Компания «Удачный полёт» оказывает содействие в получении результата теста на наличие антител к бешенству.
Название документа
Особые условия
Содействие в получении ветеринарного свидетельства формы №1, №4
в зависимости от сложности ситуации
40 00 рублей на одно животное
Содействие в обмене ветеринарного свидетельства формы №1 на международный сертификат формы №5а
в зависимости от количества животных
от 6000 рублей
Содействие в оформлении ветеринарного паспорта
при перемещении за пределы РФ, только в связке с получением ветсвидетельства формы №1
25 00 рублей
Содействие в получении результатов теста на наличие антител к бешенству
в зависимости от срочности получения результатов
от 140 00 рублей
Евросертификат, сертификат на ввоз в другие страны
в страны, требующие данный сертификат
2000 рублей
Содействие в получении разрешения на ввоз животного в разные страны
в страны, требующие данное разрешение
Стоимость требует уточнения в зависимости от страны ввоза
Содействие в получении разрешения на вывоз и ввоз животных из / в Россию
требуется при перевозке CARGO
20 00 рублей
Здравствуйте дорогой читатель. В этой статье нам бы хотелось рассказать Вам подробнее, что такое тест на наличие антител к вирусу бешенства, в каких случая он требуется, когда и где его нужно сдавать, сколько стоит и иные подробности. Итак, обо всё по порядку:
1. Некоторые страны, и в особенности страны Ближнего Востока, имеют обязательное требование наличие данного анализа при ввозе собак и кошек в их страну. К этим странам относятся Южная Корея, ОАЭ, ЮАР, Малайзия, Израиль, Великобритания и прочие государства. Собственно говоря, для чего они это делают, если у всех ввозимых животных есть в наличии ветеринарные паспорта, в которых указано, что ввозимые кошки и собаки привиты от бешенства и пройден срок инкубации? Делают они потому, что наша страна входит, по их мнению, в ряд стран с эпидемиологически опасными регионами по бешенству. Правда тут резонен вопрос — почему другие государства, к примеру США и страны Европы, так не считаю? Ответ, дорогой читатель, мы предлагаем Вам додумать самостоятельно.
Правда, справедливости ради, стоит отметить, что есть страны (например Южная Корея), которые позволяют ввозить собак и кошек, если их возраст ещё не достиг положенного возраста для вакцинации против бешенства, равный 3-ём месяцем. Правда тут сразу возникает иная сложность уже в России, где сейчас уже невозможно получить ветеринарное свидетельство №1 с формулировкой «Не привит по возраст». Подробнее об этой теме мы писали в этой статье: Читать.
2. Когда же позволительно сдавать тест на наличие антител к бешенству? Ответ кроется в самом вопросе — когда в крови Вашей собаки или кошки уже сумели выработаться антитела к данной вирусной болезни и срок этот равен от 30-ти дней после самой проведённой вакцинации, а также если от даты сделанной прививки прошло не более 1-го года.
3. Анализ на наличие антител к бешенству считается успешным, если их наличие в крови животного не менее 0,05 МЕ/мл ( IU / ml ) . Если данный показатель меньше указанных цифр, то даже не стоит пытаться отправлять животное в страну импортёр с таким результатом. В противном случае Вашу собаку или кошку в лучшем случае вышлют из страны обратно, в менее лучшем случае животное привьют от бешенства ещё раз и посадят на карантин в 30-ть дней с выставлением, в конце прохождения инкубационного периода, весьма круглую сумму для оплаты услуг содержания животного на карантине. Ну и, при самом негативном сценарии, животное просто подлежит усыплению.
4. Где же можно сдать анализ на наличие антител к бешенству? К сожалению надо констатировать, что лабораторий, аккредитованных проводить подобный тест, совсем немного:
а) Федеральный центр охраны здоровья животных в г. Владимир;
б) Центр молекулярной диагностики ФГБУ «ВГНКИ» в г. Москва;
в) НИИ диагностики и профилактики болезней человека и животных в г. Москва.
5. Стоимость анализа на наличие антител к бешенству зависит от выбранной лаборатории, а также от срочности его выполнения. Так, для ориентира, на момент написания статьи (01/10/2016), сроки и стоимость в лаборатории ВГНКИ следующая:
а) Срок изготовления течении 2-ух недель — 5000 рублей;
б) Срок изготовления течении 3-ёх рабочих дней — 10 000 рублей.
Уважаемый читатель, если Вы проживаете далеко, от указанных выше городов, регионе, а также если просто нуждаетесь в содействии при получении результата теста на наличие в крови Вашей собаки или кошке антител к вирусу бешенства, то Вы можете обратиться к нам за помощью, воспользовавшись наиболее удобным для Вас способом связи в разделе КОНТАКТЫ
источник
Анализ на бешенство у собак подразумевает проведение специальных экспресс-тестов на наличие в крови специфических антирабических антител. Иногда его применяют в комплексной диагностике при подозрении на заражение домашних питомцев вирусом бешенства. Данное заболевание представляет угрозу для жизни животных, человека, поэтому заводчики собак должны иметь понятие о том, как проявляется данный недуг. Если есть подозрение на заражение, если питомец имел контакт с возможным бактерионосителем, нужно сразу отвезти питомца в ветлечебницу, для проведения лабораторной диагностики, без которой невозможно установить точный диагноз.
Бешенство (rabies) – остропротекающее заболевание теплокровных животных инфекционной этиологии, вызываемое вирусом, который поражает ЦНС, провоцируя серьезные нарушения в организме. К сожалению, эффективного лечения на данный момент не разработано, поэтому инфекция всегда заканчивается летальным исходом.
Возбудитель инфекционного недуга – РНК-содержащий вирус (рабдовирус). Поражает домашних и диких животных. Существует так называемый «природный» вирус и «лабораторный».
ВАЖНО! БЕШЕНСТВО ОТНОСЯТ К ЗООАНТРОПОЗООНОЗНЫМ БОЛЕЗНЯМ, ТО ЕСТЬ ИНФЕКЦИЯ ПЕРЕДАЕТСЯ ЧЕЛОВЕКУ. ВСПЫШКИ ИНФЕКЦИИ ОТМЕЧАЮТ ВЕЗДЕ. БОЛЕЗНЬ ИМЕЕТ ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫЙ ХАРАКТЕР.
Природным резервуаром рабдовируса являются инфицированные плотоядные хищники. Смертельно опасный вирус содержится в слюне инфицированных особей. Инфицирование происходит контактным путем, при укусах, проникновении слюны в ссадины, ранки на дерме.
Проникнув в организм, вирус по нервным путям мгновенно перемещается в головной, спинной мозг, слюнные железы, где в дальнейшем он размножается.
В слюне инфицированных животных рабдовирус появляется примерно за три-семь дней до момента проявления первых симптомов. При этом инфицированная особь уже является вирусуносителем, представляя реальную угрозу для человека, других домашних животных. Поэтому заражение бешенством может произойти даже в том случае, если вас или вашего питомца укусило внешне здоровое животное.
Инкубационный период длиться от 2-7-ми суток до нескольких недель. Интенсивность проявления симптоматики зависит от возраста, резистентности, иммунной защиты, вирулентности, концентрации рабдовируса в организме. Смертельно опасный недуг у животных протекает в тихой, буйной, реже в атипической формах.
У собак отмечают преимущественно буйную форму инфекции, продолжительность которой составляет от шести до десяти суток. Имеет три стадии проявлении:
- Продромальную. Срок протекания меланхолической стадии — не более двух суток. На этом этапе развития инфекции отмечают изменение поведенческих манер собаки. Животные сильно угнетены, выглядят подавленными, прячутся в темных укромных местах, неохотно идут на контакт, неадекватно реагируют на раздражители.
- Маниакальную (стадия возбуждения). Продолжительность течения не более трех-четырех суток. Больные животные проявляют беспричинную агрессию к своим собратьям, другим домашним питомцам, человеку, включая хозяина. Агрессия сменяется ласковым поведением. Питомец требует внимания, лижет руки, лицо человека. Больные питомцы поедают несъедобные предметы. Нередко собаки убегают из дома и могут пробежать без устали 20-30 км.
- Паралитическую (депрессивную). Для данной стадии, продолжительность которой составляет не более шести суток, характерны тяжелые сбои в функционировании ЦНС. Отмечают паралич глотки, гортани, мышечные судороги, спазмы. Нижняя челюсть отвисает. Отсутствует глотательный рефлекс. Из пасти постоянно течет слюна. Громкие звуки, шум воды вызывает сильнейшую панику. Координация движения нарушена. Питомец впадает в кому, погибает от истощения, нарушения дыхательной, сердечной функции.
Стоит отметить, что бешеная собака, независимо от формы и стадии заболевания кусает человека, животных не предупреждая о нападении лаем.
Для тихой формы болезни характерно отсутствие стадии возбуждения. Продолжительность — от двух до пяти суток. Характеризуется общим угнетением, меланхоличностью, отсутствием реакции на внешние раздражители. Животные гибнут из-за паралича мышечных структур тела, глотки. Болезнь всегда заканчивается летальным исходом.
Реже у собак отмечают атипичную форму болезни, которая проявляется нетипичными, нехарактерными для данной инфекции проявлениями. Протекает остро, подостро, реже хронически (два-три месяца). У животных отмечают изменение поведения, сбои в работе ЦНС, ЖКТ.
Заметив нехарактерное поведение своего домашнего любимца, изменение повадок, проявление агрессии, а также если собака имела контакт или была укушена бездомными, дикими животными, обязательно нужно отвезти питомца в ветлечебницу, проверить собаку на бешенство. Не стоит забывать, что симптоматика нарастает спонтанно в определенной последовательности.
При постановке предварительного диагноза должны быть учтены данные анамнеза, паталагоанатомические результаты, эпизоотологическая ситуация, симптомы. Проводится серия лабораторных, гистологических, микроскопических, бактрериологических исследований, экспресс-тесты.
Учитывая схожесть симптоматики с другими инфекциями, проводится дифференциальная диагностика (ИФА, ПЦР). Необходимо исключить болезнь Ауески, чуму плотоядных, энцефаломиелит.
Важно! Если есть подозрение на инфекцию, животное покусало человека, собаку помещают в специальные изолированные боксы и в течение десяти дней, пока не будут готовы результаты анализов, наблюдают за ее состоянием. Если диагноз подтвердился, к сожалению, проводится эвтаназия. Животных усыпляют, поскольку лечения от данной инфекции нет.
Точный диагноз удается установить только после смерти животных. Полученный патматериал исследуют различными методами.
Наиболее достоверный метод, который всегда подтверждает болезнь – микроскопические исследования биоматериала на наличие специфических включений в мозге – телец Бабеша-Негри. Расположеные в аммоновых рогах.
Для обнаружения специфического антигена в мозге применяют реакцию диффузной преципитации, иммунофлуоресцентный анализ отпечатка роговицы.
Иммунофлуоресцентный метод позволяет максимально быстро диагностировать наличие вируса в организме собак. Метод определяет вирусный антиген в 93-97% случаях.
Учитывая то, что вирус перемещается по нервным стволам, его крайне редко удается определить в кровеносном русле. Как правило, при подозрении на заражение для анализов исследуют спинномозговую жидкость.
Серологические исследования заключаются в проведении общего, биохимического анализа крови. Отмечают изменение лейкоцитарной формулы (лейкоцитоз), олигурию, альбуминурию, глюкозурию, увеличение концентрации моноцитов.
Протестировать своего питомца на бешенство, определить напряженность поствакцинального иммунитета позволит тест на наличие специфических антирабических антител в крови. Проводится данная процедура только в аккредитованных лабораториях, некоторых ветклиниках. Стоит отметить, что стоимость данного анализа довольно высока. Результаты после проведения процедуры будут готовы через 10-20 суток.
Сегодня проводится два вида тестов на антирабические антитела – RFFIT (тест быстрого торможения фокуса флюоресценции) и FAVN – тест флуоресцентных вируснейтрализующих антител, который определяет титр антител в МЕ/мл. Данные методики выполняют на живых культурах клеточных структур с добавлением в реакцию возбудителя инфекции. У собак берется 0.5- 1 мл сыворотки крови.
Тест проводят преимущественно в том случае, если вы хотите вывезти своего питомца заграницу. Многие страны ЕС запрещают ввозить на свою территорию не привитых от бешенства животных, а также собак, котов, у которых нет результатов по данному анализу.
Сдавать тест на антитела нужно тогда, когда в крови собаки выработаются антитела к данной инфекции. Специфический иммунитет после иммунизации формируется через месяц после прививки. С этого момента можно везти питомца в лабораторию для прохождения теста на антитела к бешенству. При этом после иммунизации, если возникает потребность в проведении данного теста, от даты прививки не должно пройти более года. Тест нужно сдать не позднее месяца до срока проведения ревакцинации.
Если титр антирабических антител составляет менее 0,50 МЕ/мл – собаку ревакцинируют. Через месяц сдается повторный анализ. На продуцирование защитных антител после иммунизации влияют некоторые факторы: порода, возраст, индивидуальные особенности организма, кратность антирабической иммунизации. Ветврачи рекомендуют проводить мониторинг титра антител у собак, кошек после вакцинации, даже в том случае, если не планируется выезд за границу.
Многие владельцы вывозят своих питомцев на дачу, на природу, в лес, на охоту. Не стоит забывать, что собаку могут покусать дикие звери, которые могут быть инфицированы или являются вирусоносителями.
Единственный способ защитить собаку от смертельно опасной инфекции – своевременно проведенная вакцинация.
В дальнейшем, в зависимости от выбранного препарата, раз год проводится ревакцинация. Некоторые вакцины формируют иммунную защиту сроком на три года. Оптимальную схему вакцинаций, ревакцинаций подберет ветврач.
источник
Бешенство собак — заболевание, вызываемое вирусом Rabies virus. Этот вирус поражает нервные клетки и передается со слюной при укусе и через поврежденную кожу и слизистые оболочки. Особая опасность заключается в том, что бешенство опасно для всех видов домашних и диких теплокровных животных, и человека. При появлении клинических признаков летальность составляет почти 100%. От момента попадания вируса в организм до первых симптомов может пройти от нескольких дней до года. При экстренной вакцинации сразу после укуса обычно болезнь не развивается. Клинически это заболевание у собак проявляется отказом от еды, водобоязнью, агрессией или наоборот излишне ласковым поведением, затем появляются судороги и животное погибает. От момента появления первых симптомов редко проходит более 10 дней.
В соответствии с Санитарными правилами СП 3.1.096-96 и Ветеринарными правилами ВП 13.3.1103-96:
- «5.1. Диагноз «бешенство» ставят на основании комплекса эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.
- 5.2. Для исследования на бешенство в лабораторию направляют свежий труп или голову мелких животных, а от крупных — голову или головной мозг.»
- Микроскопическое исследование головного мозга для выявления телец Бабеша- негри.
- Метод флюоресцирующих антител (МФА). Для этого исследуют головной мозг или роговицу. Особенность данного исследования в том, что можно провести исследование живого животного в течении всего нескольких часов. Для данного исследования животное надежно фиксируют и под местным анестетиком делают несколько мазков-отпечатков с роговицы. После чего обрабатывают стекла антирабической сывороткой меченной флюоресцирующей краской и исследуют в люминесцентном микроскопе. К сожалению, в Красноярске данный метод не проводится.
- Биологическая проба – заражение мышей.
В связи с тем, в РФ нередко выявляются случаи заражения бешенством домашних и диких животных, то для ввоза наших животных в некоторые страны, необходимо соблюдать особые условия. Стандартным является наличие ежегодной вакцинации у чипированного животного с обязательной отметкой в паспорте. Но для стран Евросоюза, Тайваня, Японии, ОАЭ, Израиля необходимо еще и тест на количество антирабических антител в крови животного. Зачем проводится это исследование? Антитела – это специфические белки в организме животного, которые уничтожают вирусы. Дело в том, что антитела начинают вырабатываться в организме животного сразу после вакцинации, течении трех недель они повышаются, а потом постепенно снижаются. Большинство импортных производителей вакцин от бешенства гарантируют достаточно высокий уровень антител в крови животного до трех лет при соблюдении инструкции. Напряженность иммунитета(количество антител) зависит от многих факторов: общего состояния здоровья животного, скорости иммунной реакции, качества вакцины и многих других. Обычно уровень антител в крови должен быть не менее 0,5 МЕ/мл. Перед переездом нужно внимательно ознакомиться с условиями въезда в страну заранее. Важно! Исследование на уровень антител может выполнять только лаборатория, прошедшая международную аккредитацию в референс центре AFSSA в Нанси, Франция.
Список аккредитованных лабораторий:
- г.Владимир, мкр. Юрьевец, ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)
- г.Москва, 2-ой Рощинский проезд, д.8, стр.5, этаж 1, комнаты 2,3,18.ООО «НовиСтем»
- Россия, Владимирская область,Петушинский район, ПГТ Вольгинский,ул. Старовского, д. 27ООО «Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины» («ИБВМ»)
- ФГБУ «ВГНКИ» г. Москва, Звенигородское щоссе 5
- г.Москва, ул. Гамалеи, д. 16, стр.2 НИИ профилактики болезней человека и животных
Для того чтобы пройти это исследование на бешенство, ваше животное должно быть:
- старше 4 месяцев
- чипировано
- привито от бешенства (не ранее чем 30 дней назад и 2 месяца до окончания срока действия вакцины)
Во многих странах при ввозе животных из России необходимо ни только паспорт с своевременно поставленной вакциной, но и анализ, подтверждающий высокий титр антител. Данный анализ можно сделать в указанных выше лабораториях России. В удобное для Вас время в нашей ветклинике необходимо сдать кровь для получения сыворотки, затем мы опечатаем пробу в вакуумную пробирку и готовим сопроводительное письмо с копией ветеринарного паспорта (заполненным на английском языке) в строго вертикальном положении. Хранится кровь либо в замороженном виде, либо при температуре +4С +8С в течение 9 суток. Исследование проводится от 3 дней до 2 недель.
Далее владелец осуществляет отправку по указанным адресам и в течении недели-месяца, лаборатория присылает ответ.
Полная информация о ценах в разделе прайс-лист.
ЗАПИСАТЬСЯ НА ПРИЕМ
источник
Экспресс-тест для выявления специфических антигенов вируса бешенства.
Бешенство (водобоязнь, гидрофобия) – острое вирусное заболевание, которое возникает у собаки после укуса больным животным. Бешенство у собак симптомы имеет особые.
Из-за болезни поражается нервная система: повышается возбудимость, появляется водобоязнь, паралич дыхательной мускулатуры, конечностей. Всегда исходом заболевания является смерть. Поэтому важно знать, как определить бешенство у собаки.
В наше время бешенство у собак очень распространено. В тех местах, где есть очаги бешенства животных, люди находятся также под угрозой. Как правило, распространяют бешенство, прежде всего, бродячие бездомные собаки. Сами же они заражаются преимущественно от диких животных.
Инкубационный период бешенства у собак (скрытый) длится 3-6 недель. У щенков он занимает 5-7 дней. Часто скрытый период длится долго, у отдельных взрослых особей собак достигает одного года.
Использование набора реагентов для иммунохроматографического выявления специфических антигенов вируса бешенства:
Материал для исследования.
• К вирусу восприимчивы многие виды животных (в том числе собаки, кошки, хорьки, енотовидные собаки, лисицы, летучие мыши, КРС и др.) и человек.
• Материал для исследования – слюна или 10%-ный гомогенат головного мозга. Для получения последнего смешивают 10% гомогенизированной мозговой ткани и 90% натрий-фосфатного буфера (PBS).
• Время хранения образцов при +15°С +25°С – 4 часа, при +2°С +8°С – 24 часа, более длительное хранение возможно при -20°С или ниже.
• Перед выполнением теста хранившиеся в холодильнике образцы должны быть помещены в комнатную температуру на 20 – 30 минут.
Процедура проведения анализа.
1. С помощью зонд-тампона соберите образец слюны или 10% гомогената головного мозга животного и внесите в пробирку с раствором для экстракции.
2. Вращая тампон в пробирке, дайте образцу перейти в раствор.
3. Извлеките тест-устройство из упаковки и поместите на хорошо освещённую горизонтальную поверхность.
4. С помощью пипетки внесите 4 капли (100 μl) жидкости из пробирки с образцом в окошко «S» (sample) тест – устройства. Не торопитесь. Вносите капли по одной, с интервалом в 2-3 секунды.
5. Прочитайте результат через 5 – 10 минут. По истечении 10 минут результаты считывать не следует.
Чтение результатов.
(+) Положительный. Видны две линии («С» — контрольная и
«Т» — тестовая). В образце обнаружены искомые антигены. Даже очень слабая интенсивность окраски Т-линии говорит о положительном результате.
(-) Отрицательный. Видна только линия «С» — контрольная. Искомые антигены в образце не обнаружены.
(*) Ошибка. Видна только Т-линия, либо не видно ни одной линии. Нарушены условия хранения или проведения теста. Проверьте срок годности набора, повторите тест заново, строго следуя инструкции.
Важные замечания.
• При интерпретации результатов теста должны учитываться все имеющиеся анамнестические и клинические данные.
• Иммунохроматографический анализ является скрининг-методом. Несмотря на его высокую чувствительность (96% против RT-PCR) и специфичность (98% против RT-PCR), для подтверждения диагноза бешенства требуются дополнительные исследования.
Особые указания.
• Не используйте повторно компоненты набора.
• Не смешивайте компоненты наборов разных серий.
• Не используйте набор по истечении срока годности.
• Использованные компоненты набора должны рассматриваться, как потенциально опасные в инфекционном отношении.
• Только для in-vitro диагностики.
• Только для ветеринарии.
• Набор хранится при температуре +2°С+30 °С.
• Если набор хранился в холодильнике, то перед применением его следует поместить на 20-30 минут в комнатную температуру.
источник
Выгуливая питомца, можно заразиться различными заболеваниями. Одно из таких – бешенство. При появлении малейших симптомов болезни, необходимо сдать анализ на бешенство у собак.
Бешенством называется заболевание, имеющее инфекционную этиологию и протекающее остро. Вызывается вирусом, поражающим центральную нервную систему, внутри организма происходят серьезные нарушения.
Возбудитель болезни – рабдовирус (РНК-содержащий вирус), поражающий всех животных. Он бывает искусственным и естественным
Инфекция способна передаваться от животного к человеку.
Заразиться можно от инфицированных хищников путем непосредственного контакта (после укуса, при попадании в открытую рану слюны). Слюна содержит в себе вирус. В организме он проходит по нервным путям в головной и спинной мозг, размножается в слюнных железах.
В слюне оказывается за неделю до возникновения первоначальных симптомов. В этот период животное является носителем рабдовируса и может заразить человека и других домашних питомцев.
Инкубационный (латентный) период может длиться несколько недель. На выраженность симптомов влияет возраст питомца, состояние иммунной системы, концентрация вируса. Болезнь как правило наблюдается в тихой, буйной или атипической форме.
Обычно наблюдается буйная форма, длится от шести до десяти дней. Выделяются несколько стадий данной формы.
- Продромальная (протекает двое суток) – изменяется поведение животного: оно выглядит угнетенным, подавленным, сидит в тихих уголках, избегает общения, неадекватно реагирует на раздражители.
- Маниакальная (три-четыре дня) – стадия возбуждения. Животное ведет себя агрессивно по отношению к животным и людям. Агрессивное поведение меняется на ласковое. Питомец бродяжничает, ест все подряд.
- Паралитическая (до шести дней) – депрессивная. Проявляются следующие симптомы: паралич гортани, спазмы, судороги. Собака не может глотать, слюна постоянно вытекает. Панические состояния при громких звуках, изменяется координация движения. Наступает паралич сначала задних, затем передних конечностей. Питомец оказывается в коме, из которой не выходит (гибнет от истощения, нарушения дыхания и сердечной деятельности).
Больная собака может укусить, не предупредив об этом лаем.
При тихой форме (длится не более пяти суток) отсутствует стадия возбуждения. Животное угнетено, не реагирует на внешние раздражители. Гибнет от паралича мышц тела, глотки.
Болезнь не лечится, обязательно наступает летальный исход.
Атипичная форма (очень редкая). Она характеризуется следующими признаками: изменяется поведение, нарушается работа центральной нервной системы и желудочно-кишечного тракта.
При появлении нехарактерных признаков у животных, рекомендуется срочно обратиться в ветеринарную клинику и проверить собаку на наличие вируса.
Перед тем как поставить первичный диагноз, учитывается история болезни, симптоматика, эпизоотологическая ситуация. Проводят несколько лабораторных и других анализов, экспресс анализ, биологический материал изучается под микроскопом. Проводится разграничивающая диагностика, с целью исключения инфекций со схожими симптомами.
Если человека укусила собака, ее изолируют на 10 дней. Пока готовятся анализы, за ней ведется наблюдение. При подтверждении заболевания, собаку усыпляют.
Точный диагноз можно поставить после смерти: получают патматериал и исследуют его при помощи различных методик.
Самый эффективный метод – изучение биоматериала под микроскопом на наличие телец Бабеша-Негри. Чтобы обнаружить специфический антиген в мозге, применяется реакция диффузной преципитации, иммунофлуоресцентный анализ отпечатка роговицы. Иммунофлуорисцентный метод способен обнаружить антиген в 93% случаев.
Из-за того, что вирус движется по нервным путям, его сложно обнаружить в крови. Обычно исследуется спинномозговая жидкость. Тем не менее проводят общий и биохимический анализ крови собаки, чтобы изучить изменение лейкоцитоза, олигурии и других показателей. Кровь берут из вен, которые расположены там же, где и у человека. Иногда берут анализ слюны животного.
Тест на наличие антирабических антител в крови можно сделать в аккредитованных лабораториях (реже в ветеринарных клиниках). Стоимость ее высокая, результаты готовы после двух-трех недель. Существует два вида теста RFFIT (быстрого торможения фокуса флюоресценции) и FAVN (определяет титр антител в МЕ/мл).
Обычно тест проводится при перевозе животного заграницу (некоторыми государствами запрещено завозить животных, которых не прививали от бешенства). Анализ на антитела к бешенству сдается только после выработки в крови антител к данной инфекции. Иммунитет к болезни развивается не раньше, чем через 30 дней после проведения вакцинации. По истечении этого срока питомец может сдавать тест на бешенство.
Если количество антирабических антител не достигает 0,50 МЕ/мл – животное ревакцинируют, спустя месяц сдают еще один анализ. На воспроизведение защитных антител оказывают влияние: порода, возраст питомца, индивидуальные особенности. Врачи рекомендуют проводить наблюдение за количеством антител после вакцинации.
Лечение от данной болезни не разработано. При подтверждении подозрений собаку усыпляют. Единственный выход – вакцинация. Если хозяин не сделал укол от бешенства – питомец гибнет от любого вируса, который влияет на его поведение.
Во время инкубационного периода болезнь не дает о себе знать. Тем не менее, как было сказано, собака уже заразна. После появления первых признаков болезни (боязнь воды, неспособность пить, агрессивное поведение), сроки жизни питомца составляют не более 11 дней, после чего умирает.
Люди заражаются через укус больного животного. Для человека характерны те же симптомы, что и для животных: судороги, паралич, боязнь воды, спазм глотки, смерть. После укуса первые признаки заболевания проявляются через неделю и до одного года (зависит от места поражения). Сразу после укуса (не позднее десятого дня) нужно обратиться к специалисту и сделать серию уколов (они помогут избежать летального исхода).
Первые действия при укусе собаки:
- промыть место укуса под сильной струей воды (можно под краном или воспользоваться бутылкой); постараться вымыть грязь и слюну;
- кожу тщательно вымыть хозяйственным мылом – не менее двух раз;
- наложить чистую сухую повязку;
- обратиться в травмпункт или поликлинику;
- в экстренных случаях (при больших и глубоких ранах) вызвать неотложную помощь.
Врач устанавливает график вакцинации, дает рекомендации относительно питания во время лечения.
Существует один способ профилактики от бешенства – своевременная вакцинация. Выбирается подходящий препарат, каждый год (при некоторых вакцинах раз в три года) проводят ревакцинацию (схему подбирает врач ветеринар. Цена прививки около 1400 рублей за отечественный препарат, 1600 за импортный.
Без прививки от бешенства запрещено вывозить питомца в некоторые страны, принимать участие в выставках. Прививка в некоторых государственных клиниках может проводиться бесплатно, она гипоаллергенная и безопасная.
Первый раз прививку нужно делать щенкам в возрасте трех-четырех месяцев, затем делается каждый год. До процедуры питомца обрабатывают от гельминтов и паразитов, она должна быть здорова. По желанию делают моноукол или комбинированным препаратом (от всех болезней).
Привитая собака тоже может заразится, если:
- вакцина была просроченная или неправильно хранилась;
- во время прививки животное было заразно, болезнь находилась в инкубационном периоде.
После прогулок с другими собаками (или поездок в лес) питомца нужно осмотреть на предмет укусов, ссадин и царапин.
Выгуливая питомца лучше не контактировать с незнакомыми и бродячими собаками. Особенно опасны стаи бездомных собак, которые могут не только покусать и заразить бешенством, но и нанести серьезный вред здоровью. Своевременная прививка от бешенства гарантирует здоровье и долгую жизнь четвероногому любимцу.
источник
Экспресс тест для определения вируса бешенства у животных, кошек, собак
по применению экспресс-теста для определения вируса бешенства Rabies Virus Ag
Одношаговый кассетный экспресс-тест для визуальной детекции антигена возбудителя бешенства животных Rabies Virus Ag в слюне или тканях мозга. Время исследования: 5-10 минут.
СБОР ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ И ПОДГОТОВКА
— 10 × фольгированных упаковок, каждая из которых содержит одну кассету, одну пипетку и осушитель
— 10 × пробирок с буферным раствором (0,7 мл каждая)
— Руководство по эксплуатации
1. Соберите аппликатором необходимые образцы.
2. Вставьте аппликатор с образцом в емкость с буфером и перемешайте.
3. Выньте кассету из защитной упаковки. Обозначьте тест-систему данными пациента или иным идентификатором и используйте как можно быстрее.
4. С помощью капельницы нанесите 3 капли (
150 мкл) буфера с образцом на зону образец «S» тест-системы, не торопясь, одну за другой. Держать пипетку вертикально. ВНИМАНИЕ: за один прием не вливать в лунку порцию пробы более чем из одной капли.
5. Подождите 5 – 10 минут и считайте результаты. Важно, чтобы перед считыванием результата фон был чистым. Необходимо считать результат не позднее 10 минут!
> Отрицательный: Только одна окрашенная полоса в контрольной зоне (C). Нет окрашенной полосы в тестовой зоне (T).
> Положительный: Вдобавок к розовой полосе в контрольной зоне (C) появляется отдельная розовая полоса в тестовой зоне (T).
> Непригодный результат: Полное отсутствие полос или отсутствие полосы в контрольной зоне (C). Непригодный результат может быть следствием неправильного проведения анализа или непригодности тест-системы.
Повторите анализ на новой тест-системе.
1. Результаты тестов должны учитываться врачом совместно со всеми доступными клиническими данными. Точный клинический диагноз может быть установлен только врачом на основании оценки всех имеющихся клинических и лабораторных данных.
2. Данная тест-система предназначена для определения антигена возбудителя бешенства животных Rabies Virus Ag в слюне или тканях мозга. Эта тест-система предназначена только для in vitro диагностики. Данный тест является качественным и не предназначен для количественного определения уровня или повышения количества антигена.
3. Данная тест-система позволяет выявить наличие антигена возбудителя бешенства животных Rabies Virus Ag в пробе и не может быть единственным основанием для постановки диагноза.
4. Если результаты теста отрицательные при наличии клинической симптоматики, рекомендуется использовать дополнительные методы исследования. Отрицательный результат не может в различные периоды исключить возможность возбудителя бешенства животных Rabies Virus Ag.
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ ТЕСТ-СИСТЕМЫ
Тест-систему необходимо хранить при температуре 2 — 30C в пределах указанного на упаковке срока годности. Следует избегать воздействия на тест-систему прямых солнечных лучей, сырости и тепла.
1. Только для in vitro диагностики.
2. Не используйте тест-систему с истекшим сроком годности.
3. Тест-система не может быть использована повторно.
4. Не всегда возможно сравнивать результаты от различных тест-систем.
5. Используйте новую пробирку и пипетку для забора каждой пробы, чтобы предотвратить смешивание образцов и обеспечить точность результатов.
Используйте меры предосторожности и помещайте все использованные материалы в контейнер для биологически опасных отходов.
источник
Протестировать на бешенство своих домашних питомцев, т.е. определить напряженность поствакцинального иммунитета против бешенства и получить сертификат Вы можете в АНО «Научно-исследовательский институт диагностики и профилактики болезней человека и животных».
Cправки по тел: (495)7265470, 7265471, +7(915)0507823 с 9.00 до 17.00,
E-mail: mkohnovich@rambler.ru
Пробы крови принимаются по адресам:
г. Москва, ул. Василисы Кожиной, 23, клиника «Мовет», кабинеты 5 и 9, ежедневно с 9.00 до 19.00,
Как узнать, есть ли защита у вашего питомца после вакцинации против бешенства?
По оценке ВОЗ, бешенство входит в пятёрку инфекционных болезней, общих для человека и животных, наносящих наибольший социальный и экономический ущерб. Ежегодно в мире после укусов животными, больными бешенством, погибает от 55000 до 70000 людей, половина из которых дети. Сохраняющаяся интенсивность эпизоотии бешенства природного типа, а также высокая концентрация бездомных, бродячих собак и кошек в городах привело к распространению бешенства и ухудшению ситуации на территории 65 субъектов РФ.
Бешенство – острое инфекционное заболевание теплокровных животных и человека, характеризующееся тяжелейшим поражением центральной нервной системы. Возбудителем болезни является РНК – содержащий вирус рода Lyssavirus, семейства Rhabdoviridae. Природным резервуаром бешенства служат плотоядные млекопитающие, а также летучие мыши [Прил. 1]. Основной путь заражения – при укусе больным бешенством животным (вирус выделяется со слюной).Особенностью рабической инфекции является инкубационный период, который может длиться от нескольких дней (у кошек) до 3-4 месяцев у собак, а у человека – до нескольких лет. Он зависит от штамма и дозы вируса, вида хозяина и пути проникновения в организм. Летальность составляет 100%.
Единственное надёжное средство специфической профилактики бешенства – иммунизация качественной инактивированной антирабической вакциной. Одним из показателей эффективности применяемых вакцин является уровень титра вируснейтрализующих антител у вакцинированных животных (уровень популяционного антирабического иммунитета). Так как всё-таки узнать: есть ли защита у вашего питомца после вакцинации против бешенства? Дело в том, что антирабический порог защиты равен 0,50 МЕ/мл. Если тир антител меньше 0,50 МЕ\мл, то животное необходимо повторно вакцинировать против бешенства и через 30 дней после вакцинации ещё раз проверить, повысился ли титр антител. Существуют факторы, которые влияют на выработку антител после вакцинации, а именно: порода, вид, возраст, кратность антирабической вакцинации. Поэтому мониторинг титра антител у животных после вакцинации против бешенства очень важен, даже если вы не уезжаете за границу, а просто едете на дачу со своим питомцем.
Если Вы собираетесь провести отпуск со своим животным за пределами РФ, то Вы должны знать правила въезда в ту или иную страну. Условно, по ситуации с бешенством, все страны можно разделить на 3 категории: 1) страны, неблагополучные по бешенству; 2) страны со стабильной ситуацией; 3) страны, свободные от бешенства. К странам, свободным от бешенства относятся Швеция, Мальта. Ирландия, Япония, Новая Зеландия, Австралия, Великобритания и другие островные государства. В этих странах не регистрируется бешенство 1-го генотипа. Для стран, свободных от бешенства, существуют определённые карантинные требования при транспортировке животных (так как правила очень часто меняются, лучше перед выездом узнать подробные требования для ввоза животных в посольстве той страны, куда вы отправляетесь).
В другие страны ЕС со стабильной ситуацией по бешенству при наличии стандартного пакета документов, антирабического сертификата карантинные санкции не применяются. С целью стандартизации правил транспортировки животных Европейский парламент 26 мая 2003 года принял указ, одним из обязательных пунктов которого является наличие антирабического сертификата у животных при въезде на территорию стран, свободных от бешенства, или страны со стабильной ситуацией по бешенству.
На сегодняшний день официально существует два метода оценки уровня антирабических антител, предписанных ВОЗ, — это RFFIT и FAVN.
RFFIT (Rapid Fluorescent Focus Inhibitiontest, Smithetal. 1973, Zalanetal., 1975) – это тест быстрого торможения фокуса флюоресценции.
FAVN (Fluorescent Antibody Virus Neutralisationtest, Cliqu et etal., 1996) – это тест флуоресцентных вируснейтрализующих антител. Этот метод позволяет максимально точно, количественно определить титр антирабических антител в МЕ/мл. Оба эти метода выполняются на живой культуре клеток с добавлением вируса бешенства в реакцию. Сами тесты трудоёмки и требуют дорогостоящего оборудования и квалифицированных специалистов.
Все серологические исследования по определению титра антирабических антител у всех видов млекопитающих можно сделать в нашей лаборатории, а также получить международный антирабический сертификат [Прил. 2]. Лаборатория АНО «НИИ ДПБ» ежегодно успешно проходит аккредитацию в референс-центре по бешенству ANSES (Франция ) с 2006 года и имеет право выдавать международные антирабические сертификаты (тест на антитела к бешенству).
Для проведения теста на наличие антител к вирусу бешенства необходимы:
• сыворотка крови в объёме 0,5 – 1 мл от вакцинированного животного не ранее, чем через 30 дней после вакцинации, и не позже, чем за 1 месяц до срока следующей рекомендованной даты антирабической вакцинации, кровь для получения сыворотки сдаётся натощак;
• копия международного ветеринарного паспорта животного (с написанием клички животного на английском языке) с обязательным указанием следующих данных: вид, порода, пол, возраст, микрочип, соответствующий стандарту ICO 11784 или 11785, дата вакцинации от бешенства (номер и серия вакцины), дата взятия крови;
• копия загранпаспорта владельца животного.
Если отбирают пробы от нескольких животных, принадлежащих одному владельцу, то пробирки маркируют, указывая кличку животного.
Контакты: (495)726-5471, (495)726-5470, моб.+7(915)050-7823.
источник
Существует ли анализ на бешенство у кошек и как своевременно распознать болезнь? Бешенство или водобоязнь – опасное заболевание, которое вызывает вирус Rabies, было известно еще древним восточным врачевателям. Прошли столетия, но до сих пор этот вирус продолжает держать в страхе всю планету. Защититься от заражения человеку помогает антирабическая вакцина, но она эффективна только когда недуг находится в инкубационном периоде. А как же быть с нашими мурлыкающими питомцами, которые не защищены от контактов с вирусоносителями? Какие способы диагностики бешенства существуют?
Кошка может заразиться бешенством от укуса зараженного дикого зверя или домашнего питомца, кошки или собаки; съев дохлую зараженную крысу или мышь. Проникнув в организм кошки, вирус достигает нервных волокон. Через них он устремляется к головному мозгу, где начнет размножаться. Постепенно вирус расходится по всему организму. Нарушения, которые вызывает бешенство, не обратимы. В результате функционирования вируса в организме нейроны головного мозга погибают, что приводит к смерти заразившегося.
Первые симптомы заболевания появляются после завершения инкубационного периода. Но кошка представляет угрозу для человека еще в самом начале заражения. Она может укусить или поцарапать, что приведет к еще одному заражению. Болезнь может иметь разные формы: буйную, тихую и атипичную. Характерными симптомами бешенства являются:
- обильное слюнотечение, которое приводит к намоканию шерсти;
- гидрофобия,
- отсутствие или извращение аппетита,
- отвисание челюсти, неровная походка,
- нападение животного на встречных людей, собак и кошек.
Определить бешенство у кота не просто. Если вы заметили за своим животным неадекватное поведение, признаки которого схожи с бешенством, нужно держаться от него подальше. Ведь теперь кошку нельзя будет остановить привычными способами, а для вас она будет представлять смертельную угрозу. Следующим шагом должен быть вызов ветеринарной службы, которая поможет изловить кота. Важно понимать, что достоверной прижизненной диагностики бешенства не существует.
После отлова животное помещают в отдельную клетку, где непрерывно наблюдают за его поведением. В случае подтверждения диагноза, кошку усыпляют. При анализе крови кошки на бешенство ткани мозга после ее смерти исследуют на наличие телец Бабеша-Негри. После появления первых симптомов бешенства, кошка обречена на смерть. Проводить лечение и изъятие крови у живого животного при подозрении на бешенство не станет ни один врач. Причина этому – слишком высокий риск заразиться.
Единственным методом профилактики бешенства является введение специальной антирабической вакцины, которая защитит кошку от заражения. Вакцинацию можно проводить котятам с трехмесячного возраста после того, как у них выпадут зубки. Взрослым котам и кошкам вакцину вводят ежегодно.
Прививают только здоровых животных. Беременным и кормящим кошкам вакцинироваться нельзя. Получить прививку от бешенства можно в любой ветеринарной клинике. Иммунитет после вакцинации сохраняется от 12 до 36 месяцев.
Анализ на антитела к бешенству необходим при вывозе животного в другую страну. Для исследования используется кровь кошки, с помощью которой можно определить привита она или нет. Положительный результат анализа крови говорит о наличии иммунитета у кошки перед бешенством. Средняя стоимость анализа на бешенство у кота составляет около 1000 рублей. Пройти экспресс-тест также можно в специализированных ветеринарных клиниках.
источник
Методы выявления антигенов. При бешенстве для экспресс-диагностики можно использовать методы флуоресцирующих антител (МФА), реакции преципитации (РП) в агаровом геле, методы иммуноферментного анализа (ИФА), полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для прижизненной диагностики бешенства у человека требуется несколько тестов.
Определение антител к антигенам вируса бешенства. Выявление антител в сыворотке крови или в цереброспинальной жидкости — важный метод диагностики. Серологическое исследование рабиес-специфических антител проводится в сыворотке крови для определения пред- и постэкспозиционной вакцинации и определения времени бустерной иммунизации с целью повышения иммунного ответа.
Выделение вируса. Для выделения и идентификации вируса используют метод биопробы на белых мышах. Исследуемый материал суспендируют в физиологическом растворе, содержащем антибиотики и эмбриональную сыворотку крупного рогатого скота. Суспензия вводится интрацеребрально белым мышам массой 5–6 г. Для доказательства развития инфекции за мышами ежедневно наблюдают до 30-го дня после инокуляции. Мыши, у которых за этот период развивается заболевание, немедленно подвергаются эвтаназии, и ткани мозга исследуются методом прямой МФА.
Преимущество данного подхода состоит в возможности определить малые количества вируса бешенства в материале. Недостаток метода — необходимость многодневного (7–18 суток) ожидания между инокуляцией и проявлением первых признаков заболевания. Для сокращения инкубационного периода применяют мышей-сосунков. Для экспресс-диагностики можно использовать мышей в возрасте менее 3 дней: у мышей, забитых через 3 дня, уже выявляется антиген вируса в мозге, который можно выявить методом МФА.
Такой метод выделения вируса практикуется в качестве подтверждающего диагностического теста при отрицательных результатах по выявлению антигена и телец Бабеша – Негри и в случае укуса человека подозрительным на бешенство животным. Он обеспечивает надлежащую чувствительность и специфичность, т. е. расценивается на уровне диагностической значимости метода прямой иммунофлуоресценции. Кроме того, этот метод является основным для идентификации вариантов вируса и перспективен для разработки диагностических реагентов.
Выделение и идентификация вируса на культуре клеток. Основным недостатком выделения вируса при инфицировании лабораторных животных является длительность метода. Избежать этого можно при использовании культур клеток. Обычно для этих целей используют культуру клеток нейробластомы мышей, если нужно исследовать ткани головного мозга. Мозг суспендируют в культуральной питательной среде, суспензию наносят на монослой культуры клеток и инкубируют от одного до нескольких дней.
Чувствительность данной культуры к вирусу можно повысить обработкой ее ДЕАЕ декстраном. Монослой клеток затем отмывают, фиксируют на холоде ацетоном или смесью формалина с метанолом и исследуют методом иммунофлюоресценции. Если животное было инфицировано вирусом бешенства, то в монослое культуры клеток выявляются цитоплазматические включения антигена вируса бешенства.
Показано, что на клетках мышиной нейробластомы линии Na C1 300 в сочетании с МФА антиген вируса бешенства можно выявить через 2 дня. Чувствительность метода сравнима с методом изоляции вируса на мышах.
Хотя вирус бешенства обладает облигатной нейропатогенностью in vivo, он способен инфицировать широкий круг клеток-хозяев in vitro, что можно использовать для исследования других тканей и органов на наличие вируса бешенства. Установлено, что вирус бешенства размножается в клетках ВНК-21 и Vero, в первичных клетках куриных эмбрионов или почек хомяка. Показано, что адсорбция вируса и внедрение его в клетку происходят в течение 7 часов. Через 24–48 часов внутри клетки образуются новые вирусные частицы, через 72 часов происходит почкование их из клеточной оболочки в межклеточное пространство.
Для экспресс-диагностики бешенства могут быть использованы:
а) метод МФА — для выявления антигена вируса бешенства в отпечатках роговицы или заднего отдела шеи больного, содержащего луковицы волос;
б) метод ПЦР — для выявления РНК вируса в биоптатах тканей, слюне, спинномозговой или слезной жидкости;
в) метод ИФА — для выявления специфических антител (антигена) у больных с типичным или атипичным течением.
г) метод биопробы — для выделения вируса на ранних этапах заболевания или для выявления антител в крови или спинномозговой жидкости на поздних стадиях заболевания. Для экспресс-диагностики используется комплексный метод (биопроба + МФА), заключающийся в заражении исследуемым материалом 2-дневных новорожденных мышей и исследования их мозга на 3–4-е сутки в МФА.
Выбор методов прижизненной диагностики в значительной мере зависит от стадии болезни: метод, основанный на выявлении антигенов, как правило, обладает высокой чувствительностью в конце инкубационного периода, в течение первых нескольких дней заболевания, в то время как вируснейтрализующие антитела обычно появляются в спинномозговой жидкости и сыворотке крови после 7-10 дней от начала болезни.
Реакция иммунофлюоресценции. Метод основан на использовании антител, связанных с красителем, например, флюоресцеинизотиоцианатом. РИФ широко применяется для выявления вирусных антигенов в материале больных и для быстрой диагностики.
Метод обладает наиболее высокой степенью чувствительности, он положен в основу экспресс-диагностики и позволяет обнаруживать вирусные антигены в течение нескольких часов
Основные достоинство МФА: быстрота выполнения, высокая специфичность (100%). Затрачиваемое время на диагностику заболевания с его помощью — менее одного дня. Применяются прямой и непрямой варианты МФА.
Прямая иммунофлуоресценция остается наиболее предпочитаемым методом диагностики бешенства. Предметные стекла, содержащие мазки-отпечатки тканей мозга, или стекла с монослоем культуры тканей фиксируют в ацетоне в течение 1–4 часов. Затем препараты высушивают и обрабатывают флуоресцирующими поликлональными антинуклеокапсидными антителами (иммунофлуоресцентный реагент).
Этот реагент представляет собой конъюгат, приготовленный из специфических поликлональных антител IgG класса к нуклеокапсидному антигену вируса и флуоресцеина изоцианата (ФИТЦ). Специфические антитела получают путем гипериммунизации животных (кроликов, хомяков или лошадей) смесью эпитопов нуклеокапсида вируса.
В настоящее время для этих целей все шире используют мышиные моноклональные антитела к нуклеокапсиду вируса бешенства. После 30-минутной инкубации при 37° С диагностические препараты многократно отмывают физиологическим раствором и дистиллированной водой.
Антитела, меченные ФИТЦ, фиксируются только в местах локализации вирусных нуклеопротеидных антигенов. Затем препараты высушивают на воздухе и исследуют методом световой микроскопии, используя в качестве источника света ксеноновую лампу и соответствующий фильтр.
При непрямом варианте антиген сначала соединяют с неокрашенной специфической иммунной сывороткой. Затем на образовавшиеся нефлуоресцирующие комплексы антиген-антитело воздействуют меченой флуорохромом иммунной сывороткой, содержащей антитела к белкам специфической сыворотки. Непрямой вариант МФА наряду с выявлением антигена позволяет количественно определять антитела в исследуемой сыворотке путем соответствующего ее разведения.
Меченые ФИТЦ образования в клетках разных тканей выявляются в виде желто-зеленого флуоресцентного окрашивания на темном фоне (в виде округлой или овальной формы внутрицитоплазматических включений).
Иммуноферментный анализ. Метод основан на принципе сорбции белков на твердой фазе с последующим образованием комплексов антиген-антитело, выявляемых субстрат-индикаторным раствором. Добавляемый в лунки антиген специфически связывается с антителами. На слой антигена наносят исследуемые сыворотки в нужных разведениях. При наличии в них специфических антител последние связываются с антигеном. Для выявления связывания на слой антител наносят иммуноглобулин против глобулинов сыворотки людей, коньюгированный с пероксидазой хрена. Количество сорбирующего коньюгата пропорционально количеству связавшихся с антигеном антител сывороток людей. Это можно определить, используя индикаторный раствор (ортофенилилендиамин + перекись водорода), компоненты которого в результате действия пероксидазы коньюгата окрашивают жидкость в коричнево-желтый цвет. При обследовании неясных случаев применение ИФА дополнительно к методам РП или РСК позволяет увеличить достоверность лабораторной диагностики бешенства, благодаря большой чувствительности этого метода. Метод позволяет обнаруживать инфекционные и дефектные частицы.
Для определения антирабических антител в процессе вакцинации можно применять непрямой метод ИФА, используя в качестве антигена очищенный вирус, а для определения антител класса IgG в человеческой сыворотке — А-белок стафилококка, связанный с пероксидазой хрена. Результаты ИФА сравнимы с полученными в тестах вирусной нейтрализации на мышах. Метод позволяет выявлять присутствие IgМ в начале процесса иммунизации.
Иммуноферментные методы — весьма перспективны для выявления нуклеокапсидного антигена вируса при посмертной диагностике в тканях головного мозга. В их числе, например, быстрый иммуноферментный метод диагностики бешенства, основанный на приготовлении плашек сенсибилизированных антителами IgG изотипа к нуклеокапсиду первого серотипа, разведенных в карбонатном буфере.
Материал для исследования гомогенезируют в буфере или культуральной среде, осветляют центрифугированием, вносят в лунки и инкубируют в плашках. Фиксированный специфическими антителами нуклеокапсидный антиген идентифицируют добавлением пероксидазного конъюгата с антинуклеокапсидными противорабическими антителами иной видоспецифичности и хромогенного субстрата. Чувствительность метода составляет 0,8–1,0 нг/мл.
Этим методом можно выявлять антигены вирусов различных серотипов. Применение конъюгатов нуклеокапсидспецифичных антител, меченых биотином, повышает чувствительность метода до 0,1–0,2 нг/мл.
Методом ИФА успешно выявляется антиген нуклеокапсида [139], но материал, даже разложившийся, не должен фиксироваться формалином.
Метод полимеразной цепной реакции. Для экспресс-диагностики вируса бешенства и идентификации лиссавирусов наиболее удобен метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод ПЦР — самый надежный и быстрый для выделения вирионной РНК из любых проб, содержащих вирус в низкой концентрации. С его помощью можно создать много копий РНК вируса. Этот метод используется для подтверждения результатов МФА и для определения вируса в слюне, луковицах волос заднего отдела шеи и головы.
ПЦР основана на принципе естественной репликации ДНК. Суть метода заключается в многократном повторении циклов синтеза (амплификации) вирусоспецифической последовательности ДНК с помощью термостабильной Taq ДНК-полимеразы и двух специфических затравок, так называемых праймеров.
Каждый цикл состоит из трех стадий с различным температурным режимом. В каждом цикле удваивается число копий синтезируемого участка. Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат в качестве матрицы для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации, что позволяет за 25–35 циклов наработать достаточное число копий выбранного участка ДНК для ее определения, как правило, с помощью электрофореза в агарозном геле.
Особенно высокая чувствительность ПЦР при использовании праймеров, комплементарных N-гену, когда удается выявлять РНК вируса в пробах, содержащих вирус в титре 10 МЛД50. Методом ПЦР можно выявлять РНК вируса даже в разложившемся патологическом материале.
В настоящее время разработаны и широко используются на практике подтверждающие (конфирматорные) тесты, такие как ПЦР в обратно-транскриптазном исполнении (ОТ-ПЦР). Метод ОТ-ПЦР — высокочувствительный и наиболее эффективный. РНК экстрагируется из тканей инфицированного вирусом органа, транскрибируется в кДНК, которая затем амплифицируется методом ПЦР. Для постановки ОТ-ПЦР необходимы праймеры, полученные к консервативным областям генома вируса бешенства. Обычно используются гены, кодирующие нуклеопротеин или N-белок.
Метод ПЦР высокоспецифичен и очень чувствителен. Является одним из наиболее точных тестов детекции рабического антигена, позволяет диагностировать бешенство даже при наличии в материале хотя бы одного вириона. В основе теста лежит комплементарное достраивание РНК-матрицы, осуществляемое in vitro с помощью фермента РНК-полимеразы. В последние годы ПЦР находит все более широкое применение для диагностики и мониторинга вирусных инфекций. Однако методика проведения сложна, дорогостояща и пока недостаточно унифицирована для рутинного применения.
Цитологические методы в настоящее время имеют ограниченное диагностическое значение, но при ряде инфекций по-прежнему должны применяться. Исследуются материалы аутопсии, биопсии, мазки, которые после соответствующей обработки окрашиваются и анализируются под микроскопом. При бешенстве — это выявление включений в цитоплазме клеток (тельца Бабеша – Негри).
Выделение вируса. Выделение вируса может быть необходимым для подтверждения результатов тестов по определению антигена и для более детальной характеристики изолятов. И хотя этот метод является одним из самых старых и трудоемких методов диагностики, сегодня выделение вируса с последующей идентификацией с помощью одного из современных методов (ИФА с моноклональными антителами или ПЦР) является наиболее достоверным методом диагностики, т. н. «золотой стандарт».
Результативность методов диагностики бешенства может варьировать в зависимости от ряда факторов (стадии болезни, сроков забора материала, качества полученных проб, условий их хранения, опытности персонала, качества реактивов и др.). Если положительный результат подтверждает бешенство, то отрицательный не всегда свидетельствует об отсутствии болезни. Поэтому при бешенстве эксперты ВОЗ рекомендуют использовать несколько тестов, особенно МФА в сочетании с биопробой на новорожденных (2–3 дневных) белых мышах.
Все работы с материалом, предположительно содержащим вирус бешенства, равно как и с животными, подозрительными на бешенство, должны проводиться с соблюдением мер личной безопасности. Медицинские работники и ветеринарные врачи должны работать в халатах, перчатках, масках.
По окончанию работы боксы обрабатывают 3% раствором перекиси водорода.
Флаконы, ампулы и инструменты, а также оставшиеся материалы, содержащие вирус бешенства, и всю посуду после работы обеззараживают автоклавированием в течение 1 часов при 1,5 атм (режим «убивки»).
Средства индивидуальной защиты обеззараживают кипячением или автоклавированием. Рабочую поверхность стола и руки обеззараживают дезраствором (0,5% раствор хлорамина).
источник