Современные методы диагностики бешенства

Недосеков В.В., Вишняков И.О., Груздев К.Н. ВНИИВВиМ, ВГНКИ

Одним из древнейших и опасных инфекционных заболеваний человечества является бешенство. Опасность, которую представляет бешенство для жизни людей и животных, к сожалению, не имеет тенденции к снижению.

Практическое значение этой болезни определяется широким распространением среди многих видов животных, высоким летальным исходом больных бешенством и отсутствием эффективных средств лечения.

Несмотря на то, что эпизоотии бешенства поддерживаются в настоящий период главным образом дикими животными, человеку угрожают прежде всего собаки и кошки. Поэтому вопросам диагностики заболевания собак уделяется пристальное внимание.

Современная и точная лабораторная диагностика бешенства, особенно экспресс-диагностика, остается актуальной для практической ветеринарной медицины.

Диагностику бешенства собак проводят как посмертно, так и прижизненно.

Быстрым и чувствительным методом диагностики бешенства собак является метод флуоресцирующих антител (МФА), основанный на микроскопическом исследовании в ультрафиолетовых лучах отпечатков, мазков и криоконсервированных срезов тканей, обработанных антирабическим глобулином конъюгированным с флуоресцеин изотиоционатом. Как альтернатива МФА, в полевых условиях может применяться гистохимический вариант иммуноферментного анализа, позволяющий идентифицировать специфический антиген как в разложившемся, так и консервированном материале, к тому же для учета результатов теста достаточно светового микроскопа.

Широкое распространение с целью диагностики бешенства получил «Сендвич» — вариант твердофазного иммуноферментного анализа, метод основан на сорбции антигена в разных разведениях на им-мобилизированные специфические глобулины с последующим выявлением антигена глобулинами конъюгированными с пероксидазой хрена. Кроме этого, в реакции используют как поли- так и моноклональные антитела, последним, несомненно, отдается большее предпочтение в связи с их специфичностью, авидностью, стабильностью и отсутствием неспецифических реакций.

Одним из наиболее точных тестов детекции рабического антигена является полимеразная цепная реакция. Данный метод позволяет диагностировать бешенство даже при наличии в материале хотя бы одного вириона. В основе теста лежит комплементарное достраивание РНК матрицы, осуществляемое in vitro с помощью фермента РНК-полимеразы. Однако полимеразная цепная реакция еще недостаточно разработана для рутинной диагностики бешенства и пока не нашла применения в лабораториях.

б) выделение вируса in vitro

Выделение вируса может быть необходимым для подтверждения результатов тестов по определению антигена и для более детальной характеристики изолятов. С этой целью широко используется культура клеток мышиной нейробластомы (Na C1300). Выделение вируса в культуре нейробластомы по крайней мере столь же эффективно в отношении выявления небольших количеств вируса бешенства, как и заражение мышей. Кроме того, при использовании этой культуры снижается время, требующееся для постановки диагноза, с 10-15 до 2 дней, устраняется необходимость в экспериментальных животных и значительно уменьшается стоимость исследований. Однако, несмотря на это, интрацеребральное заражение мышей по-прежнему остается важным методом лабораторной диагностики бешенства собак.

Важным аспектом диагностики заболевания является прижизненная диагностика, огромное значение для принятия решения о применении средств иммунопрофилактики имеет постановка диагноза как можно в более ранние сроки. Вирусный антиген может быть выявлен с помощью МФА в отпечатках роговицы или биоптатах кожи больных бешенством животных. Кроме этого, вирус может быть выделен из некоторых тканей и жидкостей организма, особенно из слюны и спинно-мозговой жидкости. Однако, если положительный результат исследования свидетельствует о заболевании бешенством, то отрицательный результат не исключает возможности заражения.

источник

Методы выявления антигенов. При бешенстве для экспресс-диагностики можно использовать методы флуоресцирующих антител (МФА), реакции преципитации (РП) в агаровом геле, методы иммуноферментного анализа (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для прижизненной диагностики бешенства у человека требуется несколько тестов.

Определение антител к антигенам вируса бешенства. Выявление антител в сыворотке крови или в цереброспинальной жидкости — важный метод диагностики. Серологическое исследование рабиес-специфических антител проводится в сыворотке крови для определения пред- и постэкспозиционной вакцинации и определения времени бустерной иммунизации с целью повышения иммунного ответа.

Выделение вируса. Для выделения и идентификации вируса используют метод биопробы на белых мышах. Исследуемый материал суспендируют в физиологическом растворе, содержащем антибиотики и эмбриональную сыворотку крупного рогатого скота. Суспензия вводится интрацеребрально белым мышам массой 5–6 г. Для доказательства развития инфекции за мышами ежедневно наблюдают до 30-го дня после инокуляции. Мыши, у которых за этот период развивается заболевание, немедленно подвергаются эвтаназии, и ткани мозга исследуются методом прямой МФА.

Преимущество данного подхода состоит в возможности определить малые количества вируса бешенства в материале. Недостаток метода — необходимость многодневного (7–18 суток) ожидания между инокуляцией и проявлением первых признаков заболевания. Для сокращения инкубационного периода применяют мышей-сосунков. Для экспресс-диагностики можно использовать мышей в возрасте менее 3 дней: у мышей, забитых через 3 дня, уже выявляется антиген вируса в мозге, который можно выявить методом МФА.

Такой метод выделения вируса практикуется в качестве подтверждающего диагностического теста при отрицательных результатах по выявлению антигена и телец Бабеша – Негри и в случае укуса человека подозрительным на бешенство животным. Он обеспечивает надлежащую чувствительность и специфичность, т. е. расценивается на уровне диагностической значимости метода прямой иммунофлуоресценции. Кроме того, этот метод является основным для идентификации вариантов вируса и перспективен для разработки диагностических реагентов.

Выделение и идентификация вируса на культуре клеток. Основным недостатком выделения вируса при инфицировании лабораторных животных является длительность метода. Избежать этого можно при использовании культур клеток. Обычно для этих целей используют культуру клеток нейробластомы мышей, если нужно исследовать ткани головного мозга. Мозг суспендируют в культуральной питательной среде, суспензию наносят на монослой культуры клеток и инкубируют от одного до нескольких дней.

Чувствительность данной культуры к вирусу можно повысить обработкой ее ДЕАЕ декстраном. Монослой клеток затем отмывают, фиксируют на холоде ацетоном или смесью формалина с метанолом и исследуют методом иммунофлюоресценции. Если животное было инфицировано вирусом бешенства, то в монослое культуры клеток выявляются цитоплазматические включения антигена вируса бешенства.

Показано, что на клетках мышиной нейробластомы линии Na C1 300 в сочетании с МФА антиген вируса бешенства можно выявить через 2 дня. Чувствительность метода сравнима с методом изоляции вируса на мышах.

Хотя вирус бешенства обладает облигатной нейропатогенностью in vivo, он способен инфицировать широкий круг клеток-хозяев in vitro, что можно использовать для исследования других тканей и органов на наличие вируса бешенства. Установлено, что вирус бешенства размножается в клетках ВНК-21 и Vero, в первичных клетках куриных эмбрионов или почек хомяка. Показано, что адсорбция вируса и внедрение его в клетку происходят в течение 7 часов. Через 24–48 часов внутри клетки образуются новые вирусные частицы, через 72 часов происходит почкование их из клеточной оболочки в межклеточное пространство.

Для экспресс-диагностики бешенства могут быть использованы:

а) метод МФА — для выявления антигена вируса бешенства в отпечатках роговицы или заднего отдела шеи больного, содержащего луковицы волос;
б) метод ПЦР — для выявления РНК вируса в биоптатах тканей, слюне, спинномозговой или слезной жидкости;
в) метод ИФА — для выявления специфических антител (антигена) у больных с типичным или атипичным течением.
г) метод биопробы — для выделения вируса на ранних этапах заболевания или для выявления антител в крови или спинномозговой жидкости на поздних стадиях заболевания. Для экспресс-диагностики используется комплексный метод (биопроба + МФА), заключающийся в заражении исследуемым материалом 2-дневных новорожденных мышей и исследования их мозга на 3–4-е сутки в МФА.

Выбор методов прижизненной диагностики в значительной мере зависит от стадии болезни: метод, основанный на выявлении антигенов, как правило, обладает высокой чувствительностью в конце инкубационного периода, в течение первых нескольких дней заболевания, в то время как вируснейтрализующие антитела обычно появляются в спинномозговой жидкости и сыворотке крови после 7-10 дней от начала болезни.

Реакция иммунофлюоресценции. Метод основан на использовании антител, связанных с красителем, например, флюоресцеинизотиоцианатом. РИФ широко применяется для выявления вирусных антигенов в материале больных и для быстрой диагностики.

Метод обладает наиболее высокой степенью чувствительности, он положен в основу экспресс-диагностики и позволяет обнаруживать вирусные антигены в течение нескольких часов

Основные достоинство МФА: быстрота выполнения, высокая специфичность (100%). Затрачиваемое время на диагностику заболевания с его помощью — менее одного дня. Применяются прямой и непрямой варианты МФА.

Прямая иммунофлуоресценция остается наиболее предпочитаемым методом диагностики бешенства. Предметные стекла, содержащие мазки-отпечатки тканей мозга, или стекла с монослоем культуры тканей фиксируют в ацетоне в течение 1–4 часов. Затем препараты высушивают и обрабатывают флуоресцирующими поликлональными антинуклеокапсидными антителами (иммунофлуоресцентный реагент).

Этот реагент представляет собой конъюгат, приготовленный из специфических поликлональных антител IgG класса к нуклеокапсидному антигену вируса и флуоресцеина изоцианата (ФИТЦ). Специфические антитела получают путем гипериммунизации животных (кроликов, хомяков или лошадей) смесью эпитопов нуклеокапсида вируса.

В настоящее время для этих целей все шире используют мышиные моноклональные антитела к нуклеокапсиду вируса бешенства. После 30-минутной инкубации при 37° С диагностические препараты многократно отмывают физиологическим раствором и дистиллированной водой.

Антитела, меченные ФИТЦ, фиксируются только в местах локализации вирусных нуклеопротеидных антигенов. Затем препараты высушивают на воздухе и исследуют методом световой микроскопии, используя в качестве источника света ксеноновую лампу и соответствующий фильтр.

При непрямом варианте антиген сначала соединяют с неокрашенной специфической иммунной сывороткой. Затем на образовавшиеся нефлуоресцирующие комплексы антиген-антитело воздействуют меченой флуорохромом иммунной сывороткой, содержащей антитела к белкам специфической сыворотки. Непрямой вариант МФА наряду с выявлением антигена позволяет количественно определять антитела в исследуемой сыворотке путем соответствующего ее разведения.

Меченые ФИТЦ образования в клетках разных тканей выявляются в виде желто-зеленого флуоресцентного окрашивания на темном фоне (в виде округлой или овальной формы внутрицитоплазматических включений).

Иммуноферментный анализ. Метод основан на принципе сорбции белков на твердой фазе с последующим образованием комплексов антиген-антитело, выявляемых субстрат-индикаторным раствором. Добавляемый в лунки антиген специфически связывается с антителами. На слой антигена наносят исследуемые сыворотки в нужных разведениях. При наличии в них специфических антител последние связываются с антигеном. Для выявления связывания на слой антител наносят иммуноглобулин против глобулинов сыворотки людей, коньюгированный с пероксидазой хрена. Количество сорбирующего коньюгата пропорционально количеству связавшихся с антигеном антител сывороток людей. Это можно определить, используя индикаторный раствор (ортофенилилендиамин + перекись водорода), компоненты которого в результате действия пероксидазы коньюгата окрашивают жидкость в коричнево-желтый цвет. При обследовании неясных случаев применение ИФА дополнительно к методам РП или РСК позволяет увеличить достоверность лабораторной диагностики бешенства, благодаря большой чувствительности этого метода. Метод позволяет обнаруживать инфекционные и дефектные частицы.

Для определения антирабических антител в процессе вакцинации можно применять непрямой метод ИФА, используя в качестве антигена очищенный вирус, а для определения антител класса IgG в человеческой сыворотке — А-белок стафилококка, связанный с пероксидазой хрена. Результаты ИФА сравнимы с полученными в тестах вирусной нейтрализации на мышах. Метод позволяет выявлять присутствие IgМ в начале процесса иммунизации.

Иммуноферментные методы — весьма перспективны для выявления нуклеокапсидного антигена вируса при посмертной диагностике в тканях головного мозга. В их числе, например, быстрый иммуноферментный метод диагностики бешенства, основанный на приготовлении плашек сенсибилизированных антителами IgG изотипа к нуклеокапсиду первого серотипа, разведенных в карбонатном буфере.

Материал для исследования гомогенезируют в буфере или культуральной среде, осветляют центрифугированием, вносят в лунки и инкубируют в плашках. Фиксированный специфическими антителами нуклеокапсидный антиген идентифицируют добавлением пероксидазного конъюгата с антинуклеокапсидными противорабическими антителами иной видоспецифичности и хромогенного субстрата. Чувствительность метода составляет 0,8–1,0 нг/мл.

Этим методом можно выявлять антигены вирусов различных серотипов. Применение конъюгатов нуклеокапсидспецифичных антител, меченых биотином, повышает чувствительность метода до 0,1–0,2 нг/мл.

Методом ИФА успешно выявляется антиген нуклеокапсида [139], но материал, даже разложившийся, не должен фиксироваться формалином.

Метод полимеразной цепной реакции. Для экспресс-диагностики вируса бешенства и идентификации лиссавирусов наиболее удобен метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод ПЦР — самый надежный и быстрый для выделения вирионной РНК из любых проб, содержащих вирус в низкой концентрации. С его помощью можно создать много копий РНК вируса. Этот метод используется для подтверждения результатов МФА и для определения вируса в слюне, луковицах волос заднего отдела шеи и головы.

ПЦР основана на принципе естественной репликации ДНК. Суть метода заключается в многократном повторении циклов синтеза (амплификации) вирусоспецифической последовательности ДНК с помощью термостабильной Taq ДНК-полимеразы и двух специфических затравок, так называемых праймеров.

Каждый цикл состоит из трех стадий с различным температурным режимом. В каждом цикле удваивается число копий синтезируемого участка. Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат в качестве матрицы для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации, что позволяет за 25–35 циклов наработать достаточное число копий выбранного участка ДНК для ее определения, как правило, с помощью электрофореза в агарозном геле.

Особенно высокая чувствительность ПЦР при использовании праймеров, комплементарных N-гену, когда удается выявлять РНК вируса в пробах, содержащих вирус в титре 10 МЛД50. Методом ПЦР можно выявлять РНК вируса даже в разложившемся патологическом материале.

В настоящее время разработаны и широко используются на практике подтверждающие (конфирматорные) тесты, такие как ПЦР в обратно-транскриптазном исполнении (ОТ-ПЦР). Метод ОТ-ПЦР — высокочувствительный и наиболее эффективный. РНК экстрагируется из тканей инфицированного вирусом органа, транскрибируется в кДНК, которая затем амплифицируется методом ПЦР. Для постановки ОТ-ПЦР необходимы праймеры, полученные к консервативным областям генома вируса бешенства. Обычно используются гены, кодирующие нуклеопротеин или N-белок.

Метод ПЦР высокоспецифичен и очень чувствителен. Является одним из наиболее точных тестов детекции рабического антигена, позволяет диагностировать бешенство даже при наличии в материале хотя бы одного вириона. В основе теста лежит комплементарное достраивание РНК-матрицы, осуществляемое in vitro с помощью фермента РНК-полимеразы. В последние годы ПЦР находит все более широкое применение для диагностики и мониторинга вирусных инфекций. Однако методика проведения сложна, дорогостояща и пока недостаточно унифицирована для рутинного применения.

Цитологические методы в настоящее время имеют ограниченное диагностическое значение, но при ряде инфекций по-прежнему должны применяться. Исследуются материалы аутопсии, биопсии, мазки, которые после соответствующей обработки окрашиваются и анализируются под микроскопом. При бешенстве — это выявление включений в цитоплазме клеток (тельца Бабеша – Негри).

Выделение вируса. Выделение вируса может быть необходимым для подтверждения результатов тестов по определению антигена и для более детальной характеристики изолятов. И хотя этот метод является одним из самых старых и трудоемких методов диагностики, сегодня выделение вируса с последующей идентификацией с помощью одного из современных методов (ИФА с моноклональными антителами или ПЦР) является наиболее достоверным методом диагностики, т. н. «золотой стандарт».

Результативность методов диагностики бешенства может варьировать в зависимости от ряда факторов (стадии болезни, сроков забора материала, качества полученных проб, условий их хранения, опытности персонала, качества реактивов и др.). Если положительный результат подтверждает бешенство, то отрицательный не всегда свидетельствует об отсутствии болезни. Поэтому при бешенстве эксперты ВОЗ рекомендуют использовать несколько тестов, особенно МФА в сочетании с биопробой на новорожденных (2–3 дневных) белых мышах.

Все работы с материалом, предположительно содержащим вирус бешенства, равно как и с животными, подозрительными на бешенство, должны проводиться с соблюдением мер личной безопасности. Медицинские работники и ветеринарные врачи должны работать в халатах, перчатках, масках.

По окончанию работы боксы обрабатывают 3% раствором перекиси водорода.

Флаконы, ампулы и инструменты, а также оставшиеся материалы, содержащие вирус бешенства, и всю посуду после работы обеззараживают автоклавированием в течение 1 часов при 1,5 атм (режим «убивки»).

Средства индивидуальной защиты обеззараживают кипячением или автоклавированием. Рабочую поверхность стола и руки обеззараживают дезраствором (0,5% раствор хлорамина).

источник

Бешенство — острая инфекционная болезнь, протекающая с тяжелым поражением нервной системы, как правило, с леталь­ным исходом. Восприимчивы человек и все млекопитающие жи­вотные.

Бешенство распространено повсеместно. Возбудителя инфек­ции передают собаки, кошки, дикие грызуны и хищники, а также кровососущие летучие мыши-вампиры.

Продолжительность инкубационного периода зависит от ме­ста и силы укуса, количества и вирулентности попавшего в рану вируса, резистентности покусанного животного. Инкубационный период длится от 1—3 нед до года и даже более.

Болезнь протекает остро. Клинические признаки ее в основ­ном одинаковы у всех животных, но наиболее типичны они у со­бак, у которых может наблюдаться как буйное, так и тихое (па­ралитическое) течение болезни. У крупного рогатого скота бе­шенство может протекать атипично (потеря аппетита, атония рубца, паралич глотки, слюнотечение). Стадии возбуждения мо­жет не быть.

Патологоанатомические изменения неспецифичны. У мясоедных (в основном у собак) в желудке можно обнаружить инородные предметы.

Вирус бешенства обладает выраженной нейропробазией. Про­никая с периферии (место укуса) по нервным стволам в централь­ную нервную систему центростремительно, он распространяется в организме центробежно по периферическим нервам и попадает в разные органы, включая слюнные железы.

Вирус относится к семейству Rhabdoviridae,родуLyssavirus. Вирионы имеют форму стержня с обрубленным концом. Вирион виру­са — РНК-содержащий со спиральным типом симметрии, имеет липопротеидную оболочку. Низкие температуры консервируют вирус. Температура 60 °С убивает его через 5—10 мин, солнечный свет — за 5—7 дней. Растворы формалина, фенола, соляной кислоты (5%-ные) инактивируют вирус за 5—10 мин.

Вирион вируса бешенства содержит гликопротеидный (наруж­ный) и нуклеокапсидный (внутренний) антигены. Гликопротеидный антиген индуцирует образование вируснейтрализующих анти­тел, а нуклеокапсидный — комплементсвязывающих и преципитирующих антител.

В организме вирус локализуется главным образом в централь­ной нервной системе, а также в слюнных железах и слюне.

Культи­вируется на мышах, кроликах, морских свинках и других живот­ных, а также в первичных культурах клеток (почки хомячка, эмбриона овец, телят и др.) и перевиваемых клетках. Размножение вируса в культурах клеток не всегда проявляется ЦПД. К вирусу бешенства после предваритель­ной адаптации восприимчивы и куриные эмбрионы. Вирус индуци­рует образование цитоплазматических телец-включений, которые чаще всего обнаруживают в клетках аммонова рога, мозжечка, коры головного мозга.

Источником инфекции являются больные животные. Они переда­ют вирус во время укуса. Плотоядные животные могут заражаться при поедании головного и спинного мозга погибших от бешенства животных. Доказана возможность заражения бешенством аэрогенным путем (в местах, где имеются летучие мыши). До 60-х годов основ­ным источником распространения бешенства были собаки и кошки, позднее лисицы, волки, корсаки и другие дикие животные.

Диагноз на бешенство ставят на основании эпизоотологических, клинических данных и результатов лабораторных исследований, име­ющих решающее значение.

При работе с больными животными и инфекционным мате­риалом необходимо строго соблюдать меры личной безопаснос­ти: надевать резиновые перчатки, халаты с нарукавниками, ре­зиновый или полиэтиленовый фартук, резиновые сапоги, защит­ные очки, защитную маску на лицо.

Вскрывать подозрительных на заболевание бешенством жи­вотных в полевых условиях запрещено.

Получение пат.материала. Для исследования на бешенство направляют в лабораторию свежие трупы мелких животных целиком, а от крупных и средних животных — голову с двумя первыми шейными позвонками. Трупы мелких животных перед отправкой на исследование обрабатывают инсектици­дами.

Патологический материал упаковывают в пластмассовые меш­ки, вкладывают в плотно закрывающиеся ящики с влагопоглощающей прокладкой, пропитанной дезинфектантом. Материал и сопроводительное письмо, в котором указаны отправитель и его адрес, вид животного, анамнестические данные и обоснование подозрений в заболевании животного бешенством, дата и подпись врача.

Лабораторная диагностика. Она включает: обнаружение вирус­ного антигена в РИФ и РДП, телец Бабеша-Негри и биопробы на белых мышах.

РИФ. Для данной реакции биопромышленность выпускает флуо­ресцирующий антирабический гамма-глобулин.

Методика постановки РИФ. На обезжиренных предметных стек­лах готовят тонкие отпечатки или мазки из различных отделов голов­ного мозга левой и правой стороны (аммонов рог, кора полушарий, мозжечок, продолговатый мозг). Готовят не менее двух препаратов каждого отдела мозга. Можно также исследовать спинной мозг, подчелюстные, слюнные железы. Для контроля делают препараты из мозга здорового животного (обычно белой мыши).

Препараты высушивают на воздухе, фиксируют в охлажденном ацетоне (минус 20 °С от 4 до 12 ч), высушивают на воз­духе наносят Флуоресцирующий гамма-глобулин, помещают во влаж­ную камеру при 37 °С на 25—30 мин, затем тщательно промывают физиологическим раствором или фосфатным буфером с рН 7,4, спо­ласкивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе, нано­сят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматривают под люминесцентным микроскопом.

В препаратах, содержащих антиген вируса бешенства наблюдаются разной величины и формы флуорес­цирующий желто-зеленым цветом гранулы в нейронах, но чаще вне клеток.

В контроле подобного свечения не должно быть, нервная ткань обычно светится тусклым сероватым или зеленоватым цветом. Интенсивность свечения оценивают в крестах.

Отрицатель­ным считают результат при отсутствии специфической флуоресцен­ции.

Материал от животных, вакцинированных против бешенства, нельзя исследовать в РИФ в течение 3 мес. после прививки, так как может быть флуоресценция антигена вакцинного вируса.

В РИФ не подлежат исследованию ткани, консервированные глицерином, формалином, спиртом и

т. д., а также материал, име­ющий признаки даже незначительного загнивания.

РДП в агаровом геле. Метод основан на свойстве ан­тител и антигенов диффундировать в агаровом геле и при встрече образовывать видимые визуально линии преципитации (комплекс антиген +антитело). Применяют для обнаружения антигена в мозге животных, павших от уличного вируса бешенства, или при экспери­ментальной инфекции (биопроба).

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ — конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

источник

По данным Роспотребнадзора, за январь-декабрь 2015 г. в Российской Федерации зарегистрировано 6 случаев инфицирования человека вирусом бешенства, что превышает показатели 2014 г. в два раза. Так же в стране зарегистрировано 3739 случаев заболеваемости животных, сообщает Центральная научно-методологическая ветеринарная лаборатория. Из них на долю диких животных, приходится 48,8%, собак и кошек – 37,9%, сельскохозяйственных животных – 12,4% эпизодов.

Полученные данные свидетельствуют о резком усугублении эпизоотической ситуации по бешенству, что заставляет обратить специалистов ветеринарной медицины усиленное внимание на данную проблему.

Наиболее действенным методом контроля бешенства среди животных является своевременная иммунопрофилактика и диагностика.

Возбудителем заболевания является вирус бешенства Rabies lyssavirus.

Family/ Семейство – Rhabdoviridae;

Species/ Вид — Rabies lyssavirus.

Методы лабораторной диагностики бешенства стандартизированы. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30-09-2013 г. № 1127-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 26075-2013 введен в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2015 г.

Настоящий стандарт распространяется на все виды млекопитающих животных и устанавливает следующие методы лабораторной диагностики бешенства: метод флуоресцирующих антител (МФА); метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной нейробластомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы — НГУК-1); биопроба на белых мышах; метод иммуноферментного анализа (ИФА); реакция диффузионной преципитации (РДП).

Для диагностики используются:

1. Метод флуоресцирующих антител. Выявление антигена вируса бешенства меченными флуоресцеинизотиоцианатом антирабическими антителами, с образованием характерных светящихся комплексов-включений, обнаруживаемых в поле зрения люминесцентного микроскопа.

Для выявления вирусного антигена в мазках-отпечатках мозга используют прямую и непрямую реакцию иммунофлюоресценции. Мазки фиксируют в холодном ацетоне в течение 8-10 ч при температуре 4° С и обрабатывают во влажной камере 30 мин. антирабический иммуноглобулин, меченым ФИТЦ, промывают фосфатным буфером, высушивают и исследуют в люминесцентном микроскопе. Антигены вируса наблюдается в виде зеленых гранул разной формы и величины. В случае отрицательного результата, требуется провести другие методы диагностики.

2. Метод выделения вируса в культуре клеток мышиной нейробластомы CCL-131. Основан на размножении вируса в культуре клеток и его идентификации методом флуоресцирующих антител.

Суспензированый пат. материал вносят в культуру клеток, оставляя лунки для контроля. Положительный контроль — суспензия мозга мыши со штаммом вируса бешенства CVS, отрицательный — суспензия мозга клинически здоровой мыши. Далее инкубируют во влажном CO₂ инкубаторе с содержанием 5 CO₂% при 37±1°С в течении 42-28ч. Высушивают, фиксируют в холодном ацетоне в течении 30 мин, вновь высушивают. Далее с добавлением ФАГ в рабочем разведении, помещают во влажную чашку Петри и инкубируют при 37±1°С в течении 30 мин. По окончании трехкратно промывают, погружая на 10 мин в сосуд с ФБР, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают. Наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматривают в люминесцентном микроскопе. Антиген вируса бешенства выявляется в цитоплазме культуры клеток в виде ярких зеленых гранул различной формы с четкими краями.

3. Метод биопробы. Выделение вируса бешенства на белых мышах путем введения им суспензии патологического материала с последующей идентификацией вируса методом флуоресцирующих антител.

Наиболее пригодными для заражения являются мыши-сосунки. Для постановки биопробы используют 15-20 животных. Заражение проводят под наркозом путем интрацеребрального введения 0,03 мл суспензии исследуемого материала. При наличии в исследуемом материале вируса бешенства у мышей возникает тремор мышц, параличи. В большинстве случаев животные погибают в течение пяти дней. Наличие вируса бешенства в зараженных и погибших мышах необходимо подтвердить с помощью прямой реакции иммунофлуоресценции или обнаружения телец Бабеша-Негри. Идентификацию обнаруженного вируса бешенства проводят также с помощью реакции нейтрализации на белых мышах.

4. Метод иммуноферментного анализа. (ELISA) Основан на специфическом взаимодействии вирусного антигена с антирабическим антителом, иммобилизованном на твердом носителе, с последующим выявлением связавшегося антигена с помощью второго, меченного ферментом, антитела, путем окрашивания продукта реакции хромогеном.

ИФА проводят в «сэндвич» варианте. На твердой фазе иммобилизуют гамма-глобулин. В лунки панелей вносят исследуемый образец, параллельно ставят положи­тельный контрольный образец и отрицательный контрольный образец в различ­ных разведениях. Инкубируют и отмывают. В лунки вносят антирабический пероксидазный коъюгат. После инкубации проводят отмывку. Вносят субстрат, инкубируют. Реакцию останавливают при достижении опти­мального окрашивания в лунках с положительным контролем. Отрицательный результат нуждается в подтверждении другими методами диагностики.

5. Реакция диффузионной преципитации. Метод, основанный на способности антител и вирусного антигена бешенства диффундировать в агаровом геле и при специфическом взаимодействии образовывать комплекс «антиген-антитело», наблюдаемый в виде линии преципитации.

Готовые разведения антирабической сыворотки вносят в приготовленные лунки в агаровом геле. Чашки Петри помещают в термостат при 37±1°С на 48 часов. Реакцию считают положительной при появлении одной или 2-3 линий преципитации любой интенсивности между лунками, содержащими суспензию мозга и антирабический гамма-гло­булин. Отрицательный результат подтверждается другими методами.

Принимая во внимание высокую опасность болезни, обусловленную полной летальностью, специалисту ветеринарной медицины нужно знать, что окончательный диагноз может быть поставлен только методами лабораторной диагностики. Поэтому трудно переоценить значимость вышеперечисленных методов для практической ветеринарной медицины.

Библиографический список

Гайсаров, М.С. Эпизоотологическая характеристика бешенства животных в Республике Башкортостан, профилактика и меры борьбы с ним [Текст] : автореферат дис. канд. биол. наук : 16.00.03 / Гайсаров М. С.; Башкирский ГАУ. — Уфа : [б. и.], 2009. с. 18-19

Гулюкин, А.М. Значимость современных методов лабораторной диагностики и идентификации возбудителя бешенства для иммунологического мониторинга данного зооноза [Текст] / А.М. Гулюкин // М.:Вопросы вирусологии № 3, 2014 г. — с. 5-10.

Масимов, Н.А. Инфекционные болезни собак и кошек. [Электронный ресурс] / Н.А. Масимов, С.И. Лебедько. — Электрон. дан. — СПб. : Лань, 2009. — 128 с. — Режим доступа: http://e.lanbook.com/book/256

Методы лабораторной диагностики бешенства. [Текст] : ГОСТ 26075-2013 — Введ. 2015-01-01. — М.: Госстандарт России, 2013. — 19с.

источник

Бешенство – инфекционный зооноз вирусной этиологии, характеризующийся преимущественным тяжелым поражением центральной нервной системы, угрожающими летальным исходом. Человек заражается бешенством при укусе животных. Распространяясь по нервным волокнам, вирус бешенства вначале повышает их возбудимость, а затем вызывает развитие параличей. Проникая в ткани спинного и головного мозга вирус вызывает грубые нарушения в работе ЦНС, клинически проявляющиеся различными фобиями, приступами агрессивного возбуждения, галлюцинаторным синдромом. Бешенство до сих пор остается неизлечимым заболеванием. По этой причине трудно переоценить значение профилактической антирабической вакцинации, проводимой пациенту в случае укуса животного.

Бешенство – инфекционный зооноз вирусной этиологии, характеризующийся преимущественным тяжелым поражением центральной нервной системы, угрожающими летальным исходом. Человек заражается бешенством при укусе животных.

Бешенство вызывает РНК-содержащий рабдовирус, имеющий пулевидную форму и обладающий двумя специфическими антигенами: растворимый AgS и поверхностный AgV&. В процессе репликации вирус способствует возникновению в нейронах специфических включений – эозинофильных телец Бабеша-Негри. Вирус бешенства довольно устойчив к охлаждению и замораживанию, но легко инактивируется при кипячении, воздействии ультрафиолетового излучения, а также дезинфекции различными химическими реагентами (лизол, хлорамин, карбоновая кислота, сулема и др.).

Резервуаром и источником бешенства являются плотоядные животные (собаки, волки, кошки, некоторые грызуны, лошади и скот). Животные выделяют вирус со слюной, контагиозный период начинается за 8-10 дней до развития клинических признаков. Больные люди не являются значимым источником инфекции. Бешенство передается парентерально, обычно во время укуса человека больным животным (слюна, содержащая возбудителя, попадает в ранку и вирус проникает в сосудистое русло). В настоящее время есть данные о возможности реализации аэрогенного, алиментарного и трансплацентарного пути заражения.

Люди обладают ограниченной естественной восприимчивостью к бешенству, вероятность развития инфекции в случае заражения зависит от локализации укуса и глубины повреждения и колеблется в пределах от 23% случаев при укусах конечностей (проксимальных отделов) до 90% в случае укуса в лицо и шею. В трети случаев заражение происходит при укусе диких животный, в остальных случаях виновниками поражения человека бешенством являются домашние животные и скот. В случае своевременного обращения за медицинской помощью и проведения профилактических мероприятий в полней мере бешенство у инфицированных лиц не развивается.

Вирус бешенства проникает в организм через поврежденную кожу и распространяется по волокнам нервных клеток, к которым имеет выраженную тропность. Кроме того, возможно распространение вируса по организму с током крови и лимфы. Основную роль в патогенезе заболевания играет способность вируса связывать рецепторы ацетилхолина нервных клеток и повышать рефлекторную возбудимость, а в последующем — вызывать параличи. Проникновение вируса в клетки головного и спинного мозга приводят к грубым органическим и функциональным нарушениям работы ЦНС. У больных развиваются кровоизлияния и отек головного мозга, некроз и дегенерация его ткани.

В патологический процесс вовлекаются клетки коры полушарий, мозжечка, зрительного бугра и подбугорной области, а также ядра черепно-мозговых нервов. Внутри нейронов головного мозга при микроскопии отмечаются эозинофильные образования (тельца Бабеша-Негри). Патологическое перерождение клеток ведет к функциональным расстройствам органов и систем ввиду нарушения иннервации. Из центральной нервной системы вирус распространяется в другие органы и ткани (легкие, почки, печень и железы внутренней секреции и др.). Попадание его в слюнные железы ведет к выделению возбудителя со слюной.

Инкубационный период бешенство может составлять от пары недель при локализации укуса на лице или шее до нескольких месяцев (1-3) при внедрении возбудителя в области конечностей. В редких случаях инкубационный период затягивался до года.

Бешенство протекает с последовательной сменой трех периодов. В начальном периоде (депрессии) отмечается постепенное изменение поведение больного. В редких случаях депрессии предшествует общее недомогание, субфебрилитет, боль в области ворот инфекции (как правило, уже зажившей к началу заболевания раны). Иногда (крайне редко) место внедрения возбудителя вновь воспаляется. Обычно в этом периоде клиника ограничивается проявлениями со стороны центральной нервной системы (головные боли, расстройства сна, потеря аппетита) и психики (апатия, подавленность, раздражительность, угнетенность и приступы страха). Иногда больные могут ощущать дискомфорт в груди (стеснение), страдать расстройством пищеварения (обычно запорами).

Разгар заболевания (стадия возбуждения) наступает на 2-3 день после появления первых признаков депрессии, характеризуется развитием различных фобий: боязни воды, воздуха, звуков и света. Гидрофобия – боязнь воды – мешает больным пить. Характерное поведение – при протягивании стакана с водой, больной с радостью его берет, но попытка выпить жидкость вызывает приступ парализующего страха, приостановку дыхания и больной бросает стакан. Однако не всегда бешенство сопровождается гидрофобией, что может затруднять диагностику. При прогрессировании заболевания больные страдают от сильной жажды, но ввиду сформировавшегося рефлекса даже вид и шум воды вызывают спазмы дыхательных мышц.

Аэрофобия характеризуется приступами удушья в связи с движением воздуха, при акустофобии и фотофобии такая реакция наблюдается на шум и яркий свет. Приступы удушья кратковременны (несколько секунд), их сопровождают спазмы и судороги мимической мускулатуры, зрачки расширены, больные возбуждены, испытывают панический ужас, кричат, откидывают голову назад. Наблюдается дрожание рук. Дыхание во время пароксизмов прерывистое, свистящее, вдохи – шумные. В дыхании задействована мускулатура плечевого пояса. В этом периоде больные пребывают в агрессивном возбужденном состоянии, много кричат, склонны к бессистемной агрессивной активности (мечутся, могут ударить или укусить). Характерна гиперсаливация.

С прогрессированием заболевания приступы возбуждения становятся все чаще. Отмечается потеря веса, избыточное потоотделение, возникают галлюцинации (слуховые, зрительные и обонятельные). Продолжительность периода возбуждения составляет 2-3 дня, реже удлиняется до 6 суток.

Терминальная стадия болезни – паралитическая. В тот период больные становятся апатичны, их движения ограничены, чувствительность снижена. Ввиду стихания фобических пароксизмов возникает ложное впечатление, что больному стало лучше, однако в это время быстро поднимается температура тела, развивается тахикардия и артериальная гипотензия, возникают параличи конечностей, а в дальнейшем и черепно-мозговых нервов. Поражение дыхательного и сосудодвигательного центра вызывает остановку сердечной деятельности и дыхания и смерть. Паралитический период может длиться от одного до трех дней.

Есть способы выделения вируса бешенства из ликвора и слюны, кроме того, существует возможность диагностики с помощью реакции флюоресцирующих антител на биоптатах дермы, отпечатках роговицы. Но ввиду трудоемкости и экономической нецелесообразности эти методики не применяются в широкой клинической практике.

В основном диагностику осуществляют на основании клинической картины и данных эпидемиологического анамнеза. К диагностическим методикам, имеющим прижизненный характер, также относят биопробу на лабораторных животных (новорожденных мышах). При заражении их выделенным из слюны, ликвора или слезной жидкости вирусом, мыши погибают через 6-7 дней. Гистологический анализ ткани головного мозга умершего больного позволяет окончательно подтвердить диагноз в случае выявления в клетках телец Бабеша-Негри.

В настоящее время бешенство является неизлечимым заболеванием, терапевтические мероприятия носят паллиативный характер и направлены на облегчение состояния пациента. Больные госпитализируются в затемненную шумоизолированную палату, им назначают симптоматические средства: снотворные и противосудорожные препараты, обезболивающие, транквилизаторы. Питание и регидратационные мероприятия осуществляют парентерально.

Сейчас идет активное опробование новых схем лечения с помощью специфических иммуноглобулинов, иммуномодуляторов, гипотермии головного мозга и методик интенсивной терапии. Однако до сих пор бешенство является смертельным заболеванием: летальный исход наступает в 100% случаев развития клинической симптоматики.

Профилактика бешенства в первую очередь направлена на снижение заболеваемости среди животных и ограничение вероятности укуса бродячими и дикими животными человека. Домашние животные в обязательном порядке подвергаются плановой вакцинации от бешенства, декретированные категории граждан (работники ветеринарных служб, собаколовы, охотники и т.д.) проходят иммунизацию антирабической вакциной (троекратное внутримышечное введение). Спустя год производится ревакцинация и в дальнейшем в случае сохранения высокого риска заражения, рекомендовано повторение иммунизации каждые три года.

В случае укуса животного обязательно производится комплекс мер, направленных на предотвращение бешенства: рана промывается медицинским спиртом, обрабатывается антисептиками, накладывается асептическая повязка, после чего следует немедленно обратиться в травматологический пункт (либо к хирургу или фельдшеру ФАП). В кратчайшие сроки проводится курс профилактической антирабической вакцинации (сухой инактивированной вакциной) и пассивной иммунизации (антирабический иммуноглобулин). Схема профилактических инъекций зависит от локализации укуса, глубины раны и степени загрязнения слюной.

источник

Гидрофобия, рабиес или бешенство – это название одной болезни, которая представляет собой вирусное заболевание чаще всего с длительным инкубационным периодом и неблагоприятным прогнозом. Остро протекающая болезнь заканчивается гибелью больного, хотя на сегодняшний день в мире существует несколько случаев успешного исцеления.

В древние времена считалось, что бешенство – это одержимость дьяволом, и потому название этого заболевания произошло от слова «бес». Что касается латыни, то со словом «rabies» наблюдается та же этимология.

Опасное заболевание провоцирует развитие воспаления головного мозга (энцефалита), поражается нервная система больного. Возбудитель относится к семейству рабдовирусов рода Lyssavirus. По своим размерам не превышает показатель в 150 нм. Имеет в своем составе РНК. Но возбудитель не слишком устойчив к внешней среде, он погибает при температуре от 56 градусов приблизительно за 13-16 минут, при кипячении – за 2-3 минуты. Рабдовирус чувствителен к этанолу (одноатомный спирт), к некоторым дезинфицирующим препаратам, к УФ-лучам. Вирус бешенства устойчив к антибактериальным препаратам, фенолу (гидроксибензол), а также к низким температурам. Заразиться вирусом может и человек, и любое теплокровное животное.

Попадая в организм человека или животного, вирус бешенства размножается непосредственно в клетках нервной системы. При помощи аксонов нейронов возбудитель с небольшой скоростью (примерно 3 мм за 60 секунд) достигает головного и спинного мозга. Далее развивается менингоэнцефалит. Поражая нервную систему, возбудитель провоцирует развитие воспалительных процессов, некротические деформации и дистрофические изменения. В итоге зараженный бешенством человек или теплокровное животное погибает из-за удушья, сердце останавливается.

Первые письменные научные материалы, связанные с бешенством, были описаны римским врачом в 1-ом веке нашей эры. Тогда Авл Корнелий Цельс называл болезнь водобоязнью, предупреждал о заражении через укусы собак и советовал в первые минуты после нападения больного животного прижигать поврежденные участки кожи, чтобы уничтожить возбудителя.

Летом 1885 года французский микробиолог и химик Л. Пастер смог создать вакцину от бешенства. Ее и сегодня применяют, но в сочетании с иммуноглобулином или сывороткой антирабического типа. Лекарство при помощи инъекции вводится вглубь раны, также обкалываются мягкие ткани вокруг пораженного участка.

Будет ли эффективным лекарство – все зависит от времени, то есть, через какой временной промежуток пострадавший обратился за врачебной помощью. Чем быстрее будет оказана первая помощь и введена вакцина, тем благоприятнее будет исход. Срочно введенная вакцина пострадавшему после укуса больного животного чаще всего позволяет спасти жизнь человеку.

Практически до конца 2004 года бешенство считалось исключительно смертельным заболеванием, если у больного проявлялись симптомы заражения. Именно в 2005 американским врачам благодаря инновационному лечебному методу удалось уничтожить вирус бешенства, который начал проявляться у пятнадцатилетней девочки. Далее подобный случай выздоровления был зафиксирован в Бразилии, и побороть болезнь с помощью этой же методики смог пятнадцатилетний мальчик. Так в 2008 году уже было насчитано более 5 случаев успешного выздоровления.

Сегодня бешенство по-прежнему остается одной из самых страшных и смертельноопасных инфекций, поражающих человечество. Эту болезнь легко можно поставить наряду с ВИЧ или столбняком.

Инкубационный период, симптомы, стадии развития болезни и у взрослых, и у детей практически одинаковые. Инфекция по тому же принципу проникает в организм человека, и поражает его нервную систему.

Стоит отметить лишь те факты, что дети более подвержены вирусу бешенства. Так среди всех укушенных больными животными людей заражаются инфекцией менее 35% пострадавших, но среди них большую часть занимают именно дети от 7 до 12 лет.

Бешенство, как заболевание инфекционной природы, у ребенка протекает тремя периодами, выделяют:

• продромальный;
• возбужденный;
• период появления параличей.

Первый период болезни у ребенка может характеризоваться болевыми ощущениями в зоне проникновения инфекции. Место укуса может покраснеть, кожа часто отекает, может чесаться или жечь. Начинаются головные боли, может тошнить, прослеживается слабость и недомогание.

Также в первые дни клинических проявлений бешенства может:

• увеличиться показатель температуры тела до 38 градусов;
• появиться рвота;
• прогрессировать психологические расстройства, так появляется ощущение тревоги и постоянных необоснованных переживаний, чувство страха.

Преимущественно больные этим вирусом дети на первых этапах развития болезни ведут себя отчужденно, замыкаются в себе, мало спят, отказываются даже от любимых блюд.

В конце первой стадии бешенства ребенок чрезмерно беспокойный, может диагностироваться учащенное сердцебиение, а также затрудненное дыхание.

Вторая, стадия бешенства у детей связана с боязнью воды. У больного может наблюдаться спазм глотки только при одном ее виде. Ребенок может швырнуть чашку с водой в сторону, кричать, махать руками, запрокидывать голову. Такие движения в момент припадка искажают лицо больного. Может появиться синюшность кожных покровов в области шеи и лица (из-за спазм мускулатуры). Зрачки глаз расширяются, веки широко открыты. Иногда такой приступ заканчивается летальным исходом, но чаще всего все же припадок длиться всего несколько секунд, после чего ребенку на первый взгляд становится лучше.

Далее спазмы могут появиться из-за разных раздражителей, даже громкого шума, яркого освещения или движения воздуха. В момент припадка ребенок не осознает, что делает, его сознание помрачено. Он способен брызгать слюной, ведь чаще всего глотнуть он ее не может из-за мышечного спазма в глотке.

Если терапия будет назначена неправильно, то больной ребенок может резко терять вес, начинается обезвоживание, черты лица могут заостряться. Часто появляются судороги конечностей, повышается температура тела. Как правило, один из таких припадков заканчивается остановкой дыхания и сердца. В редких случаях зараженный бешенством ребенок доживает до третьей стадии.

На третьей стадии бешенства боязнь воды уже не беспокоит, ребенок становится спокойным, вялым, впадает в депрессию. Сознание больного становится ясным, но такое улучшение состояния имеет лишь видимый поверхностный эффект. Начинаются параличи, затрагивающие нижние и верхние конечности. Температурные показатели тела растут мгновенно и останавливаются лишь на отметке 43 градуса. Давление в артериях снижено. Летальный исход на фоне паралича дыхательных центров и сердечно-сосудистой системы неизбежен.

Диагностируют бешенство у человека, а точнее у ребенка только медицинские специалисты. Самостоятельно ставить диагноз, и тем более приступать к лечению опасно.

При осмотре ребенка врач учитывает его настроение, возбудимость, двигательное беспокойство. Специалист медицинской сферы, который проводит диагностику состояния ребенка, должен знать обо всех укусах или каких-либо других контактах с дикими или домашними животными. Назначают лабораторные тесты с применением метода флюоресцирующих антител. Таким способом находят вирус и в организме мертвых людей, а также павших животных. Антиген могут обнаружить в отпечатках мозга и роговицы, а также слюнных железах. Для комплексной диагностики может быть рекомендован и гистологический анализ.

При диагностике бешенства у человека и в частности у ребенка врач должен исключить другие болезни, которые также могут спровоцировать развитие воспаления головного мозга. Тут следует выделить арбовирусную, герпетическую и энтеровирусную инфекции.

Эффективное лечение при бешенстве не разработано. Незначительных положительных результатов удается добиться благодаря комплексному действию лейкоцитарного интерферона и антирабического иммуноглобулина. Для облегчения состояния пациента назначают симптоматическую терапию. Ребенка определяют в специальную палату или изолированный бокс, где внешние раздражители в виде яркого света и громких звуков практически отсутствуют.

Нервное перевозбуждение приглушают лекарствами, в частности снотворными и болеутоляющими медикаментами. Врач может назначить терапию, направленную на предупреждение судорог. На третьей стадии бешенства больному назначают стимуляторы дыхательной и сердечной деятельности. Но все это лечение дает минимальный положительный эффект. Речь в данном случае, скорее всего, не идет об излечении, а лишь о продлении жизни пациента максимум на несколько месяцев.

Общепринятым мнением считается тот факт, что бешенство – это зоонозное заболевание. Заразиться человек может:

• Через укус животного: собаки, кошки, енота, лисы, белки и других теплокровных представителей городской и парковой фауны.
• При разделывании туши больного животного, при условии, что на руках человека есть повреждения кожных покровов.
• При пересадке тканей или органов больного человека. Это редкие случаи, но они известны. Анализы на бешенство при трансплантации не проводятся, а ведь заболевание может находиться в инкубационном периоде и никак себя не проявлять. Так в Китае человеку были пересажены зараженные вирусом бешенства почки ребенка, который умер от воспаления мозга якобы неизвестной природы. Известен случай заражения бешенством и после пересадки роговицы глаза.
• Воздушно-капельным путем. Такой способ заражения редкий, но вполне вероятный, например, в пещере, где обитает большое количество больных бешенством летучих мышей.

Эксперты говорят и еще об одном возможном пути заражения, который касается употребления в пищу молока и мяса больного животного. Но сегодня не зафиксирован ни один случай такого инфицирования, потому ни о какой доказательной базе речь не идет. Это всего лишь предположения.

Чаще всего болезнь развивается после укуса больного животного или после ослюнения им слизистых оболочек и поврежденных участков кожи. Самые страшные поражения, это когда укус был произведен в области шеи и лица, а также кистей верхних конечностей.

Больной зверь может быть заразным за 7-10 дней до появления первых симптомов бешенства. Особенно опасным становится животное в период активных симптоматических проявлений вирусного поражения. Большая часть случаев заражения бешенством регистрируется в теплое время года, в частности летом и ранней осенью.

Научные исследователи установили, что не все укусы больного животного приводят к заражению. По статистике заболевают мене 35% укушенных.

Не все больные бешенством животные проявляют агрессию к окружающим. К примеру, у кошек вирусная инфекция может протекать в спокойной форме. Домашний питомец или бродячая кошка может забиться в угол, под шкаф или забраться в какую-то нору, и сидеть там до самой смерти.

Распространяют вирус бешенства многие теплокровные животные.

• В американских штатах вирус поддерживает свое сохранение и распространение среди енотов и скунсов, не редки случаи заражения шакалов.
• В Индии, Австралии и Африке бешенство чаще всего поражает летучих мышей.
• В Шри-Ланке распространителями инфекционного заболевания являются куницы.

Информация о мелких грызунах и бешенстве изучена не досконально. Случаи передачи инфекции по такому звену не определены. Хотя существует предположение, что именно мыши и крысы являются естественными резервуарами для вируса, потому что именно они могут длительный промежуток времени существовать с инфекцией и переносить ее на дальние расстояния.

Вирус может передаться от больного человека к здоровому, но такие ситуации крайне редки, хотя еще в древние времена именно этого опасались больше всего.

В России заражаются бешенством, как от диких, так и от домашних животных. В этом случае можно выделить волков, лисиц, собак и кошек. Крысы, коровы, кони, свиньи болеют редко.

В 2005 году на территории Липецкой области было отмечено резкое увеличение случаев заражения животных бешенством (более 100 случаев). Особо массово распространялся вирус в этот период времени и в Московской области, а также Тульской и Брянской.

Летом 2009 года специальной службой, которая осуществляет ветеринарный и фитосанитарный контроль в стране, было заявлено о скором активном распространении вируса по России. И связаны такие предположения в первую очередь с тем, что спрос на мех лисицы существенно упал, а пахотные земли обрабатываются все реже, что приводит к активному росту популяции лис. Также в 2009 году был зафиксирован эпидемиологический рост в Подмосковье из-за увеличения количества бродячих собак.

Бешенство у человека или животного может встречаться на всех континентах, кроме Антарктиды. До сегодняшнего дня не было ни единого случая заболеваемости вирусом в Японии, Финляндии, Испании, Норвегии, Новой Зеландии и на Мальте.

Проблематика обострена в Азии и Африке. Каждый год в мире регистрируется более 50 тысяч случаев заражения бешенством.

Бешенство как вирусная инфекция в организме человека может проявляться по-разному, но врачи четко выделяют три последовательно сменяющихся периода.

Сразу после заражения человек не чувствует никаких симптомов бешенства, ведь инкубационный период может иметь разную продолжительность. В среднем он занимает 20-80 дней. Но если инфекция проникла через крупные раны в области шеи или головы, то первый продромальный период может начаться уже через 12 дней, например, после укуса дикого животного.

Медицине известны и довольно редкие случаи длительного инкубационного периода.

• Так у иммигранта, который прибыл в Америку из Лаоса, появились первые признаки бешенства только через 4 года. Как установили эксперты, вирус в его организме был завезен с региона, где жил до иммиграции пациент.
• Второй случай был связан с инкубационным периодом длиною в 6 лет. В этой истории иммигрант был родом из Филиппин.

Также зарегистрированы случаи, когда затянувшийся инкубационный период прерывался под воздействием внешнего раздражителя, после чего бешенство начинало стремительно развиваться. В данном случае можно выделить случай с падением с дерева (через 5 лет после укуса зараженного животного) и ударом электрическим током (через 1-1.5 года после заражения).

Вероятность появления бешенства даже после укуса больного животного может зависеть от различных факторов. Свою роль в данном случае играет и иммунная система организма, и тип заражения и даже кол-во вируса, который проник в организм. Также огромное значение имеет и место проникновения инфекции (место укуса). Опасными в данном случае можно считать область шеи и голову, а также кисти рук и гениталии, то есть те участки, где сосредоточено большое количество нервных окончаний.

Симптомы бешенства у человека первоначально начинают беспокоить на месте укуса. Даже если рана зажила, кожные покровы могут зудеть, иногда появляется покраснение и отечность. Пострадавший часто испытывает болевой симптом в области рубца. Человек, зараженный вирусом, плохо спит, чувствует общее недомогание, температура тела может увеличиваться до показателей в 38 градусов.

В продромальном периоде становятся заметными нарушения психического состояния больного:

• появляется ощущение беспричинной тревоги и тоски;
• увеличивается рефлекторная возбудимость.

Заразившийся вирусом бешенства человек может отказываться от еды, мучиться бессонницей, замыкаться в себе. Больного часто мучают кошмары, он ведет себя заторможено, жалуется на постоянные негативные мысли.

Продромальный период болезни занимает порядка 1-3 дней, в редких случаях этот он может затянуться до 7-8 дней. В конце этого периода возможны приступы беспокойства, сопровождающиеся неприятными ощущениями стеснения в грудной клетке или/и учащенным сердцебиением.

И у детей, и у взрослых период возбуждения при бешенстве чаще всего начинается с появления водобоязни. Гидрофобия быстро нарастает. И если в первые дни у больного могут появляться спазмы гортани только при употреблении воды, через некоторое время провоцировать приступ уже способны даже разговоры о ней.

Приступ в период возбуждения сопровождается не только спазмами гортани. Зараженный вирусом человек становится агрессивным, он может швырять чашку с водой, кричать, вытягивать дрожащие руки перед собой, запрокидывать голову, брызгать слюной и выворачивать шею. Глаза у больного широко открыты, кожные покровы на лице и шее становятся синюшными, вдох затруднен. На пике приступа возможен летальный исход из-за остановки дыхания и работы сердца.

Приступ, как правило, проходит через несколько секунд. Внешне состояние больного значительно улучшается. Последующие спазмы глотки могут начаться в любое время, и днем, и ночью. Спровоцировать приступ может не только вода, но и другие раздражители, например, резкий громкий звук, яркий свет и даже поток воздуха. Во время спазма состояние зараженного человека помрачено, он не понимает, что делает. Зрительные и слуховые галлюцинации часто становятся причиной агрессии, которая опасна для окружающих людей.

При отсутствии правильно подобранной терапии у больного бешенством быстро начинается обезвоживание организма, человек резко худеет. Увеличивается температурные показатели тела. Иногда появляются судороги нижних и верхних конечностей. Этот период бешенства в среднем длиться до 5 дней. Обычно именно при одном из таких приступов глотки больной умирает. Редко когда зараженному человеку удается дожить до третьей стадии бешенства.

Третья стадия бешенства – это период параличей. В это время больной уже перестает бояться воды, гидрофобия отступает. Появляется вялость, полная апатия. Развивается паралич нижних конечностей, лица, языка. Температура тела может вырасти до 43 градусов. Давление в артериях падает. Смерть больного наступает из-за паралича дыхательных центров, а также сердечно-сосудистой системы.

Бывают случаи, когда заболевание бешенство протекает без явных симптомов болезни. Может отсутствовать водобоязнь, не повышаться температура тела или, например, проявиться болезнь сразу параличами. Диагностика и симптоматическое лечение такой формы заболевания чаще всего затруднена. Иногда бывает так, что диагноз пациенту ставят уже после его смерти, в частности после вскрытия тела.

При диагностике заболевания врач сопоставит симптомы и эпидемиологические данные. Важна информация и о животном, укус которого мог послужить причиной заражения. Также медицинский специалист отметит наличие или отсутствие психических нарушений в поведении пациента.

Лабораторная диагностика проводится не всегда. Анализы необходимы лишь в тех случаях, когда врач сомневается в диагнозе. Может быть назначен метод обнаружения антигена вируса в отпечатках роговицы.

Врач в обязательном порядке постарается исключить другие болезни, которые также могут провоцировать развитие воспалительного процесса в мозге. Во внимание берут нейротропные и герпетические инфекции, а также энтеровирусные и арбовирусные поражения. Если у пациента прослеживается изолированное инфицирование, затрагивающее ствол мозга, и при этом сознание больного сохранятся, то диагностика бешенства значительно упрощается.

Если инфекция попала в организм человека, то шансы на жизнь будут зависеть от того, насколько он быстро обратиться за врачебной помощью. Медики отмечают тот факт, что существует узкое временное окошко, благодаря которому можно остановить инфекцию пока она не поразила всю центральную нервную систему. После контакта с больным (подозрение на бешенство) животным идти за помощью нужно срочно. При появлении первых признаков бешенства смерть больного – 100% всех случаев.

Рану, через которую возможно проникла инфекция (например, место укуса) обрабатывают в срочном порядке. Царапины, ссадины и другие повреждения кожи на которые могла попасть слюна животного, обильно промываются мыльным раствором. После этого – чистой водой. Ушивать рану или иссекать ее края запрещено.

Если в амбулаторию или травмпункт обращается пострадавший с подозрением на заражение бешенством, то после местной обработки ему вводят антирабический иммуноглобулин, который включает в свой состав антитела к вирусу, а также вакцину от бешенства. Такое лечение при помощи двух препаратов помогает организму человека противостоять вирусу, пока иммунитет не сможет самостоятельно производить антитела.

Активная и пассивная иммунизация имеет свои недостатки.

• Во-первых, стоит выделить, что вводится вакцина при помощи нескольких уколов.
• Во-вторых, таким способом нельзя защитить организм заранее.
• В-третьих, после такой иммунизации следует воздержаться от переохлаждений, стрессов, тепловых нагрузок и употребления алкоголя хотя бы в течение 5-6 месяцев.
• Также стоит отметить дороговизну иммуноглобулина.

В стационарном отделении больницы уже после первого обращения оставляют пострадавшего, если:

• он находится в тяжелом состоянии,
• был привит другими вакцинами на протяжении последних 50-60 дней;
• имеет хронические заболевания нервной системы;
• аллергик.

На сегодняшний день даже такое на первый взгляд мощное экстренное лечение при помощи антирабического иммуноглобулина дает минимальные положительные результаты. Если у больного диагностируются первые признаки бешенства, то терапия будет направлена на приглушение симптомов заболевания и облегчение состояния пациента.

Пациента помещают в специальный бокс или отдельную палату, благодаря чему можно оградить больного от внешних раздражающих факторов, в том числе яркого света, громких звуков.

Нервное возбуждение приглушают при помощи особенной медикаментозной терапии, которая включает снотворные средства, а также противосудорожные и болеутоляющие препараты. Назначаются лекарства, действие которых направлено на нормализацию водного баланса.

В период параличей лечащий врач может назначить медикаменты для стимуляции работы дыхательной и сердечно-сосудистой систем. Используют управляемое аппаратное дыхание, гипербарическую оксигенацию (терапия кислородом, проводимая в специальных барокамерах под повышенным давлением) и в некоторых случаях церебральную гипотермию (охлаждение мозга через наружные покровы). Но эти методы не дают шанс на полное излечение, они лишь продлевают жизнь больного, к тому же в самых удачных случаях всего на несколько месяцев.

К сожалению, сегодня не существует единого эффективного лечения бешенства, терапия не разработана. Но исследования ведутся постоянно, причем научными поисками вакцины занимаются многие страны мира, в том числе Китай, США, Индия.

В середине 2012 года ученые из Индии заявили о том, что они запустили исследовательский проект по разработке и изучению антирабической вакцины, включающей в свой состав моноклональные антитела. Уже доказано, что такой препарат безопасен для человеческого организма, но насколько он эффективен – не выяснено.

Генная инженерия соединенных американских штатов тоже радует открытиями. На 1 год позже индийских ученых (2013 год) они попробовали внедрить часть РНК вируса бешенства в PIV5, то есть в вирус парагриппа, для которого характерно поражение дыхательных путей у собак. Исследования такого рода дали свои положительные результаты. В 100% случаев подопытные мыши, зараженные вирусом, выживали при введении вакцины под кожу или на слизистые оболочки носа. Что касается перорального применения лекарства, то тут выживаемость опустилась до 50%.

Исследования ведутся постоянно, но эффективного лекарства от вируса бешенства нет. Именно поэтому во многих государствах, где от бешенства каждый год погибает большое количество людей, используют разнообразные способы защиты от смертельной инфекции.

В Австралии была создана детская компьютерная игра, пользователи которой могут вырастить идеальную собаку, лучшее животное деревни. Развлечение рассчитано на детей до 14-15 лет. В игре подробно рассказывается о смертельном заболевании и как правильно уберечь своего питомца от опасного вируса бешенства. Также игра содержит информацию о том, что нужно делать, если человека укусила собака или любое другое животное.

В одной из африканских стран, а точнее в Республике Танзания работает специальная система слежения за распространением бешенства, позволяющая доносить до сведения жителей страны важную информацию. Осуществляется информирование благодаря телефонной связи. Население, проживающее в эпидемиологических опасных районах, получает сообщения с информацией о срочной вакцинации. Уникальная система охватывает более 140 тыс. кв. км. и помогает десяти миллионам человек Танзании быть в курсе проблем.

Научные исследователи и инженеры генной индустрии постоянно работают над созданием эффективной вакцины от бешенства, но пока результаты не оправдывают ожидания. Когда-то давно и черная оспа была одной из самых страшных болезней, но человечество смогло остановить ее. Люди когда-нибудь смогут победить и бешенство.

Профилактика такого заболевания, как бешенство, состоит в борьбе с его распространением в животной среде. К методам борьбы относятся вакцинирование животных (не только диких и бездомных, но и домашних), карантин и прочие меры.

В случае укуса больным или неизвестным (бродячим, уличным, диким) животным нужно быстро провести специальную обработку пораженной области. Чем скорее рану и любое повреждение (даже царапину) обработает специалист, тем лучше. Место нанесения укуса следует промыть большим количеством воды с использованием мыла. В случае показания пострадавшему глубоко в рану и в близлежащие мягкие ткани вводится прививка от бешенства – антирабический препарат (иммуноглобулин). Рана обрабатывается, после чего сразу же проводится соответствующее лечение. Его суть заключается в вакцинации (иммунизации) специальной антирабической вакциной с целью предупредить развитие заболевания. Вакцинирование производится строго в соответствии с определенным графиком, который составляется врачом исходя из особенностей вакцины.

Вакцина от бешенства была впервые разработана в 1881 году французским химиком и микробиологом Луи Пастером, который в ходе своих исследований в сфере иммунологии, получил препарат в результате многоразового прививания вируса бешенства кролям. Четыре года спустя Пастер в первый раз применил свой препарат, введя его мальчику, которого покусала бешеная собака. Ребенок не заболел.

Современные вакцины в большинстве случаев вводятся пациенту 6 раз: в тот день, когда пострадавший обращается за медицинской помощью (нулевой день), потом по такой схеме: день 3, день 7, день 14, день 30 и день 90. В случаях, когда за покусавшим пациента животным есть возможность наблюдать и в результате выясняется, что животное здорово на протяжении 10 суток с момента инцидента, в дальнейшей иммунизации нет необходимости, и прививки прекращаются. Согласно инструкции, прилагаемой к вакцине российского производства, все время введения инъекций, а также в течение полугода после последней вакцинации запрещается употреблять напитки, содержащие алкоголь. Кроме того, следует исключить из рациона (или свести к минимуму) все продукты, которые могут спровоцировать появление у пациента аллергической реакции.

На сегодняшний день на территории России официально используется 6 зарегистрированных вакцин от заболевания бешенством, из которых одно наименование – индийского производства. А также 4 позиции антирабического иммуноглобулина, из них – 1 наименование китайского производства, 1 – украинского. В большинстве случаев иммунизация пациентов проводится концентрированной культуральной антирабической вакциной, или КОКАВ. Ее изготавливают два предприятия – НПО «Иммунопрепарат» и ИПВЭ имени Чумакова РАМН.

Если человека укусило животное, следует как можно скорее обратиться за квалифицированной помощью в любой травмпункт, поскольку эффективность профилактики бешенства посредством вакцинирования напрямую зависит от быстроты начала лечения: чем скорее приняты меры, тем успешнее результат.

Специалисту в травмпункте необходимо сообщить такую информацию:

• описание внешнего вида животного;
• характер его поведения во время инцидента;
• был ли на животном ошейник;
• при каких обстоятельствах произошел инцидент.

Врач обработает место укуса соответствующим образом, после чего распишет курс инъекций вакцины. Пострадавшего могут поместить в стационар, что показано в следующих случаях:

• если состояние здоровья пациента будет особо тяжелым;
• если пациент страдает какими-либо болезнями нервной системы;
• если у пациента имеются аллергии;
• в случае повторного вакцинирования (аналогичный инцидент уже имел место ранее);
• в случае беременности;
• если пострадавший за последние 2 месяца прививался любыми другими вакцинами.

На протяжении всего периода вакцинирования необходимо избегать стрессовых ситуаций и переутомления, а также любых резких температурных воздействий (перегревание, переохлаждение).

В рамках предупреждения бешенства особые требования предъявляются к лицам, занимающимся охотничьим промыслом. Охотникам настоятельно рекомендуется:

• пройти профилактический курс вакцинирования от бешенства;
• не разделывать туши животных, не снимать с них шкуры до того, как будут получены результаты исследования из ветлаборатории на предмет заражения убитого животного;
• не привлекать к охоте на зверей и птиц обученных собак, которые не привиты от бешенства;
• ежегодно в целях профилактики вакцинировать от бешенства не только собак и кошек, но даже декоративных мышей, если есть необходимость.

Немедленное введение антирабических препаратов показано в следующих случаях:

• При укусах, оцарапывании, ослюнении покрова кожи либо слизистых животными, которые или очевидно заражены бешенством, или ведут себя неадекватно и подозрительно, а также неизвестными животными, в том числе хищными птицами и летучими мышами.
• При нанесении ранений предметами, которые были загрязнены тканями или жидкостями бешеных животных либо животных, у которых заболевание подозревается (препарирование и разделка туш, снятие шкур и прочее).
• При укусах, нанесенных через одежду, когда она порвана либо проколота зубами, а также при укусах, нанесенных через вязаную и тому подобную одежду.
• В случае оцарапывания, ослюнения или укуса, нанесенных предположительно здоровыми (визуально) животными, которые за время наблюдения (10 дней) заболели, пропали либо погибли.
• При укусах, которые были нанесены полевыми животными-грызунами, обитающими на неблагополучных в плане бешенства территориях.
• В случае, когда ослюнение либо укус нанесен человеком, у которого наблюдается гидрофобия.

Помимо абсолютных показаний к вакцинированию имеется ряд условных, пренебрегать которыми нежелательно. Антирабические инъекции могут быть назначены в тех случаях, когда укус нанесен известными здоровыми домашними животными. За таким животным устанавливается 10-дневное наблюдение. Условный курс включает в себя 2 прививки антирабического препарата объемом от 2 до 2,5 мл каждая, которые вводятся в два места.

Что касается профилактического вакцинирования, то оно особо показано людям, занимающимся определенными видами деятельности. Это работники ветлабораторий, егери, лесники и охотники, работники служб по отлову собак, раздельщики мяса и так далее.

Курс вакцинации от бешенства прописывает хирург-травматолог, который специально подготовлен к оказанию населению полной антирабической помощи. Процедура иммунизации осуществляется в полном соответствии с рекомендациями и инструкциями по использованию антирабических средств. При этом учитываются такие факторы, как степень тяжести повреждения/раны, наличие аллергии, беременность и так далее, в зависимости от чего пациент лечится либо амбулаторно, либо стационарно.

У некоторых людей может проявиться побочная реакция на вводимую вакцину против бешенства. Такая реакция бывает местной или общей. В первом случае наблюдается изменение цвета, структуры, состояния покрова кожи в области введения инъекции (краснота, зуд, высыпания, уплотнения). Данные проявления аллергии достаточно быстро проходят после употребления симптоматических препаратов, например антигистаминных лекарств.

Во втором случае побочные реакции на вакцину от бешенства представляют более серьезную угрозу. К таковым относятся:

• Общее недомогание. У пациента поднимается температура, появляется слабость и вялость, начинает болеть голова.
• Неврологические проблемы (встречаются нечасто, однако весьма опасны). Нарушается чувствительность в руках и ногах, появляются вегетативные осложнения, парезы. Пациентов с подобными нарушениями следует лечить и наблюдать в стационаре. Проявления различных неврологических нарушений могут сохраняться на протяжении 3 месяцев.
• Генерализованные реакции, выраженные отеком Квинке. ​Они встречаются очень редко, но при этом угрожают жизни пациента. Вместе с тем, при грамотном лечении такие реакции способствуют более быстрой стабилизации состояния пациента.

Побочные осложнения, возникающие в результате введения вакцины, могут быть разными. Если больному выполнена инъекция исключительно инактивированным вирусом, реакция может быть одной, а при введении сочетания вакцина и АИГ – совершенно другой. Введение иммуноглобулина иногда бывает болезненным. Пациент ощущает боль в месте инъекции, но это считается нормальным побочным явлением, в том числе и на поздних сроках вакцинирования.

Для АИГ часто характерны такие осложнения, как местные аллергические проявления. Такие реакции обычно длятся не более двух суток с момента введения препарата. Более редкие осложнения – это анафилактический шок, который возникает моментально, а также сывороточная реакция общего характера, наблюдаемая обычно в период с 6-х до 9-х суток с момента прививки.

Таким образом, мероприятия по проведению предупреждения заболевания бешенством могут быть опасны и далеко не всегда проходят безболезненно. Однако такие меры необходимы, поскольку только вакцинация от бешенства, если она сделана своевременно, способна спасти человеку жизнь. Не стоит забывать, что бешенство – это смертельное заболевание.

источник