Получение вакцины против бешенства

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Бешенство остается в числе важнейших проблем здравоохранения. В мире от него ежегодно умирает около 50 000 человек, постэкспозиционную профилактику получают около 10 млн. человек. В России в 2004 г. было 17 случаев бешенства (в т.ч. 6 детей), в 2005 г. — 14 (4 детей), в 2007 — 8 (детей не было); Вакцина против бешенства вводится 200-300 тыс. лиц в год.

Источником и резервуаром вируса являются дикие плотоядные, особенно лисы и волки, а также собаки, кошки, а в странах Америки — летучие мыши. Человек заражается при укусе, при ослюнении поврежденной кожи или слизистых, редко через загрязненные слюной предметы, при разделке туш и т.п. Рабдовирус в слюне больного животного появляется не ранее, чем за 10 дней до развития у него симптомов бешенства, что определяет срок наблюдения при укусе домашним животным. Инкубационный период — от нескольких дней до 1 года (чаще 30-90 дней) зависит от инфицирующей дозы и места укуса: наиболее опасны укусы лица, пальцев и кистей рук, половых органов.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Экстренная (постэкспозиционная) — профилактика бешенства проводится лицам, контактировавшим с животным, предэкспозиционная — лицам ряда профессий — инактивированными вакцинами и специфическими иммуноглобулинами.

[7], [8], [9], [10], [11]

Для постэкспозиционного использования вакцины против бешенства противопоказаний нет.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]

[21], [22], [23], [24], [25], [26]

Перед применением в ампулу вносят 1 мл растворителя, раствор должен быть использован в течение не более 5 мин., его вводят медленно внутримышечно в Дозе 1 мл детям старше 5 лет и взрослым в дельтовидную мышцу, детям до 5 лет — в переднелатеральную поверхность бедра. Введение в ягодицу не допускается.

[27]

В ампулу с вакциной вносят 3 мл растворителя, при интенсивном встряхивании время полного растворения — не более 5 мин. Вводят в подкожную клетчатку живота, отступя от средней линии на 2-3 пальца, на уровне или ниже пупка (как исключение — в межлопаточную область). При ослюнении, поверхностных укусах, царапинах туловища или конечностей домашним животным, которое заболело в течение 10 дней после укуса, детям до 8 лет доза вакцины составляет 2 мл, старше 8 лет — 3 мл. При более серьезных повреждениях домашними и при любых укусах дикими животными разовая доза составляет соответственно 4 и 5 мл.

Вакцина против бешенства разводится 1 мл воды для инъекций и вводится внутримышечно в дельтовидную мышцу, детям раннего возраста — в переднебоковую поверхность бедра дозе 1 мл независимо от возраста.

Препараты, применяемые для профилактики бешенства

КОКАВ — вакцина культуральная сухая концентрированная очищенная инактивированная, Россия

Ослабленный вирус бешенства, выращенный в культуре клеток почек сирийских хомяков, инактивированный УФ-лучами, активность >2,5 ME. Содержит канамицина сульфат до 150 мкг/мл. Хранят при 2-8°

Рабивак-Внуково-32 (КАВ) — вакцина культуральная сухая, Россия

Тот же вирус, что и в КОКАВ, но с активностью 0,5 ME. Содержит канамицина сульфат до 150 мкг/мл и следам (до 0,5 мкг) бычьего альбумина. Хранят при 4-8°

Рабипур — Новартис Вакцине и Диагностике ГмбХ и Ко, КГ, Германия

Штамм вируса Flury LEP, выращенный на культуре куриных фибробластов, инактивированный бета-пропиолактоном. Активность >2,5 ME. Хранят при 2-8°

Иммуноглобулин антирабический из сыворотки человека — Сычуан Юанда Шуян, Китай

Раствор для инъекций 150 МЕ/мл. Флаконы 1, 2, 5 мл. (Поставщик ОАОК «Торговый дом Аллерген»)

Иммуноглобулин антирабический из сыворотки лошади, Россия, Украина

Активность не менее 150 МЕ/мл. Ампулы по 5 и 10 мл в; комплекте с ИГ в разведения 1:100. Хранят при 3-7

Иммуноглобулин антирабический из сыворотки человека вводят внутримышечно, взрослым и детям — 1 дозу 20 МЕ/кг — но не более, т.к. это может подавить продукцию антител. Часть дозы — максимально — вводят, инфильтрируя рану, а остаток — внутримышечно (бедро, ягодица) вместе с 1-й дозой вакцины — в дельтовидную мышцу — дальше от Иг.

В случае задержки, иммуноглобулин должен быть введен не позднее восьмого дня после первой дозы вакцины, независимо от интервала времени между контактом с вирусом и началом терапии. Для обеспечения хорошей инфильтрации пораженных участков у детей (особенно при множественных укусах) препарат разводят в 2-3 раза 0.9% раствором NaCl.

Иммуноглобулин антирабический из сыворотки крови лошади вводится в дозе 40 МЕ/кг массы тела после обязательной постановки внутрикожной пробы с препаратом, разведенным 1:100. При отрицательной пробе под кожу плеча вводят 0,7 мл иммуноглобулина, разведенного 1:100, и через 10 мин при отсутствии реакции дробно в 3 приема с интервалом 10-15 мин — всю дозу неразведенного препарата, подогретого до 37±0,5°. Часть дозы вводят вокруг мест укуса, а остальное — внутримышечно. При положительной кожной или подкожной пробах препарат вводят по витальным показаниям при дробной десенсибилизации. Перед первой инъекцией внутримышечно вводят антигистаминные средства, рекомендуется подкожное инъекция 0,1% раствора адреналина в возрастной дозе.

[28], [29], [30], [31], [32]

Вакцинация против бешенства обеспечивает выработку иммунитета через 10-14 дней от ее начала. При тяжелых укусах опасной локализации инкубационный период может быть слишком коротким, поэтому с вакциной вводят специфический иммуноглобулин.

Лечебно-профилактическая (постэкспозиционная) иммунизация проводится с антирабическим иммуноглобулином или без него. При тяжелых повреждениях или гибели животного от бешенства одновременно с первым введением вакцины вводят внутримышечно антирабический иммуноглобулин (если его не удалось ввести в первый день, его следует ввести как можно раньше в течение первых 3 дней после укуса). Вакцину вводят вне зависимости от срока после укуса. На территориях, свободных от бешенства в течение 2 лет и более, при укусах, нанесенных домашними животными с неустановленным диагнозом или дикими животными, иммуноглобулин не вводится, а проводится вакцинация. Схемы профилактики вакциной КОКАВ.

Введение вакцины прекращают, если по истечении 10 дней наблюдения животное осталось здоровым. В случае укуса ранее вакцинированного лица ему вводятся 2 дозы вакцины КОКАВ — в дни 0 и 3.

Рабивак (КАВ) — курс составляет от 9 до 25 инъекций в зависимости от выраженности повреждения и информации о животном.

Рабипур вводится по 1 дозе в дни 0, 3, 7, 14 и 28 после укуса всем не вакцинированным или не полностью вакцинированным против бешенства лицам. В Дании при укусах летучими мышами вводят 6 вместо 5 доз вакцины.

Профилактическая (предэкспозиционная) иммунизация проводится путем трехкратного внутримышечного введения 1 дозы вакцины (0, 7, 30 день) с ревакцинацией через 12 мес, далее — каждые 3 года; сходные схемы используются и для зарубежных вакцин. Лицам групп риска рекомендуется ежегодный контроль уровня специфических антител в крови: в случаях уменьшения их уровня ниже 0,5 МЕ/мл проводится однократная ревакцинация одной иммунизирующей дозой.

Схема лечебно-профилактических прививок КОКАВ и антирабическим иммуноглобулином (АИГ)

Категория повреждения Характер контакта*

1. Нет повреждения и ослюнения кожных покровов. Нет прямого контакта

2. Ослюнение неповрежденных кожных покровов, ссадины, одиночные поверхностные укусы или царапины туловища, верхних и нижних конечностей (кроме головы, лица, шеи, кисти, пальцев рук и ног, промежности, гениталий, нанесенные домашними или сельскохозяйственными животными.

Если в течение 10 сут. животное осталось здоровым, лечение прекращают (т.е. после 3-й инъекции). Когда невозможно наблюдение за животным, (убито, погибло, убежало и пр.) лечение завершить.

Начать лечение немедленно: КОКАВ по 1,0 мл в 0,3, 7, 14, 30 и 90 день.

Любые ослюнения слизистых, любые укусы головы, лица, шеи, кисти, пальцев рук и ног, промежности, гениталий; множественные укусы и глубокие одиночные укусы любой локализации, нанесенные домашними или сельскохоз. животными. Любые ослюнения и повреждения, внесенные дикими плотоядными животными, летучими мышами и грызунами.

Если есть возможность наблюдения за животным и оно в течение 10 сут. остается здоровым, лечение прекращают (т.е. после 3-й инъекции). Когда невозможно наблюдение за животным, лечение завершить.

Начать лечение немедленно и одновременно: АИГ в 0 день + КОКАВ (1мл) в 0, 3,7, 14, 30 и 90 день.

* — Под контактом подразумеваются укушенные раны, царапины, ссадины и места ослюнения.

[33], [34], [35], [36], [37], [38], [39], [40]

источник

Прививка от бешенства – это спасение для человека. Только прививка может надежно защитить от вируса и поможет сохранить жизнь пострадавшему. Несмотря на возможные побочные реакции от вакцинации, ее должны пройти все люди, укушенные больным животным, независимо от пола и возраста.

Бешенство – очень опасный недуг, имеющий вирусное происхождение. Заражение человека осуществляется через укус больного бешенством животного. Заболевание довольно серьезное, так как, распространяясь через поврежденную кожу по нервной системе, вызывает смертельное для жизни человека явление – воспаление коры головного мозга (энцефалит). Переносчиками вируса бешенства могут стать как домашние, так и дикие животные. Наиболее частыми источниками заражения этой смертельной болезнью становятся собаки. Вакцинация на сегодняшний день является единственным способом предотвратить развитие болезни после контакта с больным животным.

• В случае укусов, царапин или ослюнения кожи и слизистых оболочек бешеными животными.
• Если целостность кожных покровов нарушена предметами, помеченными слюной бешеных животных.
• В случае, когда бешеное животное покусало человека через одежду и наблюдаются явные нарушения кожи.
• При ситуации, если напавшее животное погибло через 5-7 дней после укуса.
• При укусах диких животных.

Также особое внимание к вопросу вакцинации от бешенства стоит уделить людям, профессия которых предполагает взаимодействие с дикими или больными животными. Выделяют такие специальности: лесник, ветеринар, охотник.

Ситуации, при которых вакцинацию против бешенства не делают:

• Если уксус произошел через плотный слой одежды, и кожа не была повреждена.
• В случае если по истечении 10 дней после укуса, животное совершившее нападение осталось здоровым.
• Если животное привито от бешенства.

Если человек стал жертвой больного животного, первое что необходимо сделать – постараться успокоиться, и как можно быстрее добраться до медицинского учреждения.

Неотложная помощь в случае нападения больного животного:

• Сразу же после укуса рану промойте теплой водой с использованием хозяйственного мыла. Щелочь, содержащаяся в мыле, разрушает вирус бешенства, который возможно попал в рану. Также мыльный раствор отлично вымывает слюну животного и грязь.
• Обязательно обработайте поврежденные кожные покровы антисептиком. Для этих целей хорошо подходит йод, зеленка или раствор марганцовки.
• Нанесите на рану антибактериальную мазь.
• После такой тщательной обработки, рану покройте стерильной марлевой повязкой.
• Получив первую скорую помощь, постарайтесь как можно быстрее добраться до кабинета врача.

Очень важно знать, напавшее животное больно бешенством или нет? Чтобы это определить, необходимо знать некоторые признаки бешенства у животных:

• животное неестественно спокойное или наоборот проявляет признаки немотивированной агрессии;
• животное забивается в темные углы;
• наблюдается обильное слюноотделение и вываливается язык;
• животное ест несъедобные предметы и категорически отказывается пить воду;
• если собака бешеная, то она не лает, а только воет или скулит.

Современный метод вакцинации от бешенства более простой, нежели был десять лет тому назад. Существует несколько схем постановки привиок, которые применяются в зависимости от ситуации.

Если на человека напало животное, зараженное бешенством, то используется следующий график вакцинации:

1. прививка делается сразу же после обращения пострадавшего к врачу;
2. еще одна прививка ставится на 3-й день;
3. по окончанию первой недели после укуса больного животного;
4. на 14-й день;
5. прививка на 30-й день;
6. последняя делается на 90-е сутки после укуса.

Такая схема вакцинации против бешенства обеспечивает образование наиболее стойкого иммунитета.

Пациент, получивший прививку от бешенства не более 1 года назад, в случае нападения больного животного проходит дополнительную вакцинацию, осуществляемую по несколько иному графику:

1. одна прививка в день, когда произошло нападение животного;
2. прививка на 3-й день;
3. и еще одна через 7 дней.

Лицам, входящим в группу риска (ветеринары, лесники) рекомендована профилактическая вакцинация, которую проводят по специально установленному графику, независимо от того, было нападение больного животного или нет. Схема прививок выглядит следующим образом:

• прививка в день обращения;
• еще одна через 7 дней;
• прививка на 30-й день;
• через год проводится первая ревакцинация;
• и затем один укол вакцины каждые три года.

При вакцинации от бешенства используют два вида вакцин:

1. КАВ – культуральная антирабическая вакцина (Рабивак). Препарат вводится подкожно в переднюю стенку брюшной полости. Одна доза составляет 3мл.
2. КоКАВ – концентрированная культуральная антирабическая вакцина (Рабипур). Она обладает большей эффективностью. Вакцина очищенная, инактивированная, предназначена не только для лечения бешенства, но и для профилактики болезни. Препарат выпускается в виде сухого порошка, для приготовления инъекций. Вакцину вводят только внутримышечно, и одна доза составляет всего 1 мл.

На выработку антител против вируса бешенства оказывать негативное влияние могут некоторые лекарственные средства:

• Препараты, действие которых направлено на укрепление иммунитета.
• Лекарственные средства химиотерапии.
• Препараты, назначаемые при лучевой терапии.
• Глюкокортикостероиды.

Решение о прекращении приема данных лекарственных препаратов принимает лечащий врач.

Всегда существует риск возникновения побочных эффектов после введения вакцины. Потому прививку от бешенства не рекомендовано делать в случае:

• Беременности (независимо от сроков).
• Обострения хронических заболеваний.
• Наличия у пациента онкологических заболеваний.
• Выявления аллергических реакций на ранее проведенную вакцинацию.
• Индивидуальная непереносимость на отдельные компоненты вакцины.

Укол вакцины может повлечь за собой ряд реакций разнообразного характера. Самыми распространенными являются:

• Зуд кожных покровов.
• Значительная припухлость в месте укола.
• Увеличение лимфатических узлов.
• Повышение температуры тела до 38,0°С.
• Общая слабость
• Головные и мышечные боли.

Также побочные эффекты от вакцинации против бешенства могут проявляться в более тяжелой форме:

• Появляется ломота в суставах.
• Присутствует лихорадочное состояние.
• На коже появляется крапивница.
• Особо тяжкие случаи могут сопровождаться нарушениями вегетативной системы.
• Отек Квинке.

Наиболее опасным последствием от введения вакцины против бешенства является анафилактический шок. Эта мгновенная аллергическая реакция способна привести к смерти человека.

После того как человеку сделают прививку против бешенства, очень важно придерживаться определенных правил и требований:

• Категорически недопустимо употребление алкоголя. Игнорирование этого правила может привести к нервным припадкам, возникновению особой чувствительности к различным внешним раздражителям, возможным приступам эпилепсии.
• Нельзя перегреваться или наоборот переохлаждаться.
• Нельзя находиться долгое время под прямыми солнечными лучами.
• Категорически запрещено мочить место введения вакцины.

В первый день после проведения вакцинации нельзя контактировать с водой вообще. Под воздействием влаги, риск возникновения аллергических реакций увеличивается в разы. Контакт с водой, в первые сутки после укола вакцины, может спровоцировать повышение температуры тела, возникновение общей слабости и озноба.

О важности вакцинации против бешенства и ее возможных последствиях в видео.

Проведение вакцинации от бешенства после укуса животного – это очень важное мероприятие, способное обезопасить человека от этого серьезного смертельного недуга. Если своевременно не предотвратить распространение вируса, человек умирает в течение десяти дней.

источник

Бешенство – смертельно опасная инфекционная патология, заразиться которой человек может от больных животных. В условиях города ими являются собаки и кошки, а в сельской местности – лисы, еноты или волки.

Возбудитель патологии – вирус бешенства (или Rabies virus), который со слюной больного животного попадает в кровь человека. Достигая коры головного мозга, зоонозная инфекция вызывает его воспаление. Без своевременной помощи возможен летальный исход. Прививка от бешенства – единственный верный способ спасти жизнь.

Состав и механизм действия культуральной концентрированной очищенной инактивированной сухой антирабической вакцины

Данный препарат не включен в прививочный календарь как обязательный. Его применяют планово или экстренно, когда пострадавший человек сам обращается за медицинской помощью. Антирабическая вакцина – сухая пористая масса беловатого цвета – лиофилизат.

Нужно сказать, что метод лиофилизации – настоящий прорыв в фармацевтике. Его суть в высушивании биоматериала путём замораживания с последующим обезвоживанием.

У лиофилизации есть неоспоримые плюсы:

• медицинский материал подвергается минимальной химической обработке, а значит, сохраняются его полезные характеристики;
• структура и форма исходного вещества практически не меняются;
• увеличенный срок хранения.

Вирус бешенства – первый препарат, который удалось получить таким способом.

У вакцины длинное название, но если разобраться, то всё не так сложно:

• антирабическая – буквально значит: «против бешенства»;
• культуральная – то есть выращенная на культуре клеток, полученных от животных. В данном случае ими стали сирийские хомячки;
• концентрированная – применён метод ультрафильтрации;
• очищенная. Базовым компонентом данной вакцины является антиген Rabies virus. В результате высокой очистки он избавляется от инфекционных примесей. Таким образом, препарат становится более безопасным при использовании. В данном случае очистка идёт методом гельхроматографии;
• инактивированная. Это значит, что убит целый микроорганизм (а не его фрагмент) с помощью ультрафиолета и формалина.

Вакцина выпускается в ампулах, рассчитанных на одну дозу (1,0 мл). Главный компонент – антиген Rabies virus специфический (штамм «Внуково-32») объёмом 2,5 МЕ. Дополнительные вещества: альбумин, сахароза и желатин. В упаковке имеется 5 ампул с вакциной + 5 ампул с растворителем. Консерванты отсутствуют.

Как действует вакцина? Её задача – вызвать у организма иммунный ответ. Это происходит, когда в кровь проникают чужеродные микроорганизмы. В нашем случае – антигены вируса бешенства. Их попадание в организм создаёт «мнимую» инфекцию.

Мнимую, поскольку вирус в вакцине убит и вызвать настоящее заболевание не способен. Но он побуждает иммунитет вырабатывать защитные антитела. Так начинается борьба с инфекцией.

Организму необходимо несколько дней, чтобы справиться с вирусом. В этот период прививаемый может испытывать лёгкие симптомы заболевания. Когда инфекция побеждена, иммунитет сохраняет так называемые клетки «памяти» (Т и В-лейкоциты).

Если впоследствии в организм проникнут «знакомые» антигены, эти клетки моментально выработают антитела для уничтожения инфекции, а болезнь не разовьётся.

Вакцине от бешенства более ста лет. Но и по сей день – это единственно эффективный способ защиты от смертельной патологии.

Врачи настоятельно рекомендуют обязательную лечебно-профилактическую вакцинацию для:

• людей, которые в силу своей профессии постоянно находятся на природе. Это егеря и охотники, рыболовы и лесники;
• работников скотобоен;
• ветеринарных врачей и лабораторных диагностов, исследующих мозг инфицированного животного;
• работников по отлову безнадзорных животных;
• владельцев зооприютов;
• путешественников, отправляющихся в страны повышенного риска.

Для этих лиц рекомендована плановая вакцинация – раз в 2-3 года.

Показания к профилактической иммунизации зависят от вида контакта с возможно инфицированным животным:

• 1 категория – прикасание к животным или ослюнение ими неповреждённой кожи. Здесь профилактика не предусмотрена;
• 2 категория – имеются незначительные царапины или укусы без кровотечения. В этом случае следует незамедлительно и тщательно (10-15 мин.) промыть повреждения, обильно смачивая кожу водой с использованием моющих средств. Требуется срочная вакцинация;
• 3 категория – множественные и значительные укусы и царапины. Здесь также необходима тщательная обработка ран (желательно йодом) и незамедлительная вакцинация.

Первичной профилактической иммунизации подлежат дети:

• проживающие в районах, где риск бешенства высок;
• отдыхающие в лагерях;
• находящиеся в областях, где антирабические препараты трудно найти или они отсутствуют.

Вакцинация обязательна, если:

• состояние животного нельзя отследить;
• укус или царапину нанес домашний питомец (непривитый) или дикое животное. В этом случае оно изолируются на 10 дней с целью выяснения наличия инфекции (забор крови на уровень антител), а пациент в это время получает курс из 3-х вакцин. Профилактическую иммунизацию прекращают, когда будет установлено, что животное не инфицировано. Если нет – проводят полный курс;
• укус летучей мыши, лисы или волка – условие обязательной вакцинации;
• возраст пациента – меньше 10 лет;
• укусы в области шеи или головы.

Антирабическую вакцину нужно вводить как можно быстрее – желательно в 1-3 сутки с момента контакта с инфицированным животным. Период инкубации бешенства – 10-90 дней. Жизненно необходимо успеть привиться в этот период. Когда заболевание разовьётся, иммунизация бесполезна.

Непосредственно перед инъекцией медперсонал готовит вакцину. Для этого в ампулу с лиофилизатом (1,0 мл) вводят растворитель (1,1 мл). Готовая инъекция должна быть однородной (без посторонних включений), прозрачной или чуть желтоватой.

Вводится вакцина внутримышечно (1 доза – 1 мл) взрослым и малышам от 2-х лет в дельтовидную мышцу, а детям до 2-х лет – в верхнюю область бедра. Допустимо и внутрикожное введение (1,0 мл/доза). Инъекции в ягодичную область запрещены.

Вакцина считается непригодной к использованию, если:

• на ампуле имеются повреждения (её целостность нарушена);
• маркировка не просматривается;
• цвет и прозрачность изменены;
• срок годности истёк.

Прививание ведётся с соблюдением правил асептики. Готовая вакцина «живёт» 5 минут. Её хранение сверх этого времени не допускается.

Перед процедурой пострадавшему оказывают обязательную антирабическую помощь. Раны, царапины и прочие повреждения обрабатывают: обильно промывают водой. Края ранки протирают спиртом (70%) или йодом.

Затем вводят саму вакцину и (если есть показания) антирабический иммуноглобулин. Между инъекциями выдерживают интервал 15-29 мин. Наложение швов на раны стараются не делать.

После процедуры рекомендуется остаться под врачебным наблюдением минут 30. Действие сыворотки от бешенства для человека не слишком длительное и составляет обычно 1-3 года. Далее проводится ревакцинация.

График прививания отличается в случае обычного (планового) курса и при экстренной (безусловной) вакцинации.

Сроки 3-х этапной плановой иммунизации (по 1,0 мл):

• первая инъекция. День назначается по ситуации;
• 7 сутки – вторая прививка;
• через 30 дней – третья инъекция.

Ревакцинация показана через 3 года разово по 1,0 мл.

Безусловная вакцинация предполагает 5-ти кратное прививание (1,0 мл/доза):

• 1 – в день укуса (как можно раньше);
• 2 – на 3-ий день;
• 3 – 7-е сутки;
• 4 – через 14 дней;
• 5 – на 30-е сутки.

Это стандартный график экстренной иммунизации. В отдельных случаях (для закрепления эффекта) проводят 6-ю инъекцию: в конце 3-го месяца (относительно 1-го прививания).

Помните, что современная вакцинация от бешенства – это уже не 40 уколов в живот, как было раньше (и так многие думают сейчас), а всего 5-6 безболезненных прививок в плечо. Вся вакцинопрофилактика от бешенства в нашей стране бесплатная, даже при отсутствии полиса ОМС.

Любая вакцина (живая или мёртвая) имеет нежелательные последствия. Антирабический препарат – не исключение.

Согласно инструкции, прививаться в профилактических целях не стоит:

• беременным;
• лицам с обострением хронических патологий. Иммунизация здесь проводится через месяц после ремиссии;
• в случае системных аллергических проявлений на предыдущее введение антирабического иммуноглобулина: отёка Квинке, эритродермии и др.;
• при ОРВИ и неинфекционных патологиях.

Следует знать, что данные противопоказания справедливы только для плановой иммунизации (до контакта с заражённым животным). Прививка от бешенства – единственная процедура во всём мире, которую проводят независимо от противопоказаний, ведь на кону человеческая жизнь. И это несмотря на то, что препарат даёт побочные проявления.

Вакцинируются даже будущие мамы. Это спасёт и женщину, и малыша. Противопоказанием к плановой иммунопрофилактике является ещё и возраст пациента – до 16-ти лет. Однако и здесь, в случае угрозы заражения, прививание обязательно.

Поскольку антирабическая вакцина – высокоочищенный препарат, осложнений он практически не даёт. Нежелательные проявления обычно носят локальный характер.

Место инъекции может:

Воспаление регионарных лимфоузлов – редкий случай.

Общая реакция проявляется в виде:

• тошноты и рвоты;
• боли в мышцах;
• перепадов температуры и слабости;
• крапивницы и головокружения.

Подобная симптоматика не должна вызывать панику. Как правило, эти неприятные проявления не требуют лечения и самостоятельно исчезают через несколько дней.

Побочные действия препарата возрастают при комбинированной вакцинации, когда к основной прививке добавляют антирабический иммуноглобулин.

Более тяжёлая симптоматика проявляется как:

• лихорадка;
• анафилактический шок;
• суставная боль.

Если такие негативные проявления всё же случились, следует немедленно обратиться к врачу. Сообщите ему о своём состоянии, уточните, когда началось осложнение.

Тяжёлых пациентов экстренно госпитализируют.

Когда речь идёт об антирабической прививке пациент и врач понимают, что это не безобидный препарат. Поскольку вакцина создавалась для борьбы со смертельным вирусом, её состав основан на сильных компонентах, ухудшающих состояние прививаемого. Но это временно.

Антирабическую вакцину (5 ампул по 1,0 мл) можно приобрести в аптеке за 2220-2300 руб/упак. Отпускается по рецепту. Стоимость процедуры в платной клинике составит 1000-1100 руб.

Препараты со схожим составом есть как среди отечественных, так и импортных вакцин.

Наиболее популярными признаны ( расчёт за дозу):

• Кокав (Россия). Цена: 1720-2300 руб.;
• Рабипур. Немецкий препарат. Цена: 2700-3400 руб.;
• Индираб (Индия). Цена: 7000-8000 руб.;
• Верораб (Франция). Цена: 1100 руб.;
• Speeda (Китай) в России не зарегистрирована.

Антирабическая помощь в нашей стране – бесплатная процедура.

Наиболее активны (в плане иммунопрофилактики от бешенства) жители глубинки, где получить своевременную помощь проблематично.

Много положительных откликов и от мам, которые решили вакцинировать своих малышей. Детишки переносят уколы легко, ведь они безболезненны.

Практикующий врач аллерголог-иммунолог о прививке от бешенства человеку:

Вакцинация от бешенства – единственно верный способ сохранить свою жизнь, если произошёл контакт с возможно инфицированным животным или в целях профилактики. При любом подозрении на заражение нужно прививаться, не раздумывая и не оглядываясь на противопоказания.

источник

Владельцы патента RU 2432963:

Изобретение относится к области биотехнологии ветеринарных препаратов. Вакцина против вируса бешенства представляет собой аллантоисную жидкость куриных эмбрионов. Жидкость содержит гликопротеин вируса бешенства, а также смесь рекомбинантных аденовирусов птиц, несущих ген поверхностного гликопротеина вируса бешенства, один из которых содержит секретируемую форму поверхностного гликопротеина вируса бешенства, а второй — мембраннсвязанную. Взаимодействие гликопротеинов с организмом животных достигается путем перорального введения препарата. Изобретение может быть использовано в ветеринарии. 3 ил., 1 табл.

Бешенство — острое инфекционное заболевание зоонозного происхождения. Случаи бешенства диких, а также домашних животных регулярно регистрируются во многих странах, что представляет серьезную угрозу для населения. В ветеринарной практике широкое распространение получили живые и инактивированные цельновирионные вакцины на основе вакцинных штаммов вируса бешенства (Rabies, 2nd edition. Alan С.Jackson, William H.Wunner, 2007). Традиционные вакцины от бешенства получают из нервной ткани инфицированных животных. Применение таких вакцин нередко приводит к нежелательным побочным эффектам (полиневрит, энцефаломиелит), связанным с наличием примесей миелина в препарате (J. Postgrad Med. 1970 16(3): 132-4). Меньшей реактогенностью обладают вакцины на основе нервной ткани новорожденных животных (мыши, ягнята), что связано со слабым развитием миелиновой оболочки в нервной ткани таких животных. Однако данные вакцины небезопасны. Первыми вакцинами против бешенства, основанными не на нервной ткани, были вакцины, получаемые в утиных эмбрионах (Mil Med. 1964; 129:960-5). Эти вакцины вскоре были замещены современными культуральными вакцинами на основе диплоидных клеток человека, клеток Vero (Dev Biol Stand. 1981; 50:173-82), клеток почки новорожденных хомячков (Appl Microbiol. 1973 Dec; 26(6):858-62), куриных эмбриональных фибробластов (Monogr Ser World Health Organ. 1966; 23:124-31). Несмотря на эффективность использования живых аттенуированных штаммов вируса бешенства для вакцинопрофилактики, их применение связано с риском попадания в окружающую среду живого инфекционного вируса, поскольку не исключается возможность реверсии в вирулентную форму.

В настоящее время широко применяются культуральные вакцины, содержащие аттенуированные штаммы вируса бешенства, инактивированные различными химическими агентами (фенол, бета-пропиолактон) или физическими воздействиями (ультрафиолетовое излучение) (Jpn J Med Sci Biol. 1953; 6(6):577-86). Однако получение таких вакцин связано с необходимостью непосредственной работы с живым патогеном. Кроме того, проведение процесса аттенуирования вирулентного штамма с целью получения препарата, пригодного для массовой иммунизации, является кропотливой и рутинной работой, требующей затраты большого количества времени и средств.

Успехи в области клонирования и экспрессии генов привели к созданию рекомбинантных вакцин против бешенства, которые просты в изготовлении, устойчивы во внешней среде и индуцируют напряженный иммунитет. Применение рекомбинантного вируса исключает попадание во внешнюю среду потенциально опасного генома вакцинного вируса бешенства. Наиболее изученными и перспективными для использования в вакцинопрофилактике бешенства являются рекомбинантные вакцины на основе вируса коровьей оспы (Vaccine. 2009 27; 27(51):7198-201) и аденовирусов (Virology. 20065-20; 356(1-2):147-54).

Рекомбинантная вирусная вакцина от бешенства на основе вируса коровьей оспы, экспрессирующая гликопротеин вируса бешенства, используется для иммунизации животных в дикой природе (J. Wildl. Dis., 1998, 34, 752-763). Однако, контакт человека с вирусом коровьей оспы может сопровождаться серьезными побочными эффектами, что было показано при проведении массовой вакцинации солдат американской армии (Comp Immunol Microbiol Infect Dis, 2003, 26, 423-430).

Рекомбинантные аденовирусы по сравнению с другими векторными системами отличаются высокой эффективностью экспрессии целевого трансгена в различных типах клеток, безопасностью вектора для человека и животных, накоплением рекомбинантных вирусов в клетках-продуцентах в высоком титре, индукцией как гуморального, так и клеточного иммунного ответа на трансгенный продукт, большой пакующей емкостью вектора (Curr Top Microbiol Immunol. 2004, 273, 335-57). Рекомбинантные аденовирусы в качестве вакцины могут использоваться как для парэнтерального, так и для перорального введения.

Известен способ пероральной иммунизации мышей рекомбинантными репликативно-дефектными аденовирусами 5 (аденовирус человека) и 68 серотипа (аденовирус шимпанзе), несущими ген гликопротеина вируса бешенства (US Pat. 2004019603).

К недостаткам описанного способа относится высокая стоимость процесса получения необходимого для иммунизации количества препарата рекомбинантного аденовируса с использованием клеточной линии человека.

К наиболее безопасным среди современных вакцин относятся расщепленные сплит-вакцины, содержащие частицы вируса — изолированные поверхностные и внутренние белки. Изготавливается вакцина путем расщепления вирусных частиц при помощи органических растворителей или детергентов, также вирусные компоненты могут быть получены в лабораторных условиях с использованием генно-инженерной технологии (J Immunol. 1996 15; 156(10):3579-82). Расщепленные вакцины характеризуются значительно меньшим риском побочных реакций, в связи с удалением реактогенных липидов, входящих в состав оболочки вируса. Поскольку выработка вируснейтрализующих антител против бешенства идет на поверхностный гликопротеин, данный структурный компонент используется для создания ресщепленных вакцин. Использование методов генной инженерии для получения изолированного гликопротина вируса бешенства, исключающих работу с патогеном, повышают безопасность получаемых вакцин.

Известен способ получения вакцины против бешенства, содержащей изолированный поверхностный гликопротеин вируса бешенства, экспрессированный в эукариотических клетках (US. Pat. 9411112). Кодирующую последовательность ДНК гликопротеина вируса бешенства получают реакцией обратной транскрипции на матрице РНК вируса или искусственно синтезируют, после чего она может быть встроена в коммерческий экспрессирующий вектор. Для экспрессии гликопротеина вируса бешенства в клетках S. cerevisiae разработан коммерческий плазмидный вектор pYES2 (hivitrogen, San Diego, CA). Получение гликопротеина вируса бешенства в клетках насекомых обеспечивается бакуловирусной системой экспрессии (Virology. 1989; 173(2):390-9), например, коммерческим набором МахВас (bivitrogen, Sail Diego, CA). Для получения гликопротеина вируса бешенства в клетках млекопитающих (клетки яичника китайского хомячка) может быть использован плазмидный вектор pcDNA I bivitrogen, San Diego, CA). Высокий уровень экспрессии интересующего гена обеспечивается присутствием промоторных последовательностей, энхансеров, сигнала полиаденилирования. Таким образом, получение поверхностного гликопротеина вируса бешенства возможно как в прокариотичексих, так и в эукариотических системах экспрессии, однако, использование клеток эукариот является предпочтительным, поскольку они обеспечивают необходимые посттрансляционные модификации, что приводит к образованию функционально активного продукта.

Рекомбинантный гликопротеин вируса бешенства вводится перорально животным в виде приманки с привлекательным вкусом и запахом в количестве от 100 до 300 мкг. При пероральной иммунизации описанным способом гликопротеин вируса бешенства, попадая в организм животных связывается с эпителием ротовой полости и глотки, что приводит к развитию мукозального иммунитета.

Описанный способ как наиболее близкий к заявляемому выбран за прототип.

Однако к недостаткам прототипа относится быстрая деградация в организме за счет действия протеолитических ферментов и клеток иммунной системы, короткий период полураспада чужеродного белка в организме (в среднем 2-3 часа), необходимость введения в организм больших доз вакцинных препаратов для достижения положительного эффекта; для эффективной пероральной иммунизации изолированным вирусным белком необходимо применение адъюванта; высокая себестоимость процесса получения препаративных количеств рекомбинантного гликопротеина вируса бешенства, связанная с необходимостью культивирования эукариотических клеток для получения препаративных количеств рекомбинантного белка.

Целью предполагаемого изобретения является получение рекомбинантной многокомпонентной вакцины, накопленной в аллантоисной жидкости куриных эмбрионов, для однократной пероральной иммунизации животных против вируса бешенства.

Сущностью предлагаемого изобретения является использование смеси рекомбинантного гликопротеина вируса бешенства и аденовирусов птиц CELO, экспрессирующих мембраннсвязанную и секретируемую формы гликопротеина вируса бешенства, накопленных в аллантоисной жидкости куриных эмбрионов. Рекомбинантный аденовирус птиц CELO, экспрессирующий секретируемую форму гликопротеина вируса бешенства обеспечивает присутствие данного компонента непосредственно в вакцинном препарате, а рекомбинантный аденовирус птиц CELO, экспрессирующий мембраннсвязанный гликопротеин вируса бешенства позволяет осуществлять эффективную и пролонгированную экспрессию целевого гена в организме иммунизированных животных, что приводит к формированию у них мощного гуморального и цитотоксического иммунного ответа против бешенства.

В качестве носителя для действующего вещества вакцины и адъюванта используется рекомбинантный аденовирус птиц CELO. Вектор CELO обеспечивает высокий уровень экспрессии целевого гена в клетках куриного эмбриона (Protein Expr Purif. 2009; 65(1): 100-7), что приводит к накоплению рекомбинантного гликопротеина вируса бешенства в аллантоисной жидкости в концентрациях, достаточных для проведения иммунизации (до 100 мкг/мл). Вектор CELO способен осуществлять доставку репортерных генов и генов интереса в млекопитающих in vivo и обеспечивает пролонгированную экспрессию (до 30 дней), что обеспечивает продление периода циркуляции антигена в организме (Mol Gen Mikrobiol Virusol. 2008; (4):26-30). Эта система вирусной доставки генов безопасна для млекопитающих, так как вирус CELO не способен к репликации в клетках данных хозяев. Основным преимуществом аденовирусного вектора CELO является возможность получения препаративного количества рекомбинантных вирусов CELO в куриных эмбрионах. Количество рекомбинантных аденовирусов CELO, получаемое из одного куриного эмбриона, составляет более 10 12 вирусных частиц. Титр вируса в аллантоисной жидкости составляет 5×10 8 БОЕ/мл. Рекомбинантный гликопротеин вируса бешенства и аденовирусные частицы, присутствующие в аллантоисной жидкости, достаточно стабильны в течение времени, необходимого для проведения иммунизации, поэтому дополнительной стабилизации препарата не требуется.

Для решения проблемы, связанной с ограниченной эффективностью трансдукции клеток млекопитающих векторами на основе аденовируса птиц, разработаны подходы, заключающиеся в генетической модификации отростка пентона (фибера). Данные подходы включают конструирование «химерных» фиберов (замена глобулярного домена на соответствующий домен альтернативного серотипа аденовирусов) или введения различных гетерологичных рецептор-связывающих последовательностей на С-конец или в HI-петлю 3 глобулярного домена фибера (J Virol., 2007 81(18); 9641-9652.). Такие модифицированные векторы способны обеспечивать эффективную доставку генетической информации в клетки млекопитающих, в норме резистентных к инфекции аденовирусами.

За счет способности взаимодействовать с рецепторами врожденного иммунитета аденовирусный вектор может выступать в качестве адъюванта (J. Virol., 2002, р.127-135).

Вирус бешенства вакцинного штамма ТС-80 размножают в культуре клеток почки сайги. Титр полученного вируса определяют в соответствии с рекомендациями ВОЗ (Laboratory Technics in rabies. 4_th edition. WHO, Geneva, 1996). Титр вируса составляет 10 8 БОЕ/мл.

Стандартный штамм вируса бешенства CVS-24 для проведения заражения летальной дозой вируса получают из ткани мозга инфицированных новорожденных мышей (J Ехр Med. 1977 1; 145(6):1617-22).

Ген гликопротеина G получают путем амплификации кДНК, синтезированной методом ОТ-ПЦР (Reverse Tpanscription System «Invitrogene» №12236-014, USA) на матрице РНК, выделенной из вируса бешенства вакцинного штамма ТС-80 с использованием TRIZOL («Invitrogene» №15596-018, USA). Для ПЦР используют олигонуклеотиды, фланкирующие полный ген гликопротеина 5′-ggatccaggaaagatggttcctcaggctctcctgtttg и 5′-gctgcagcaaggggaggtgatcttcagacttggatcgt, подобранные согласно последовательности гена гликопротеина вируса бешенства (gene bank AB518487.1). Фрагмент ДНК, несущий ген гликопротеина G вируса бешенства (последовательность №1), клонируют в плазмидный вектор pGEM-T Easy Vector («Promega», A1360, USA). Ген гликопротеина G вируса бешенства субклонируют в составе экспрессирующей кассеты, состоящей из промотора CMV с энхансером и участком полиаденилирования BGH в вектор pCBEdlRV, содержащий фрагмент генома аденовируса CELO с делецией, несущественной для репликации вируса области. Рекомбинантный аденовирус CELO-glRb, несущий ген гликопротеина вируса бешенства, получают методом гомологичной рекомбинации в клетках LMH. Растворимую форму гликопротеина G вируса бешенства (ΔglRb) получают путем сайт-специфического мутагенеза с использованием олигонуклеотидов: 5′-aggagcatgcaaactcaag, 5′-ggtggcggccgctcaatgcac, внося замену в аминокислотной последовательности в положении 417: Pro417 на стоп-кодон. Вариант гена гликопротеина G вируса бешенства с делецией трансмембранного домена (последовательность №2) субклонируют в составе экспрессирующей кассеты, состоящей из промотора CMV с энхансером и участком полиаденилирования BGH в вектор pCBEdlRV, содержащий фрагмент генома аденовируса CELO с делецией, несущественной для репликации вируса области. Рекомбинантный аденовирус CELO-ΔglRb, несущий ген гликопротеина вируса бешенства с делецией, получают методом гомологичной рекомбинации в клетках LMH. Схематическое изображение геномной ДНК рекомбинантного аденовируса птиц CELO-glRb, несущего ген гликопротеина G вируса бешенства, представлено на фигуре 1А

Плазмидную конструкцию, несущую полноразмерный геном аденовируса птиц CELO-HIRGD, имеющего модификации структурных белков капсида (фибера) и экспрессирующую кассету с геном гликопротеина вируса бешенства, получают методом гомологичной рекомбинацией в Е. coli штамма BJ5183 между плазмидами pCELO-HIRGD, и шаттл-вектором pCShCMV-glRb, несущим экспрессирующую кассету (CMV промотор, трансген, сигнал полиаденилирования), фланкируемую последовательностями CELO. Шаттл-вектор pCShCMV-glRb линеаризуют по рестриктазе AscI. Плазмиду pCELO-HIRGD линеаризуют по PacI. Шаттл-вектор вместе с плазмидой pCELO-HIRGD трансформируют в клетки Е. coli штамма BJ5183. Получение рекомбинантных клонов подтверждают с помощью ПЦР, рестрикционным картированием и секвенированием. Схематическое изображение геномной ДНК рекомбинантного аденовируса птиц CELO-HIRGD-glRb, имеющего модификации структурных белков капсида, несущего ген гликопротеина G вируса бешенства, представлено на фигуре 1Б.

Экспрессию гена гликопротеина G вируса бешенства в куриных эмбрионах, зараженных аденовирусами CELO-ΔglRb, CELO-glRb, CELO-HIRGD-glRb, определяют методом иммуноблоттинга. Куриные эмбрионы заражают рекомбинантными аденовирусами CELO-ΔglRb, CELO-glRb, CELO-HIRGD-glRb. В качестве контрольного используют аденовирус CELO дикого типа. Через 72 часа после заражения отбирают аллантоисную жидкость, которую анализируют методом иммуноблоттинга. В реакции используют моноклональные антитела к вирусу бешенства штамма ТС-80. Специфическое взаимодействие комплекса антиген-антитело выявляют антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом (Goat-antimouse IgG-HRP, Amersham, 1:5000). Окраску проводят с использованием хемилюминисцентной системы детекции (ECL-plus Detection System, Amersham). Результат проведенного иммуноблоттинга представлен на фигуре 2.

Результат анализа показывает специфическое взаимодействие антител и рекомбинантного белка, соответствующего по электрофоретической подвижности гликопротеину G вируса.

Полученным культуральным вирусным препаратом CELO-glRb инфицируют куриные SPF-эмбрионы, из расчета 100 мкл культурального препарата на эмбрион. Через 72 ч после заражения отбирают аллантоиснюю жидкость. Аналогичным образом получают препарат рекомбинантного аденовируса птиц CELO-HIRGD-glRb и препарат рекомбинантного аденовируса птиц, несущего в составе экспрессирующей кассеты ген гликопротеина G вируса бешенства без трансмембранного домена — CELO-ΔglRb. Для проведения иммунизации аллантоисные препараты рекомбинантных вирусов CELO-glRb и CELO-HIRGD-glRb смешивают в соотношении 1:1 с препаратом рекомбинантного аденовируса птиц CELO-ΔglRb. Полученные комбинации используются для пероральной иммунизации мышей в количестве 1 мл на животное.

Первой группе беспородных мышей перорально однократно вводят смесь рекомбинантных аденовирусов CELO-glRb/CELO-ΔglRb в виде аллантоисного препарата. Второй группе вводят смесь рекомбинантных аденовирусов CELO-HIRGD-glRb/CELO-ΔglRb. Третью группу мышей двукратно иммунизируют культуральной инактивированной вакциной, содержащей штамм вируса бешенства ТС-80. В качестве отрицательного контроля группе мышей однократно вводят аденовирус CELO дикого типа. Через 14 дней после иммунизации мышам интрацеребрально вводят 100 МЛД₅₀ вируса CVS-24. В группе мышей, однократно иммунизированных рекомбинантными аденовирусами CELO-glRb и CELO-HIRGD-glRb, выжило 91% и 90% животных, соответственно. При использовании стандартной культуральной инактивированной вакцины только 82% мышей были защищены от последующего заражения летальной дозой вируса бешенства штамма CVS-24 (таблица).

Таким образом, показано, что максимальный уровень защиты мышей от внутрицеребрального заражения вирусом бешенства штамма CVS-24 — 91% — детектируется при однократной иммунизации рекомбинантными аденовирусами птиц CELO-glRb и CELO-HIRGD-glRb перорально.

Специфические антитела к вирусу бешенства в сыворотке крови мышей, иммунизированных рекомбинантной вакциной CELO-glRb или CELO-HIRGD-glRb, определяют методом непрямого иммуноферментного анализа.

Сенсибилизацию панелей проводят нормальным и специфическим антигенами, которые вносят разведенными в рабочем разведении в 0,01 М фосфатно-солевом буфере (ФСБ), pH 7,2-7,4 в нечетные и четные ряды, соответственно. Панели инкубируют в течение ночи при 4°С.

Свободные адсорбционные сайты полистирола блокируют 1% БСА, в объеме 0,15 мл /лунку, инкубируя в течение 30 минут при 37°С. После последующей отмывки пластин ФСБ с Твин-20 (ФСБ-Т) испытуемые сыворотки вносят в лунки панелей в разведении с 1:3 до 1:729 на 1% БСА в ФСБ. Пластины инкубируют в течение 40 минут при 37°С, затем проводят трехкратную отмывку в ФСБ-Т, вносят рабочее разведение (1:1000) антимышиного пероксидазного конъюгата и инкубируют в течение 40 минут при 37°С.

После этого пластины шестикратно отмывают ФСБ-Т и вносят раствор хромогенного субстрата (АБТС). Учет результата проводят через 30 минут инкубирования при комнатной температуре.

Учет реакции осуществляют фотометрически при длине волны 405 нм. Реакцию считают положительной и специфичной, если оптическая плотность хромогенного субстратного раствора в лунках, в которых предварительно инкубировали исследуемые сыворотки, а также в лунках, в которые вносили положительные контрольные сыворотки, в 2 или более раз превышала среднюю оптическую плотность субстрата в лунках, в которые вносили контрольные (отрицательные) нормальные сыворотки.

Результат титрования специфических антител к вирусу бешенства в сыворотке крови мышей, иммунизированных рекомбинантным вирусом CELO-glRb, представлен на фигуре 5. Титр антител в сыворотке крови мышей, иммунизированных рекомбинантными аденовирусами CELO-glRb и CELO-HIRGD-glRb, коррелирует с титром антител, детектированным в сыворотках крови мышей после иммунизации культуральной вакциной ТС-80. Рекомбинантные вирусы CELO-glRb и CELO-HIRGD-glRb при введении мышам индуцируют синтез высокого уровня специфических антител против гликопротеина G вируса бешенства.

Таким образом, получена вакцина, содержащая смесь гликопротеина вируса бешенства, а также рекомбинантных аденовирусов птиц, один из которых (CELO-glRb) экспрессирует секретируемую форму поверхностного гликопротеина вируса бешенства, а второй (CELO-glRb или CELO-HIRGD-glRb) — мембраннсвязанную, однократное пероральное введение которой приводит к эффективной защите от летальных доз вируса бешенства.

Способ получения пероральной вакцины против вируса бешенства животных, включающий получение рекомбинантного гликопротеина вируса бешенства для пероральной иммунизации, отличающийся тем, что получают аллантоисную жидкость куриных эмбрионов, содержащую рекомбинантный гликопротеин вируса бешенства, его продуцент — рекомбинантный аденовирус птиц CELO, а также рекомбинантный аденовирус птиц CELO, являющийся продуцентом мембранно-связанного гликопротеина вируса бешенства, или рекомбинантный аденовирус птиц CELO, имеющий модификации структурных белков капсида и являющийся продуцентом мембранно-связанного гликопротеина вируса бешенства.

источник

Изобретение относится к ветеринарии, а именно профилактической иммунизации собак против бешенства и чумы плотоядных. Вакцина приготовлена из авирулентного штамма Рокборн вируса чумки и авирулентного штамма Внуково-32 вируса бешенства. Вакцину выпускают в заполненных инертным газом герметически закрытых флаконах (ампулах). В отличие от всех существующих, указанная вакцина — это смесь двух культуральных вакцин: живой аттенуированной вакцины против чумы плотоядных, выращенной в первичных клетках почечной ткани зеленых мартышек или клетках перевиваемой линии почек обезьян (4647) и инактивированной антирабической вакцины, выращенной в первичной клеточной культуре клеток сирийского хомяка или в клетках 4647. Вакцина выпускается в удобной для применения форме.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к способам получения вакцин для иммунизации собак.

В настоящее время существует ряд инактивированных вакцин против бешенства собак, выпускаемых в разных странах. Наиболее иммуногенными являются культуральные вакцины фирмы «Мерье» (Франция) [1] и культуральная вакцина из штамма «Внуково-32» (ИПВЭ РАМН) [2] Известны также высококачественные культуральные живые аттенуированные вакцины против чумы плотоядных. Одной из лучших считается вакцина «Вакчум», разработанная в ИПВЭ РАМН [3] В настоящее время наблюдается тенденция перехода от одновалентных вакцин к поливалентным, так как при этом меньше травмируется животное и обеспечивается лучшая возможность соблюдать правила антисептики. Ассоциированной вакцины против бешенства и чумы плотоядных в литературе не описано.

Задача решена предлагаемой вакциной «Дивак», представляющей собой смесь двух вакцин на стадии жидкого полуфабриката: против чумы плотоядных — 1 o C1,1 часть, против бешенства 1,9 o C2 части. Антирабическая вакцина представляет собой вакционный вирус бешенства, штамм «Внуково-32», выращенный в первичной клеточной культуре клеток сирийского хомяка или в клетках перевиваемой линии 4647 и инактивированный ультрафиолетовыми лучами (УФ-лучами). Вакцина против чумы плотоядных «Вакчум» это живой аттенуированный вирус штамм «Рокборн», аттенуированный в культуре первичных клеток почечной ткани зеленых мартышек или в клетках 4647.

Авторам удалось, впервые в вирусологической практике, ассоциировать живую и убитую вакцины. Это стало возможным благодаря тому, что инактивация антирабической вакцины осуществляется УФ-лучами и вакцина не содержит формалина или других инактиваторов, убивающих вирус второго компонента.

Предлагаемая вакцина находит широкое применение в связи с большим количеством служебных и домашних собак ценных пород. Она разрешена к применению Главветупром Министерства сельского хозяйства.

Утверждены также Технические условия ТУ-08064-19-22-95 и инструкции по изготовлению и контролю.

Способ осуществляют следующим образом.

Получение антирабической вакцины.

Адаптацию аттенуированного штамма «Внуково-32» проводят в культуре первичных клеток почки сирийского хомяка. Монослой клеток почки сирийского хомяка, выращенный при температуре 371 o C, отмывают два раза рабочим раствором Эрла и инфицируют вируссодержащей культуральной жидкостью (штамм «Внуково-32») в дозе 0,001 LD₅₀ на одну клетку. Аналогично поступают в случае с клетками 4647. Сорбция вируса проходит при 37 o 1 o C в течение 1 ч. В качестве поддерживающей среды используют среду Игла, содержащую 0,2 o C0,22% ростовых протеинов. Зараженные клетки инкубируют при 32 o 1 o C, через 3 сут проводят смену поддерживающей среды и еще через 3 сут собирают урожай вируса. Вируссодержащий материал сохраняют при -201 o C и после соответствующих контрольных исследований на бактериальную и микологическую стерильность производят фильтрацию вируса, затем инактивацию его ультрафиолетовыми лучами, на аппарате иррадиаторе ультрафиолетовых лучей со скоростью 20 21 об/мин, на расстоянии 18 20 см, в слое 1 1,1 мм.

Получение вакцины против чумы плотоядных «Вакчум».

Адаптацию аттенуированного штамма «Рокборн» вируса чумы плотоядных к культуре почечной ткани зеленых мартышек проводят в течение 8 10 пассажей при температуре 34 0,2 o C, доводя инкубационный период развития вируса до 4 5 дн. На основе адаптированного вируса готовят посевной вирус.

Система посевного вируса предусматривает приготовление в большом объеме вакционного вируса, отвечающего всем требованиям аттенуированного штамма, сохранение его в жидком азоте и использование по мере необходимости для изготовления вакцины.

Для производства вакцины используют культуру клеток почечной ткани зеленых мартышек или перевиваемой линии 4647.

Выращивание вакционного вируса в указанных культурах ведут при температуре 34 0,2 o C на средах с добавлением 50,2% сыворотки крупного рогатого скота. Вируссодержащую жидкость удаляют 3 5 раз, заменяя ее свежей питательной средой, причем первое удаление производят после появления цитопатологических изменений в 30 40% клеток, и повторяют эту операцию до полной дегенерации клеток. Сборы вируссодержащей жидкости объединяют и освобождают от детрита.

Получение ассоциированной вакцины против бешенства и чумы плотоядных.

Полуфабрикаты вакцины против чумы плотоядных и антирабической вакцины смешивают в соотношении 1 o C 1,1 часть вакцины против чумы плотоядных + 1,9 o C 2 части антирабической вакцины, добавляют 10%-ный раствор желатозы до конечной концентрации 1 0,1% и 40%-ный раствор сорбита до конечной концентрации 50,1% Затем разливают вакцину по (3,00,1) мл и лиофилизируют. Все этапы процесса изготовления вакцины (Дивак) проводят в стерильных условиях.

Препарат, полученный после лиофилизации, подвергают биологическим испытаниям, и при получении благоприятных результатов препарат считают вакциной, готовой к использованию.

Высокая иммуногенность и низкая реактогенность обоих компонентов вакцины, выращенных в культуре клеток, а также применяемый способ инактивации вируса бешенства ультрафиолетом, дающий возможность соединения его с живым вирусом чумы плотоядных, позволяют впервые в мире создать высокоэффективную ассоциированную вакцину этих двух вирусов вакцину нового поколения.

Эта вакцина уже сейчас применяется в ветеринарной практике (в 1992 94 гг использовано 25 000 доз вакцины) и найдет широкое применение в дальнейшем, как в России, так и в странах СНГ и дальнем зарубежье.

Вся технологическая документация и инструкция по применению утверждены соответствующими инстанциями. Серийное производство вакцины осуществляется на экспериментально-производственном предприятии Института полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН.

Способ получения вакцины против бешенства и чумы плотоядных, отличающийся тем, что антирабическую вакцину «Внуково 91», инактивированную УФ-лучами, и вакцину против чумы плотоядных «Вакчум» смешивают в соотношении 1:1,9 — 1,1: 2,0, после чего добавляют раствор желатозы до конечной концентрации 100,1% и 40%-ный раствор сорбита до конечной концентрации 50,1% и лиофилизируют.

источник