляет 2 мл, старше 8 лет — 3 мл. При более серьезных повреждениях домашними и при любых укусах дикими животными разовая доза составляет соответственно 4 и 5 мл.

Вакцина против бешенства разводится 1 мл воды для инъекций и вводится внутримышечно в дельтовидную мышцу, детям раннего возраста — в переднебоковую поверхность бедра дозе 1 мл независимо от возраста.

Препараты, применяемые для профилактики бешенства

КОКАВ — вакцина культуральная сухая концентрированная очищенная инактивированная, Россия

Ослабленный вирус бешенства, выращенный в культуре клеток почек сирийских хомяков, инактивированный УФ-лучами, активность >2,5 ME. Содержит канамицина сульфат до 150 мкг/мл. Хранят при 2-8°

Рабивак-Внуково-32 (КАВ) — вакцина культуральная сухая, Россия

Тот же вирус, что и в КОКАВ, но с активностью 0,5 ME. Содержит канамицина сульфат до 150 мкг/мл и следам (до 0,5 мкг) бычьего альбумина. Хранят при 4-8°

Рабипур — Новартис Вакцине и Диагностике ГмбХ и Ко, КГ, Германия

Штамм вируса Flury LEP, выращенный на культуре куриных фибробластов, инактивированный бета-пропиолактоном. Активность >2,5 ME. Хранят при 2-8°

Иммуноглобулин антирабический из сыворотки человека — Сычуан Юанда Шуян, Китай

Раствор для инъекций 150 МЕ/мл. Флаконы 1, 2, 5 мл. (Поставщик ОАОК «Торговый дом Аллерген»)

Иммуноглобулин антирабический из сыворотки лошади, Россия, Украина

Активность не менее 150 МЕ/мл. Ампулы по 5 и 10 мл в; комплекте с ИГ в разведения 1:100. Хранят при 3-7

Иммуноглобулин антирабический из сыворотки человека вводят внутримышечно, взрослым и детям — 1 дозу 20 МЕ/кг — но не более, т.к. это может подавить продукцию антител. Часть дозы — максимально — вводят, инфильтрируя рану, а остаток — внутримышечно (бедро, ягодица) вместе с 1-й дозой вакцины — в дельтовидную мышцу — дальше от Иг.

В случае задержки, иммуноглобулин должен быть введен не позднее восьмого дня после первой дозы вакцины, независимо от интервала времени между контактом с вирусом и началом терапии. Для обеспечения хорошей инфильтрации пораженных участков у детей (особенно при множественных укусах) препарат разводят в 2-3 раза 0.9% раствором NaCl.

Иммуноглобулин антирабический из сыворотки крови лошади вводится в дозе 40 МЕ/кг массы тела после обязательной постановки внутрикожной пробы с препаратом, разведенным 1:100. При отрицательной пробе под кожу плеча вводят 0,7 мл иммуноглобулина, разведенного 1:100, и через 10 мин при отсутствии реакции дробно в 3 приема с интервалом 10-15 мин — всю дозу неразведенного препарата, подогретого до 37±0,5°. Часть дозы вводят вокруг мест укуса, а остальное — внутримышечно. При положительной кожной или подкожной пробах препарат вводят по витальным показаниям при дробной десенсибилизации. Перед первой инъекцией внутримышечно вводят антигистаминные средства, рекомендуется подкожное инъекция 0,1% раствора адреналина в возрастной дозе.

[28], [29], [30], [31], [32]

Вакцинация против бешенства обеспечивает выработку иммунитета через 10-14 дней от ее начала. При тяжелых укусах опасной локализации инкубационный период может быть слишком коротким, поэтому с вакциной вводят специфический иммуноглобулин.

Лечебно-профилактическая (постэкспозиционная) иммунизация проводится с антирабическим иммуноглобулином или без него. При тяжелых повреждениях или гибели животного от бешенства одновременно с первым введением вакцины вводят внутримышечно антирабический иммуноглобулин (если его не удалось ввести в первый день, его следует ввести как можно раньше в течение первых 3 дней после укуса). Вакцину вводят вне зависимости от срока после укуса. На территориях, свободных от бешенства в течение 2 лет и более, при укусах, нанесенных домашними животными с неустановленным диагнозом или дикими животными, иммуноглобулин не вводится, а проводится вакцинация. Схемы профилактики вакциной КОКАВ.

Введение вакцины прекращают, если по истечении 10 дней наблюдения животное осталось здоровым. В случае укуса ранее вакцинированного лица ему вводятся 2 дозы вакцины КОКАВ — в дни 0 и 3.

Рабивак (КАВ) — курс составляет от 9 до 25 инъекций в зависимости от выраженности повреждения и информации о животном.

Рабипур вводится по 1 дозе в дни 0, 3, 7, 14 и 28 после укуса всем не вакцинированным или не полностью вакцинированным против бешенства лицам. В Дании при укусах летучими мышами вводят 6 вместо 5 доз вакцины.

Профилактическая (предэкспозиционная) иммунизация проводится путем трехкратного внутримышечного введения 1 дозы вакцины (0, 7, 30 день) с ревакцинацией через 12 мес, далее — каждые 3 года; сходные схемы используются и для зарубежных вакцин. Лицам групп риска рекомендуется ежегодный контроль уровня специфических антител в крови: в случаях уменьшения их уровня ниже 0,5 МЕ/мл проводится однократная ревакцинация одной иммунизирующей дозой.

Схема лечебно-профилактических прививок КОКАВ и антирабическим иммуноглобулином (АИГ)

Категория повреждения Характер контакта*

1. Нет повреждения и ослюнения кожных покровов. Нет прямого контакта

2. Ослюнение неповрежденных кожных покровов, ссадины, одиночные поверхностные укусы или царапины туловища, верхних и нижних конечностей (кроме головы, лица, шеи, кисти, пальцев рук и ног, промежности, гениталий, нанесенные домашними или сельскохозяйственными животными.

Если в течение 10 сут. животное осталось здоровым, лечение прекращают (т.е. после 3-й инъекции). Когда невозможно наблюдение за животным, (убито, погибло, убежало и пр.) лечение завершить.

Начать лечение немедленно: КОКАВ по 1,0 мл в 0,3, 7, 14, 30 и 90 день.

Любые ослюнения слизистых, любые укусы головы, лица, шеи, кисти, пальцев рук и ног, промежности, гениталий; множественные укусы и глубокие одиночные укусы любой локализации, нанесенные домашними или сельскохоз. животными. Любые ослюнения и повреждения, внесенные дикими плотоядными животными, летучими мышами и грызунами.

Если есть возможность наблюдения за животным и оно в течение 10 сут. остается здоровым, лечение прекращают (т.е. после 3-й инъекции). Когда невозможно наблюдение за животным, лечение завершить.

Начать лечение немедленно и одновременно: АИГ в 0 день + КОКАВ (1мл) в 0, 3,7, 14, 30 и 90 день.

* — Под контактом подразумеваются укушенные раны, царапины, ссадины и места ослюнения.

[33], [34], [35], [36], [37], [38], [39], [40]

источник

Владельцы патента RU 2432963:

Изобретение относится к области биотехнологии ветеринарных препаратов. Вакцина против вируса бешенства представляет собой аллантоисную жидкость куриных эмбрионов. Жидкость содержит гликопротеин вируса бешенства, а также смесь рекомбинантных аденовирусов птиц, несущих ген поверхностного гликопротеина вируса бешенства, один из которых содержит секретируемую форму поверхностного гликопротеина вируса бешенства, а второй — мембраннсвязанную. Взаимодействие гликопротеинов с организмом животных достигается путем перорального введения препарата. Изобретение может быть использовано в ветеринарии. 3 ил., 1 табл.

Бешенство — острое инфекционное заболевание зоонозного происхождения. Случаи бешенства диких, а также домашних животных регулярно регистрируются во многих странах, что представляет серьезную угрозу для населения. В ветеринарной практике широкое распространение получили живые и инактивированные цельновирионные вакцины на основе вакцинных штаммов вируса бешенства (Rabies, 2nd edition. Alan С.Jackson, William H.Wunner, 2007). Традиционные вакцины от бешенства получают из нервной ткани инфицированных животных. Применение таких вакцин нередко приводит к нежелательным побочным эффектам (полиневрит, энцефаломиелит), связанным с наличием примесей миелина в препарате (J. Postgrad Med. 1970 16(3): 132-4). Меньшей реактогенностью обладают вакцины на основе нервной ткани новорожденных животных (мыши, ягнята), что связано со слабым развитием миелиновой оболочки в нервной ткани таких животных. Однако данные вакцины небезопасны. Первыми вакцинами против бешенства, основанными не на нервной ткани, были вакцины, получаемые в утиных эмбрионах (Mil Med. 1964; 129:960-5). Эти вакцины вскоре были замещены современными культуральными вакцинами на основе диплоидных клеток человека, клеток Vero (Dev Biol Stand. 1981; 50:173-82), клеток почки новорожденных хомячков (Appl Microbiol. 1973 Dec; 26(6):858-62), куриных эмбриональных фибробластов (Monogr Ser World Health Organ. 1966; 23:124-31). Несмотря на эффективность использования живых аттенуированных штаммов вируса бешенства для вакцинопрофилактики, их применение связано с риском попадания в окружающую среду живого инфекционного вируса, поскольку не исключается возможность реверсии в вирулентную форму.

В настоящее время широко применяются культуральные вакцины, содержащие аттенуированные штаммы вируса бешенства, инактивированные различными химическими агентами (фенол, бета-пропиолактон) или физическими воздействиями (ультрафиолетовое излучение) (Jpn J Med Sci Biol. 1953; 6(6):577-86). Однако получение таких вакцин связано с необходимостью непосредственной работы с живым патогеном. Кроме того, проведение процесса аттенуирования вирулентного штамма с целью получения препарата, пригодного для массовой иммунизации, является кропотливой и рутинной работой, требующей затраты большого количества времени и средств.

Успехи в области клонирования и экспрессии генов привели к созданию рекомбинантных вакцин против бешенства, которые просты в изготовлении, устойчивы во внешней среде и индуцируют напряженный иммунитет. Применение рекомбинантного вируса исключает попадание во внешнюю среду потенциально опасного генома вакцинного вируса бешенства. Наиболее изученными и перспективными для использования в вакцинопрофилактике бешенства являются рекомбинантные вакцины на основе вируса коровьей оспы (Vaccine. 2009 27; 27(51):7198-201) и аденовирусов (Virology. 20065-20; 356(1-2):147-54).

Рекомбинантная вирусная вакцина от бешенства на основе вируса коровьей оспы, экспрессирующая гликопротеин вируса бешенства, используется для иммунизации животных в дикой природе (J. Wildl. Dis., 1998, 34, 752-763). Однако, контакт человека с вирусом коровьей оспы может сопровождаться серьезными побочными эффектами, что было показано при проведении массовой вакцинации солдат американской армии (Comp Immunol Microbiol Infect Dis, 2003, 26, 423-430).

Рекомбинантные аденовирусы по сравнению с другими векторными системами отличаются высокой эффективностью экспрессии целевого трансгена в различных типах клеток, безопасностью вектора для человека и животных, накоплением рекомбинантных вирусов в клетках-продуцентах в высоком титре, индукцией как гуморального, так и клеточного иммунного ответа на трансгенный продукт, большой пакующей емкостью вектора (Curr Top Microbiol Immunol. 2004, 273, 335-57). Рекомбинантные аденовирусы в качестве вакцины могут использоваться как для парэнтерального, так и для перорального введения.

Известен способ пероральной иммунизации мышей рекомбинантными репликативно-дефектными аденовирусами 5 (аденовирус человека) и 68 серотипа (аденовирус шимпанзе), несущими ген гликопротеина вируса бешенства (US Pat. 2004019603).

К недостаткам описанного способа относится высокая стоимость процесса получения необходимого для иммунизации количества препарата рекомбинантного аденовируса с использованием клеточной линии человека.

К наиболее безопасным среди современных вакцин относятся расщепленные сплит-вакцины, содержащие частицы вируса — изолированные поверхностные и внутренние белки. Изготавливается вакцина путем расщепления вирусных частиц при помощи органических растворителей или детергентов, также вирусные компоненты могут быть получены в лабораторных условиях с использованием генно-инженерной технологии (J Immunol. 1996 15; 156(10):3579-82). Расщепленные вакцины характеризуются значительно меньшим риском побочных реакций, в связи с удалением реактогенных липидов, входящих в состав оболочки вируса. Поскольку выработка вируснейтрализующих антител против бешенства идет на поверхностный гликопротеин, данный структурный компонент используется для создания ресщепленных вакцин. Использование методов генной инженерии для получения изолированного гликопротина вируса бешенства, исключающих работу с патогеном, повышают безопасность получаемых вакцин.

Известен способ получения вакцины против бешенства, содержащей изолированный поверхностный гликопротеин вируса бешенства, экспрессированный в эукариотических клетках (US. Pat. 9411112). Кодирующую последовательность ДНК гликопротеина вируса бешенства получают реакцией обратной транскрипции на матрице РНК вируса или искусственно синтезируют, после чего она может быть встроена в коммерческий экспрессирующий вектор. Для экспрессии гликопротеина вируса бешенства в клетках S. cerevisiae разработан коммерческий плазмидный вектор pYES2 (hivitrogen, San Diego, CA). Получение гликопротеина вируса бешенства в клетках насекомых обеспечивается бакуловирусной системой экспрессии (Virology. 1989; 173(2):390-9), например, коммерческим набором МахВас (bivitrogen, Sail Diego, CA). Для получения гликопротеина вируса бешенства в клетках млекопитающих (клетки яичника китайского хомячка) может быть использован плазмидный вектор pcDNA I bivitrogen, San Diego, CA). Высокий уровень экспрессии интересующего гена обеспечивается присутствием промоторных последовательностей, энхансеров, сигнала полиаденилирования. Таким образом, получение поверхностного гликопротеина вируса бешенства возможно как в прокариотичексих, так и в эукариотических системах экспрессии, однако, использование клеток эукариот является предпочтительным, поскольку они обеспечивают необходимые посттрансляционные модификации, что приводит к образованию функционально активного продукта.

Рекомбинантный гликопротеин вируса бешенства вводится перорально животным в виде приманки с привлекательным вкусом и запахом в количестве от 100 до 300 мкг. При пероральной иммунизации описанным способом гликопротеин вируса бешенства, попадая в организм животных связывается с эпителием ротовой полости и глотки, что приводит к развитию мукозального иммунитета.

Описанный способ как наиболее близкий к заявляемому выбран за прототип.

Однако к недостаткам прототипа относится быстрая деградация в организме за счет действия протеолитических ферментов и клеток иммунной системы, короткий период полураспада чужеродного белка в организме (в среднем 2-3 часа), необходимость введения в организм больших доз вакцинных препаратов для достижения положительного эффекта; для эффективной пероральной иммунизации изолированным вирусным белком необходимо применение адъюванта; высокая себестоимость процесса получения препаративных количеств рекомбинантного гликопротеина вируса бешенства, связанная с необходимостью культивирования эукариотических клеток для получения препаративных количеств рекомбинантного белка.

Целью предполагаемого изобретения является получение рекомбинантной многокомпонентной вакцины, накопленной в аллантоисной жидкости куриных эмбрионов, для однократной пероральной иммунизации животных против вируса бешенства.

Сущностью предлагаемого изобретения является использование смеси рекомбинантного гликопротеина вируса бешенства и аденовирусов птиц CELO, экспрессирующих мембраннсвязанную и секретируемую формы гликопротеина вируса бешенства, накопленных в аллантоисной жидкости куриных эмбрионов. Рекомбинантный аденовирус птиц CELO, экспрессирующий секретируемую форму гликопротеина вируса бешенства обеспечивает присутствие данного компонента непосредственно в вакцинном препарате, а рекомбинантный аденовирус птиц CELO, экспрессирующий мембраннсвязанный гликопротеин вируса бешенства позволяет осуществлять эффективную и пролонгированную экспрессию целевого гена в организме иммунизированных животных, что приводит к формированию у них мощного гуморального и цитотоксического иммунного ответа против бешенства.

В качестве носителя для действующего вещества вакцины и адъюванта используется рекомбинантный аденовирус птиц CELO. Вектор CELO обеспечивает высокий уровень экспрессии целевого гена в клетках куриного эмбриона (Protein Expr Purif. 2009; 65(1): 100-7), что приводит к накоплению рекомбинантного гликопротеина вируса бешенства в аллантоисной жидкости в концентрациях, достаточных для проведения иммунизации (до 100 мкг/мл). Вектор CELO способен осуществлять доставку репортерных генов и генов интереса в млекопитающих in vivo и обеспечивает пролонгированную экспрессию (до 30 дней), что обеспечивает продление периода циркуляции антигена в организме (Mol Gen Mikrobiol Virusol. 2008; (4):26-30). Эта система вирусной доставки генов безопасна для млекопитающих, так как вирус CELO не способен к репликации в клетках данных хозяев. Основным преимуществом аденовирусного вектора CELO является возможность получения препаративного количества рекомбинантных вирусов CELO в куриных эмбрионах. Количество рекомбинантных аденовирусов CELO, получаемое из одного куриного эмбриона, составляет более 10 12 вирусных частиц. Титр вируса в аллантоисной жидкости составляет 5×10 8 БОЕ/мл. Рекомбинантный гликопротеин вируса бешенства и аденовирусные частицы, присутствующие в аллантоисной жидкости, достаточно стабильны в течение времени, необходимого для проведения иммунизации, поэтому дополнительной стабилизации препарата не требуется.

Для решения проблемы, связанной с ограниченной эффективностью трансдукции клеток млекопитающих векторами на основе аденовируса птиц, разработаны подходы, заключающиеся в генетической модификации отростка пентона (фибера). Данные подходы включают конструирование «химерных» фиберов (замена глобулярного домена на соответствующий домен альтернативного серотипа аденовирусов) или введения различных гетерологичных рецептор-связывающих последовательностей на С-конец или в HI-петлю 3 глобулярного домена фибера (J Virol., 2007 81(18); 9641-9652.). Такие модифицированные векторы способны обеспечивать эффективную доставку генетической информации в клетки млекопитающих, в норме резистентных к инфекции аденовирусами.

За счет способности взаимодействовать с рецепторами врожденного иммунитета аденовирусный вектор может выступать в качестве адъюванта (J. Virol., 2002, р.127-135).

Вирус бешенства вакцинного штамма ТС-80 размножают в культуре клеток почки сайги. Титр полученного вируса определяют в соответствии с рекомендациями ВОЗ (Laboratory Technics in rabies. 4_th edition. WHO, Geneva, 1996). Титр вируса составляет 10 8 БОЕ/мл.

Стандартный штамм вируса бешенства CVS-24 для проведения заражения летальной дозой вируса получают из ткани мозга инфицированных новорожденных мышей (J Ехр Med. 1977 1; 145(6):1617-22).

Ген гликопротеина G получают путем амплификации кДНК, синтезированной методом ОТ-ПЦР (Reverse Tpanscription System «Invitrogene» №12236-014, USA) на матрице РНК, выделенной из вируса бешенства вакцинного штамма ТС-80 с использованием TRIZOL («Invitrogene» №15596-018, USA). Для ПЦР используют олигонуклеотиды, фланкирующие полный ген гликопротеина 5′-ggatccaggaaagatggttcctcaggctctcctgtttg и 5′-gctgcagcaaggggaggtgatcttcagacttggatcgt, подобранные согласно последовательности гена гликопротеина вируса бешенства (gene bank AB518487.1). Фрагмент ДНК, несущий ген гликопротеина G вируса бешенства (последовательность №1), клонируют в плазмидный вектор pGEM-T Easy Vector («Promega», A1360, USA). Ген гликопротеина G вируса бешенства субклонируют в составе экспрессирующей кассеты, состоящей из промотора CMV с энхансером и участком полиаденилирования BGH в вектор pCBEdlRV, содержащий фрагмент генома аденовируса CELO с делецией, несущественной для репликации вируса области. Рекомбинантный аденовирус CELO-glRb, несущий ген гликопротеина вируса бешенства, получают методом гомологичной рекомбинации в клетках LMH. Растворимую форму гликопротеина G вируса бешенства (ΔglRb) получают путем сайт-специфического мутагенеза с использованием олигонуклеотидов: 5′-aggagcatgcaaactcaag, 5′-ggtggcggccgctcaatgcac, внося замену в аминокислотной последовательности в положении 417: Pro417 на стоп-кодон. Вариант гена гликопротеина G вируса бешенства с делецией трансмембранного домена (последовательность №2) субклонируют в составе экспрессирующей кассеты, состоящей из промотора CMV с энхансером и участком полиаденилирования BGH в вектор pCBEdlRV, содержащий фрагмент генома аденовируса CELO с делецией, несущественной для репликации вируса области. Рекомбинантный аденовирус CELO-ΔglRb, несущий ген гликопротеина вируса бешенства с делецией, получают методом гомологичной рекомбинации в клетках LMH. Схематическое изображение геномной ДНК рекомбинантного аденовируса птиц CELO-glRb, несущего ген гликопротеина G вируса бешенства, представлено на фигуре 1А

Плазмидную конструкцию, несущую полноразмерный геном аденовируса птиц CELO-HIRGD, имеющего модификации структурных белков капсида (фибера) и экспрессирующую кассету с геном гликопротеина вируса бешенства, получают методом гомологичной рекомбинацией в Е. coli штамма BJ5183 между плазмидами pCELO-HIRGD, и шаттл-вектором pCShCMV-glRb, несущим экспрессирующую кассету (CMV промотор, трансген, сигнал полиаденилирования), фланкируемую последовательностями CELO. Шаттл-вектор pCShCMV-glRb линеаризуют по рестриктазе AscI. Плазмиду pCELO-HIRGD линеаризуют по PacI. Шаттл-вектор вместе с плазмидой pCELO-HIRGD трансформируют в клетки Е. coli штамма BJ5183. Получение рекомбинантных клонов подтверждают с помощью ПЦР, рестрикционным картированием и секвенированием. Схематическое изображение геномной ДНК рекомбинантного аденовируса птиц CELO-HIRGD-glRb, имеющего модификации структурных белков капсида, несущего ген гликопротеина G вируса бешенства, представлено на фигуре 1Б.

Экспрессию гена гликопротеина G вируса бешенства в куриных эмбрионах, зараженных аденовирусами CELO-ΔglRb, CELO-glRb, CELO-HIRGD-glRb, определяют методом иммуноблоттинга. Куриные эмбрионы заражают рекомбинантными аденовирусами CELO-ΔglRb, CELO-glRb, CELO-HIRGD-glRb. В качестве контрольного используют аденовирус CELO дикого типа. Через 72 часа после заражения отбирают аллантоисную жидкость, которую анализируют методом иммуноблоттинга. В реакции используют моноклональные антитела к вирусу бешенства штамма ТС-80. Специфическое взаимодействие комплекса антиген-антитело выявляют антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом (Goat-antimouse IgG-HRP, Amersham, 1:5000). Окраску проводят с использованием хемилюминисцентной системы детекции (ECL-plus Detection System, Amersham). Результат проведенного иммуноблоттинга представлен на фигуре 2.

Результат анализа показывает специфическое взаимодействие антител и рекомбинантного белка, соответствующего по электрофоретической подвижности гликопротеину G вируса.

Полученным культуральным вирусным препаратом CELO-glRb инфицируют куриные SPF-эмбрионы, из расчета 100 мкл культурального препарата на эмбрион. Через 72 ч после заражения отбирают аллантоиснюю жидкость. Аналогичным образом получают препарат рекомбинантного аденовируса птиц CELO-HIRGD-glRb и препарат рекомбинантного аденовируса птиц, несущего в составе экспрессирующей кассеты ген гликопротеина G вируса бешенства без трансмембранного домена — CELO-ΔglRb. Для проведения иммунизации аллантоисные препараты рекомбинантных вирусов CELO-glRb и CELO-HIRGD-glRb смешивают в соотношении 1:1 с препаратом рекомбинантного аденовируса птиц CELO-ΔglRb. Полученные комбинации используются для пероральной иммунизации мышей в количестве 1 мл на животное.

Первой группе беспородных мышей перорально однократно вводят смесь рекомбинантных аденовирусов CELO-glRb/CELO-ΔglRb в виде аллантоисного препарата. Второй группе вводят смесь рекомбинантных аденовирусов CELO-HIRGD-glRb/CELO-ΔglRb. Третью группу мышей двукратно иммунизируют культуральной инактивированной вакциной, содержащей штамм вируса бешенства ТС-80. В качестве отрицательного контроля группе мышей однократно вводят аденовирус CELO дикого типа. Через 14 дней после иммунизации мышам интрацеребрально вводят 100 МЛД₅₀ вируса CVS-24. В группе мышей, однократно иммунизированных рекомбинантными аденовирусами CELO-glRb и CELO-HIRGD-glRb, выжило 91% и 90% животных, соответственно. При использовании стандартной культуральной инактивированной вакцины только 82% мышей были защищены от последующего заражения летальной дозой вируса бешенства штамма CVS-24 (таблица).

Таким образом, показано, что максимальный уровень защиты мышей от внутрицеребрального заражения вирусом бешенства штамма CVS-24 — 91% — детектируется при однократной иммунизации рекомбинантными аденовирусами птиц CELO-glRb и CELO-HIRGD-glRb перорально.

Специфические антитела к вирусу бешенства в сыворотке крови мышей, иммунизированных рекомбинантной вакциной CELO-glRb или CELO-HIRGD-glRb, определяют методом непрямого иммуноферментного анализа.

Сенсибилизацию панелей проводят нормальным и специфическим антигенами, которые вносят разведенными в рабочем разведении в 0,01 М фосфатно-солевом буфере (ФСБ), pH 7,2-7,4 в нечетные и четные ряды, соответственно. Панели инкубируют в течение ночи при 4°С.

Свободные адсорбционные сайты полистирола блокируют 1% БСА, в объеме 0,15 мл /лунку, инкубируя в течение 30 минут при 37°С. После последующей отмывки пластин ФСБ с Твин-20 (ФСБ-Т) испытуемые сыворотки вносят в лунки панелей в разведении с 1:3 до 1:729 на 1% БСА в ФСБ. Пластины инкубируют в течение 40 минут при 37°С, затем проводят трехкратную отмывку в ФСБ-Т, вносят рабочее разведение (1:1000) антимышиного пероксидазного конъюгата и инкубируют в течение 40 минут при 37°С.

После этого пластины шестикратно отмывают ФСБ-Т и вносят раствор хромогенного субстрата (АБТС). Учет результата проводят через 30 минут инкубирования при комнатной температуре.

Учет реакции осуществляют фотометрически при длине волны 405 нм. Реакцию считают положительной и специфичной, если оптическая плотность хромогенного субстратного раствора в лунках, в которых предварительно инкубировали исследуемые сыворотки, а также в лунках, в которые вносили положительные контрольные сыворотки, в 2 или более раз превышала среднюю оптическую плотность субстрата в лунках, в которые вносили контрольные (отрицательные) нормальные сыворотки.

Результат титрования специфических антител к вирусу бешенства в сыворотке крови мышей, иммунизированных рекомбинантным вирусом CELO-glRb, представлен на фигуре 5. Титр антител в сыворотке крови мышей, иммунизированных рекомбинантными аденовирусами CELO-glRb и CELO-HIRGD-glRb, коррелирует с титром антител, детектированным в сыворотках крови мышей после иммунизации культуральной вакциной ТС-80. Рекомбинантные вирусы CELO-glRb и CELO-HIRGD-glRb при введении мышам индуцируют синтез высокого уровня специфических антител против гликопротеина G вируса бешенства.

Таким образом, получена вакцина, содержащая смесь гликопротеина вируса бешенства, а также рекомбинантных аденовирусов птиц, один из которых (CELO-glRb) экспрессирует секретируемую форму поверхностного гликопротеина вируса бешенства, а второй (CELO-glRb или CELO-HIRGD-glRb) — мембраннсвязанную, однократное пероральное введение которой приводит к эффективной защите от летальных доз вируса бешенства.

Способ получения пероральной вакцины против вируса бешенства животных, включающий получение рекомбинантного гликопротеина вируса бешенства для пероральной иммунизации, отличающийся тем, что получают аллантоисную жидкость куриных эмбрионов, содержащую рекомбинантный гликопротеин вируса бешенства, его продуцент — рекомбинантный аденовирус птиц CELO, а также рекомбинантный аденовирус птиц CELO, являющийся продуцентом мембранно-связанного гликопротеина вируса бешенства, или рекомбинантный аденовирус птиц CELO, имеющий модификации структурных белков капсида и являющийся продуцентом мембранно-связанного гликопротеина вируса бешенства.

источник

Вакцина антирабическая для пероральной иммунизации плотоядных животных «Броварабис V-RG» (Brovarabies V-RG) (УВПП)

Состав:
Вакцина состоит из пулеобразной оболочки, которая содержит полости и которая изготовлена из нескольких аттрактивных пищевых веществ и препарата тетрациклинового ряди, который является маркером для контроля иммунизации животных. В средине такой приманки специальным фиксирующим веществом закрепляют активное иммунизирующее вещество, которое расфасовано в пакетики (блистеры) по 2мл.

1 доза содержит 2 мл антигена V-RG (V-RG (10 8 TC >50 ), питательную приманку из пищевых и аттрактивных веществ.
Фармацевтическая форма:
питательная приманка, в которую помещен блистер с антигеном.
Применение:
питательная приманка, в которую помещен блистер с антигеном.
Иммунологическое действие:
вследствие попадания вакцины на поверхности слизистых оболочек и миндалины ротовой полости, происходит иммунный ответ на выработку защитных вируснейтрализирующих антител. Защитный эффект от применения вакцины наблюдается только в не инфицированных животных. При применении вакцины наличие колостральных антител не влияет на формирование защитного иммунитета.
Вид животных:
собаки, волки, лисы, койоты, енотовидные собаки, еноты, медведи, панды, ласки, хорьки, барсуки, выдры, кошки (домашние, дикие), гиены и земляной волк.
Побочное действие:
не установлено.
Особые предостережения при применении:
если вакцина распространяется вручную, то ее необходимо осторожно выложить в защищенное от прямых солнечных лучей место. Используют защитную одежду и перчатки.
Применение во время беременности и лактации:
без ограничений.
Взаимодействие с другими средствами и другие формы взаимодействия:
не известно.
Способ применения и дозы:
вакцину применяют дважды в год, распространяя вручную или с авиатранспорта. Используют 15-20 доз вакцины на 1 км 2 , возможно применение большего количества, в зависимости от эпизоотической ситуации и плотности популяции животных. При распространении вакцины авиатранспортом через одинаковые расстояния формируют квадраты на картах, например, 250-500 х 250-500 м). При этом возможно дополнительное ручное применение вакцины в местах непосредственного обитания животных (норы).

Вакцинацию определенной территории нужно проводить в течение нескольких следующих лет, но как минимум в течение двух, после последнего случая бешенства на данной территории. Возможно применение вакцины на свободных от бешенства территориях с целью создания защитной зоны. Ширина защитной зоны должна составить как минимум 70 км.
Противопоказания:
отсутствуют.
Передозировка:
введение 10-ти разовой дозы не вызывает затруднений.
Специальные предостережения:
отсутствуют.
Период выведения (каренции):
не применяется продуктивным животным.
Специальные предостережения для лиц и обслуживающего персонала, которые вводят вакцину:
не допускать контакта вакцинного вируса со слизистыми оболочками или травмированной кожей. В случае попадания вакцинного вируса, поврежденное место промыть водой с мылом и обратиться за медицинским осмотром.

При раскладке вакцины нужно использовать защитную одежду и перчатки.
Формы несовместимости:
отсутствуют.
Особые меры безопасности при обращении с неиспользованным препаратом, способы его обезвреживания и утилизации:
не использованное средство или средство, у которого истек срок годности, обезвреживают кипячением в течение 30 минут автоклавируют при 120°С в течение 45-60 минут.
Форма выпуска:
коробки из картона по 48 доз, ящики из гофрированного картона по 320, 400-800 доз.
Хранение:
в защищенном от света месте при температуре от 2°С до 8°С.
Срок хранения:
12 месяцев с даты изготовления.
Производитель:
ООО «Укрветпромпостач», Украина, г. Бровары, ул. Хельсенской группы, д. 23 А

источник

Фармацевтическая группа:

Живая культуральная вакцина (вирусвакцина) орального применения

Вирусвакцина предназначена для оральной иммунизации диких плотоядных животных (основные целевые виды — лисица, енотовидная собаки, песец, корсак, шакал) против бешенства на неблагополучных и угрожаемых по бешенству территориях.

Вирусвакцина изготовлена из суспензии культуры клеток ВНК-21, содержащей живой аттенуированный штамм «РВ-97» вируса бешенства в объеме 2,0 см 3 , расфасованной в полистироловые капсулы, которые заключены внутрь приманки, выполненной в виде брикета, изготовленного из продуктов, съедобных для плотоядных: яичная паста или рыбная мука 15 г/брикет, желатин пищевой 4,5 г/брикет, вода питьевая 31,65 см3/брикет. В качестве биомаркера для контроля поедаемости вакцины в состав приманки включен антибиотик тетрациклин (0,15 г/брикет).

Биологические свойства (принцип действия):

Вирусвакцина вызывает формирование иммунного ответа у диких плотоядных животных (лисиц, енотовидных собак) к вирусу бешенства» через 21 сутки после однократного применения, продолжительностью 12 месяцев.

При поедании приманки животное раскусывает блистер с вирусвакциной, в результате чего содержащийся в вакцине вирус контактирует со слизистой оболочкой ротовой полости и глотки в области окологлоточного лимфоидного кольца, проникает в организм и, проходя ограниченное количество циклов репродукции, инициирует иммунный ответ.

Каждая брикет-приманка содержит одну дозу вирусвакцины с титром инфекционности вируса бешенства, штамм «РВ-97», не менее 10 6,0 МЛД₅₀/см 3 .

Вирусвакцина безвредна, ареактогенна для диких животных (лисицы, песца, енотовидной собаки, кабана, лося, медведя), а также для домашней свиньи и собаки.

Для иммунизации диких плотоядных животных вирусвакцину применяют два раза в год: в апреле – мае при условии отсутствия снега и устойчивой положительной температуре (отсутствие ночных заморозков) 4-10°С и повторно когда молодняк диких плотоядных животных осваивает новые территории (ориентировочно с III декады сентября до конца октября в Средней полосе России).

В связи с тем, что после оральной вакцинации весной у народившихся щенят имеется колостральный иммунитет, который снижает эффективность действия вакцины в течение не менее 8 недель, рекомендуется проводить третью вакцинацию, направленную на иммунизацию молодых животных – в июне или начале июля. В этом случае допускается раскладка вирусвакцины при температуре не выше 25 о С.

В районах, граничащих с территориями неблагополучными по бешенству, создают 25 км. буферные зоны, в которых животных вакцинируют двукратно независимо от эпизоотической ситуации.

При применении вирусвакцины необходимо учитывать, что основные переносчики бешенства в России – лисицы и енотовидные собаки – являются норными животными.

Раскладка вирусвакцины должна обеспечивать попадание не менее чем 8-10 брикетов на каждый реальный или потенциальный норный охотничий участок. Типичный радиус норного участка у лисицы при хорошей кормовой базе не превышает 500 м. Норный участок енотовидной собаки практически такой же.

При доставке вирусвакцины до места назначения организуют ее раскладку на данной территории в течение 3-4 сут.

На 1 км 2 размещают не менее 20-25 брикетов. Вблизи мест обитания диких плотоядных животных приманки распределяют из расчета 8-10 брикетов на нору. Минимальная площадь вакцинации должна быть не менее 5000 км 2 , при этом иметь диаметр или ширину не менее 50 км.

Для предупреждения запаха человека необходимо использовать защитные перчатки, не курить и не принимать алкоголь, не использовать сильно пахнущие средства (косметика, парфюмерия, дезодоранты и др.).

После раскладки вирусвакцины в лесопарковых зонах поблизости с населенными пунктами следует спустя 7 дней собрать оставшиеся брикеты и уничтожить их сжиганием.

При размещении вирусвакцины на местности с помощью малой авиации, для обеспечения плотности распространения приманок в 20-30 брикетов необходимо расстояние между линиями полета самолета 300 метров со сбросом приманок через каждые 100 метров.

Следует избегать нарушений схемы (сроков) иммунизации, поскольку это может привести к снижению эффективности иммунопрофилактики.

Перед началом вакцинации на данной территории необходимо согласовать с административными органами самоуправления план мероприятий, обучить и провести инструктаж по технике безопасности с персоналом, который будет привлечен к размещению вирусвакцины.

Запрещается раскладка вакцины в городской черте.

Для обеспечения эпизоотического благополучия региона по бешенству вакцинацию диких плотоядных животных необходимо проводить регулярно на протяжении не менее 6 лет и не менее 2 лет после последнего случая бешенства. После каждой вакцинации на территории организуется мониторинг с целью оценки поедаемости брикетов-приманок с вирусвакциной и эффективности вакцинации.

Поедаемость приманок оценивают методом обнаружения тетрациклина в зубной ткани, а эффективность вакцинации по уровню антирабических вируснейтрализующих антител в крови животных. Для этого проводят отстрел вакцинированных видов (не менее 4 голов с территории 100 км2) через 1-3 месяца после вакцинации. Для исследования на тетрациклин направляют ветвь нижней челюсти с зубами, для исследования на антитела пробы трупной крови.

Биоматериал для исследования на тетрациклин направляют в ветеринарные лаборатории, проводящие соответствующее исследование, или в ФГБУ «ВНИИЗЖ». Пробы крови для исследования направляют в ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Форма выпуска:

Лекарственная форма – брикет-приманка. По внешнему виду брикет-приманка имеет форму параллелепипеда, массой 25-30 г, от светло-коричневого до темно-коричневого цвета с запахом вареного яйца или рыбной муки.

Брикеты-приманки упакованы по 20 шт. в прямоугольные формы из пластика, имеющие перегородки и пригодные для транспортирования, а затем в пеналы из картона. Пеналы с брикетами-приманками упаковывают в ящик из гофрокартона.

Срок годности и условия хранения:

Срок годности препарата 10 месяцев с даты выпуска при соблюдении условий хранения и транспортирования. По истечении срока годности вирусвакцина к применению не пригодна.

Вирусвакцину хранят в сухом темном месте при температуре от минус 10°С до минус 20°С.

Допускается транспортирование вирусвакцины специальным транспортом и хранение с поддержанием температурного режима не выше 10°С не более 4 сут.

Не допускается повторное замораживание вирусвакцины и ее последующее использование.

Вирусвакцину следует хранить в местах, недоступных для детей.

источник

В. В. НЕДОСЕКОВ ВНИИВВиМ

Одним из основных и эффективных способов предотвращения бешенства является своевременная и эффективная иммунопрофилактика, основанная на использовании антирабических вакцин [Б, 11]. С момента создания Л. Пастером первой антирабической вакцины прошло более 100 лет. За это время предложено, апробировано и внедрено в ветеринарную практику множество разных препаратов против бешенства [9, 14].

Используя принципы изготовления и механизмы действия в организме, все антирабические вакцины условно можно разделить на 4 группы: цельновирионные, субъединичные, рекомбинантные и ДНК-вакцины.

В ветеринарной практике широкое распространение получили живые и инактивированные цельновирионные вакцины на основе вакцинных штаммов вируса бешенства (Paris Pasteur, Pitman-Moore, CVS-27, Kelev, Flury LEP и HEP, SAD, ERA, Внуково-32, Щелково-51 и ТС-80), которые выращивают в первичных (почка собаки, хомяка, поросенка) и перевиваемых [ВНК-21/13, WI-38 (диплоидная), CEF, Vero, линия 4647, MDBK и ПС] линиях клеток [14].

Практически все антирабические препараты в мире готовят, используя разные сочетания описанных штаммов вируса бешенства и культур клеток [3].

Из этих двух групп препаратов большее предпочтение отдают инактивированным, поскольку, несмотря на достигнутые успехи, применение живых вакцин в будущем может привести к необходимости защиты животных от массированной агрессии модифицированного природой «вакцинного» вируса бешенства [4].

С другой стороны, широкое использование инактивированных вакцин стало возможным благодаря успехам биотехнологии, в частности крупномасштабному культивированию вируса бешенства, в первичных и перевиваемых линиях клеток, что позволило конструировать и изготавливать высокоиммуногенные парентеральные препараты.

В настоящее время в Российской Федерации рекомендованы к применению несколько отечественных и зарубежных вакцин.

Одна из первых отечественных разработок — промышленная технология изготовления сухой инактивированной вакцины из фиксированного вируса бешенства, штамм Щелково-51, выращенного в ВНК-21/13 [6]. В 1976-1991 гг. было изготовлено и успешно испытано более 9 млн доз препарата, который при двукратной иммунизации обеспечивал напряженный иммунитет в течение 2 лет. При этом на 14-е сутки титр вируснейтрализующих антител в крови собак превосходил в 17-38 раз минимальный уровень антител, обеспечивающих защиту животных от заражения (0,5 МЕ/мл) [4].

Сегодня Щелковский биокомбинат из штамма Щелково-51 и клеточной системы ВНК-21 выпускает: вакцину антирабическую инактивированную сухую культуральную; вакцину антирабическую инактивированную жидкую культуральную (Рабиков); вакцину антирабическую инактивированную сухую культуральную для собак и кошек (Рабикан).

В нашем институте изготовляют антирабическую инактивированную культуральную сорбированную вакцину, выпускаемую в жидкой и сухой формах. Разработанная технология позволяет получать материал с высокой инфекционной (7,5-8,0 Ig МЛД /см3) и антигенной активностью (3-5 ME). Для инактивации используют теотропин отечественного производства, который обеспечивает щадящий режим, не изменяя конформационную структуру протективно значимых эпитопов гликопротеина вируса бешенства. Сухая и жидкая вакцина у собак и кошек создавали напряженный антирабический иммунитет, который формировался на 14-21-й день и сохранялся в течение 18 мес, что определяли путем контрольного заражения животных [1].

ВНИИЗЖ выпускает жидкую и сухую формы антирабической инактивированной культуральной вакцины, изготовленной из штамма Щелково-51, выращенного в суспензионной культуре клеток ВНК-21/17, инактивированного аминоэтилэти-ленимином. Сорбирована она на гидроокиси алюминия.

Для иммунизации собак и кошек в Экспериментально-производственном предприятии по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова РАМН разработана антирабическая культуральная концентрированная очищенная инактивированная сухая вакцина, изготовленная из штамма Внуково-32, выращенного в культуре клеток почек сирийского хомяка и инактивированного ультрафиолетовыми лучами [3].

Для вакцинации собак и кошек на территории нашей страны используют зарубежные антирабические вакцины: Дефенсор-3 (Пфайзер, США); Nobivac Rabies (Intervet, Голландия); Rabisin (Merial, Франция). Данные препараты из пастеровских штаммов вируса бешенства, инактивированного бета-пропилактоном, обеспечивают формирование иммунитета после двукратной вакцинации в течение 3-5 лет [3].

Кроме антирабических моновакцин применяют комбинированные мультивалентные препараты против разных возбудителей инфекционных болезней, что ведет к расширению стратегий иммунопрофилактики и значительно упрощает календарь прививок. Данные вакцины используют для иммунизации собак и кошек. Так в антирабическую вакцину для собак включены антигены возбудителей чумы и гепатита собак, лептоспироза и парвовироза плотоядных, а в комбинированные антирабические вакцины для кошек — антигены вируса панлейкопении кошек, калицивируса и парвовируса кошачьих. Установлена высокая иммуногенная потенция вакцины против парвовирусного энтерита и чумы собак, содержащей инактивированный вирус бешенства, штамм Щелково-51 [4].

С 1999 г. на территории России применяют отечественную вакцину против чумы плотоядных, парвовирусного энтерита, инфекционного гепатита, аденовироза, лептоспироза и бешенства собак БИОРАБИК.

Следующим типом антирабических вакцин являются субъединичные препараты, которые безопасны (не содержат вируса) и свободны от балластных белков [2]. Однако из-за низкой иммуногенной активности и высокой стоимости их использование ограничено.

Успехи в области клонирования и экспрессии генов привели к созданию рекомбинантных вакцин против бешенства, которые просты в изготовлении, устойчивы во внешней среде и индуцируют напряженный иммунитет. Применение рекомбинантного вируса исключает попадание во внешнюю среду потенциально опасного генома вакцинного вируса бешенства.

Наибольшее распространение рекомбинантные препараты получили при пероральной вакцинации диких плотоядных. Хотя использование антигенов разных серотипов вируса бешенства позволяет изготовлять мультивалентные вакцины для парентерального введения. Так, использование вектора, несущего участки гликопротеинов серотипов 1 и 5, позволило создавать активный иммунитет к этим серотипам вируса бешенства [10].

Рекомбинантные вакцины широко применяют во многих странах мира как экологически наиболее безопасные для борьбы с бешенством диких плотоядных.

Относительно новой вехой рабиологической вакцинологии является разработка ДНК-вакцин, представляющих собой плазмидную ДНК, в которую встроен ген гликопротеина вируса бешенства. Преимущества этих препаратов: стабильность, высокая степень очистки, отсутствие балластных белков и контаминации посторонними агентами и индуцирование у животных системного и местного иммунитета [12, 15]. Двукратная внутримышечная вакцинация собак плазмидной ДНК, экспрессирующей гликопротеин вируса бешенства, защищает животных от контрольного заражения вирулентным штаммом вируса бешенства [12, 13].

Еще одним важным преимуществом ДНК-вакцины является возможность встраивания в ДНК плазмиды гликопротеинов нескольких лиссавирусов, что позволяет повысить степень защиты против нескольких серотипов вируса бешенства [10]. Эффективность иммунизации животных ДНК-вакцинами очевидна, однако потребуется еще много усилий для практической реализации нового подхода к профилактике бешенства.

Таким образом, несмотря на различные типы, современные вакцины позволяют формировать напряженный иммунитет, даже при однократном введении препаратов (ДНК-вакцина, рекомбинантная и инактивированная вакцины) титр антител спустя 540 дней составляет не менее порогового уровня (0,5 МЕ/мл) [13].

Одним из важнейших факторов иммунопрофилактики является способ инъецирования антигена, для этого на протяжении длительного времени использовали подкожный метод введения антирабических препаратов. Однако мы установили, что после внутрикожной и подкожной иммунизации мышей и овец инактивированными вакцинами у животных формировались антирабические вируснейтрализующие антитела с практически идентичной активностью [7, 8]. Полученные данные подтвердили связь между вводимым антигеном и центральной нервной системой, которая проявлялась усилением иммунного ответа при инъецировании антирабической вакцины в места, богатые нервными окончаниями [4].

В настоящее время проблемы иммунизации сельскохозяйственных животных сохраняются, поэтому мы считаем актуальным использование внутрикожного введения антигена с помощью безыгольного инъектора, которое позволит существенно уменьшить материальные затраты при высокой иммунологической эффективности.

Заключение. В распоряжении ветеринарной практики имеются разные типы антирабических препаратов, обеспечивающие защиту животных от летальной инфекции, однако наибольшее распространение получили инактивированные вакцины. Они высокоэффективны, обладают экономически обоснованной простой технологией изготовления. Использование описанных препаратов и внутрикожное их применение будет способствовать снижению напряженности эпизоотической ситуации по бешенству в Российской Федерации.

1. Вишняков И. Ф. и др. // Ветеринария. 1998. 1. 2. ГрибенчаС. В-//Вопросы вирусологии. 1988. 33, 4. 3. Груздев К. Н. и др. Бешенство животных. Аквариум. 2001. 4. Иванов В. С. и др. // Вестник РАСХН. 2000. 2. 5. Комитет экспертов ВОЗ по бешенству // 8-й доклад. Женева, ВОЗ. 1994 (СТД 824). 6. Кузнецов П. П. и др. Сб. Передовой научно-производ, опыт вбиол, промышленности, 1979, 3. 7. Недосеков В. В. и др. Мат. междунар. конф. Покров, 2002. 8. Недосеков В. В. Мат. Ill конф. по болезням домашних животных. Персиановка. 2000. 9. Laboratory techniques in rabies 4-th ed. Geneva. 1996. 10. Desmezieres E. et al. // J. Gen. Virol. 1999. 80, 9. 11. Pastoret P. P. //Virus Research. 2002, 82. 12. Perrin P. etal. //Vaccine. 1999, 14, 5-6, 13. Stanley A. etal. // Vaccines. 1999. 14. Sureau P. // Vertrebrate Cell Cult. 1987
The modern vaccines against animal rabies V. V. Nedosekov

Copyright © 2009
При использовании материалов сайта, ссылка —
Московский Ветеринарный WEB-Центр обязательна.

источник

Антирабическая вакцина – медикамент, индуцирующий выработку иммунитета против вируса бешенства.

Антирабическую вакцину выпускают в виде лиофилизата для приготовления раствора для инъекций (гигроскопичной белой пористой массы), 1 мл которой содержит вакцину для профилактики бешенства (специфический антиген вируса бешенства, штамм «Внуково-32») в количестве 2,5 МЕ.

Вспомогательные вещества: сахароза, альбумин человека, желатин.

В ампулах по 1 мл в комплекте с растворителем (водой для инъекций).

Антирабическую вакцину, по инструкции, применяют для:

• Лечебно-профилактической иммунизации лиц, чья работа связана с отловом и содержанием безнадзорных животных (при контактах и укусах бешеными, подозреваемыми на бешенство или неизвестными животными);
• Профилактической иммунизации людей с высоким риском заражения бешенством (охотников, ветеринаров, егерей, работников боен, лесников, таксидермистов).

Противопоказания для применения препарата с целью проведения лечебно-профилактической иммунизации отсутствуют.

Применение Антирабической вакцины для профилактической иммунизации противопоказано при:

• Системных аллергических реакциях на предшествующее введение вакцины (отек Квинке, генерализованная сыпь);
• Хронических заболеваниях в стадии декомпенсации или обострения;
• Острых инфекционных и неинфекционных болезнях;
• Аллергических реакциях на антибиотики.

Препарат нельзя применять при беременности.

Антирабическую вакцину вводят внутримышечно в дельтовидную мышцу плеча, детям младше 5 лет – в переднебоковую поверхность бедра (верхнюю часть). В ягодичную область введение вакцины не допускается.

Схемы и дозы иммунизации для детей и взрослых не отличаются.

Перед применением содержимое ампулы растворяют в воде для инъекций объемом 1 мл. Хранить растворенную вакцину больше 5 минут нельзя.

Схема профилактической иммунизации включает в себя:

• Первичную иммунизацию – в 0, 7 и 30 день по 1 мл;
• Первую ревакцинацию через 1 год – 1 мл однократно;
• Последующие ревакцинации, проводимые каждые 3 года – 1 мл однократно.

Лечение не назначается в случаях отсутствия прямого контакта с больным бешенством животным (нет ослюнения и повреждений кожных покровов).

Лечение Антирабической вакциной, по инструкции, начинают немедленно по схеме: в 0, 3, 7, 14, 30 и 90 день по 1 мл, в случаях:

• Ослюнения неповрежденных кожных покровов;
• Наличия ссадин, одиночных поверхностных укусов или царапин туловища и конечностей (кроме головы, лица, шеи, гениталий, кисти, пальцев рук и ног), которые нанесены сельскохозяйственными и домашними животными.

Если животное в течение 10 дней остается здоровым, после третьей инъекции лечение прекращают. При невозможности это подтвердить, иммунизацию проводят полностью по схеме.

Немедленное комбинированное лечение, состоящее из применения в 0-й день гетерологичного (лошадиного) антирабического иммуноглобулина 40 ME/кг, гомологичного (человеческого) антирабического иммуноглобулина 20 ME/кг и Антирабической вакцины в 0, 3, 7, 14, 30 и 90 день по 1 мл, требуется при:

• Любых ослюнениях слизистых оболочек;
• Любых укусах головы, гениталий, шеи, лица, кисти, пальцев рук и ног;
• Множественных и глубоких одиночных укусах любой локализации, нанесенных сельскохозяйственными и домашними животными;
• Любых ослюнениях и повреждениях, нанесенных дикими плотоядными животными, грызунами и летучими мышами.

Если при наблюдении за животным в течение 10 дней можно подтвердить, что оно здорово, лечение прекращают после введения третьей вакцины.

После введения вакцины в месте укола может появиться зуд, покраснение, увеличение регионарных лимфоузлов.

Помимо местных побочных эффектов при применении Антирабической вакцины иногда возможно развитие таких симптомов, как головная боль, недомогание, слабость, в отдельных случаях возникают неврологические нарушения.

После вакцинации необходимо в течение получаса находиться под медицинским наблюдением. При развитии неврологических осложнений пациента следует срочно госпитализировать и провести симптоматическую терапию с применением гипосенсибилизирующих и антигистаминных лекарственных средств.

Места, где проводят прививки, должны быть оснащены средствами противошоковой терапии. По окончании курса иммунотерапии пациенту выдают справку с указанием типа и серии вакцин, курса прививок и описанием поствакцинальных реакций.

Антирабическая помощь включает в себя местную обработку царапин, ссадин и ран, которую следует провести как можно в более короткие сроки, и введение Антирабической вакцины.

Проведение курса лечения не зависит от срока обращения пострадавшего за помощью, которое может быть даже спустя несколько месяцев после контакта с неизвестным, больным или подозрительным на бешенство животным.

К неэффективности вакцинотерапии могут привести глюкокортикостероиды и иммунодепрессанты.

Вакцинирующегося следует проинформировать, что на протяжении всего курса прививок и полугода после его окончания запрещено употребление каких-либо спиртных напитков. Также рекомендуется избегать переохлаждения, переутомления и перегревания.

Прививки можно проводить не ранее, чем через 1 месяц после выздоровления (ремиссии) от острых инфекционных и неинфекционных болезней, хронических заболеваний в стадии декомпенсации или обострения.

Нельзя использовать Антирабическую вакцину в ампулах с нарушенной маркировкой и целостностью, а также в случаях изменения прозрачности и цвета, неправильного хранения препарата и после окончания его срока годности. Вскрывать ампулы и проводить процедуру вакцинации необходимо с соблюдением правил асептики.

По активному веществу аналогами Антирабической вакцины являются медикаменты Кокав, Рабивак-Внуково-32, Рабипур.

Вакцина отпускается для лечебно-профилактических учреждений.

Хранят и транспортируют Антирабическую вакцину при температуре 2-8 °С. В течение 2 дней можно перевозить и хранить медикамент при температуре до 25 °С.

Информация о препарате является обобщенной, предоставляется в ознакомительных целях и не заменяет официальную инструкцию. Самолечение опасно для здоровья!

источник