Вакцина от бешенства штамм внуково

Инактивированная вакцина для профилактики бешенства (штамм Внуково−32, выращенный в первичной культуре клеток почек сирийских хомяков), иммуногенная активность не менее 0,5 МЕ/мл. Стабилизаторы: желатин — в конечной концентрации до 1%, сахароза — в конечной концентрации до 7,5%, альбумин — в конечной концентрации 0,5%; консервант — канамицина моносульфат (150 мкг/мл). Порошок для приготовления инъекционного раствора в ампулах по 3 мл в комплекте с растворителем (дистиллированная вода) в ампулах по 3 мл, в упаковке 5 комплектов.

Формирует иммунитет к вирусу бешенства.

Показания препарата Рабивак-Внуково-32 Вакцина антирабическая культуральная инактивированная для иммунизации человека

Бешенство (лечебно-профилактическая и профилактическая иммунизация).

Для лечебно-профилактической иммунизации, проводимой по жизненным показаниям, противопоказаний нет. Для профилактической иммунизации: гиперчувствительность, острые инфекционные и общие заболевания, застойная сердечная недостаточность, хронические заболевания почек и эндокринной системы, коллагенозы, бронхиальная астма, беременность, лактация.

Отек в месте введения, краснота, зуд, увеличение регионарных лимфоузлов, недомогание, головная боль, тошнота, незначительное повышение температуры.

П/к, в клетчатку живота вводят немедленно после растворения (растворенная вакцина хранению не подлежит), в исключительных случаях вакцина может быть введена в подкожную клетчатку межлопаточной области). Дозировка и схема иммунизации зависят от показаний.

После введения необходимо наблюдение за привитыми в течение 30 мин (возможность развития аллергических реакций). Не пригоден к применению препарат в ампулах с нарушенной целостностью и маркировкой, при изменении физических свойств (мутность, интенсивное окрашивание, наличие неразбивающихся хлопьев), при истекшем сроке годности, неправильном хранении.

Условия хранения препарата Рабивак-Внуково-32 Вакцина антирабическая культуральная инактивированная для иммунизации человека

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности препарата Рабивак-Внуково-32 Вакцина антирабическая культуральная инактивированная для иммунизации человека

Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке.

Оставьте свой комментарий

Текущий индекс информационного спроса, ‰

Регистрационные удостоверения Рабивак-Внуково-32 Вакцина антирабическая культуральная инактивированная для иммунизации человека

Официальный сайт компании РЛС ® . Главная энциклопедия лекарств и товаров аптечного ассортимента российского интернета. Справочник лекарственных препаратов Rlsnet.ru предоставляет пользователям доступ к инструкциям, ценам и описаниям лекарственных средств, БАДов, медицинских изделий, медицинских приборов и других товаров. Фармакологический справочник включает информацию о составе и форме выпуска, фармакологическом действии, показаниях к применению, противопоказаниях, побочных действиях, взаимодействии лекарств, способе применения лекарственных препаратов, фармацевтических компаниях. Лекарственный справочник содержит цены на лекарства и товары фармацевтического рынка в Москве и других городах России.

Запрещена передача, копирование, распространение информации без разрешения ООО «РЛС-Патент».
При цитировании информационных материалов, опубликованных на страницах сайта www.rlsnet.ru, ссылка на источник информации обязательна.

© РЕГИСТР ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ РОССИИ ® РЛС ® , 2000-2019.

Не разрешается коммерческое использование материалов.

Информация предназначена для медицинских специалистов.

источник

Концентрированный вариант вакцины в настоящее время в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН изготовляется в экспериментальных условиях с использованием культуры первичных клеток ПСХ, зараженных более антигенным и глубокоаттенуированным вариантом штамма Внуково. Штамм апатогенен для кроликов при интрацеребральном введении. Полуфабрикат вакцины после инактивации УФЛ по обычной методике концентрируется и очищается.

Готовая вакцина представляет собой препарат, концентрированный по объему до 30 раз и очищенный в среднем в 6 раз, т. е. если в исходном вируссодержа-щем материале содержание белка по Лоури составляло 1175—1182 мкг/мл, то в готовой вакцине его менее 200 мкг/мл.

Серии концентрированной вакцины были в 12—52 раза иммуногеннее мозговой референс-вакцины ГИСК (методика NIH) и в 12—23 раза сильнее той же вакцины при определении иммуногенной активности с уличным вирусом бешенства (методика ИПВЭ АМН). Показана высокая антигенная активность концентрированной вакцины при иммунизации лабораторных животных, обезьян и добровольцев. При однократной иммунизации морских свинок (по 2 мл внутримышечно) на 2-й, 30-й и 40-й день от начала прививок концентрированная вакцина вызывала нарастание титров вируспейтрализующих антител до 1:3125, нативная же культуральная вакцина — от 1 : 52 до 1:920.

У кроликов, иммунизированных также однократно в дозе 5 мл внутримышечно, максимальные титры антител достигли 1:6250 на 14-й и 24-й день, тогда как нативная культуральная вакцина вызывала продукцию антител до титра 1:309. В опытах на обезьянах (Масаса rhesus) при сравнительном изучении антигенной активности концентрированной вакцины из штамма Внуково-32-107, концентрированной вакцины Института Мерье, серия 0312 (приготовлена на диплоидных клетках человека), а также производственной серии нативной культуральной антирабической вакцины выявлена более высокая специфическая активность первой вакцины.

Концентрированная вакцина из штамма Внуково-32 после двукратного введения с интервалом в 20 дней при внутримышечной аппликации вызывала продукцию антител до 1 : 1927 и 1:7679 на 36-й и 52-й день, при внутрикожной аппликации — 1:558 и 1:706, тогда как максимальные титры антител при иммунизации обезьян концентрированной вакциной Института Мерье были 1 :656 и 1:729 при внутримышечной аппликации и 1 :92 и 1:62 при внутрикожной аппликации. Нативная культуральная вакцина (серия 245) вызвала сероконверсию до титров 1:36 и 1:68 при внутримышечной апликации и 1:16 и 1:30—при внутрикожной применении соответственно, несмотря на то что эта вакцина вводилась в течение 6 дней.

Кроме того, в сравнительном опыте на 40 добровольцах подтверждена высокая антигенная активность концентрированной вакцины из штамма Внуково-32-107. При 2- и 3-кратном введении концентрированных вакцин внутримышечно в дозе 1,5 мл по схеме 0 и 20-й день или 0—1-й и 20-й день у некоторых прививаемых людей обнаружено чрезвычайно высокое накопление вируснейтрализующих антител — от 1:3273 до 1:6250 против 40 и 126 LD50 вируса бешенства (штамм CVS). По программе, утвержденной Комитетом вакцин и сывороток от 31 марта 1977 г., в настоящее время в Москве, Ленинграде, Владимире и других городах проводится изучение специфической активности и реактогенности 5 экспериментальных серий концентрированной и очищенной культуральной вакцины.

Обычный курс прививок состоит из 2—3 инъекций, при укусах опасной локализации предусмотрено введение антирабического гамма-глобулина (0,25 мг на 1 кг массы тела) и 4—5 доз концентрированной вакцины с интервалами. Предварительные данные иммунизации 80 человек показали хорошую переносимость и выраженную специфическую активность новой вакцины. Сокращенный курс прививок концентрированной вакциной вызывает такое же нарастание титра вирусиеитрализующих антител, как 15—27-дпевный курс лечения некоицеитрированиой культуральпой вакциной или вакциной типа Ферми.

С полным основанием можно надеяться, что будущее специфической профилактики бешенства связано с применением в практике здравоохранения концентрированной культуральной антирабической вакцины по резко сокращенной схеме. Исследования по очищенной и концентрированной вакцине выполнялись нами совместно с Л. Б. Эльбертом, Т. А. Аксеновой, Е. В. Клюевой, Л. Ф. Грибенча и другими сотрудниками лаборатории.

источник

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

ИНСТИТУТ ПОЛИОМИЕЛИТА И ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ им. М.П.ЧУМАКОВА

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСА БЕШЕНСТВА. ШТАММА ВНУКОВО-32 В КУЛЬТУРЕ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОК ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Работа выполнена в Уфимском научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова Государственного предприятия НПО «Иммунопрепарат».

Научный руководитель: кандидат медицинских наук, вед.н.сотр. Р.С.Шафеева

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор, чл.-корр. РАЕН ТА.Бектимиров

Ведущая организация: Институт вирусологии имени Д.И.Ивановского РАМН

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, ст.н.сотр., В.В.Хозинсюш; доктор биологических наук, профессор В.В.Гуненков

Защита состоится: » М » /¿Л1! 1997 г. в ^ час. на заседании диссертационного совета Д.001.27.01 при Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН по адресу: 142782, Московская область, Ленинский район, п/о Институт полиомиелита.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им.М.П.Чумакова РАМН.

Автореферат разослан » ^» ¡уСс^с-^^и^^ 1997 г

Ученый секретарь специализированного совета

кандидат биологических наук О.А.Медведкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуалыгость проблемы. Бешенство остается постоянной угрозой для человечества во многих частях света. Ежегодно регистрируется более 30000 случаев смерти от бешенства и 4 млн. человек требуется постэкспозиционное лечение более чем в 80 странах, где болезнь существует в наиболее опасном резервуаре инфекции среди собак (М.А. Селимов, 1965-1975; Vodopija Ivan, 1988; WHO, 1994).

По сводным данным ВОЗ в 1989 г. в мире отмечено 1670 вирусологически подтвержденных случаев бешенства у людей. За период с 1977 по 1990 г.т. в Европе зарегистрировано 108 случаев бешенства людей в 14 странах (Dtsch. Artebl., 1994). Заболеваемость этой инфекцией на 100 тыс. населения в России возросла с 1981 г. по 1991 г. в 2 раза. Ежегодно в стране прививается от бешенства около 200 тыс. человек (обращаемость составляет около 130 на 100 тыс. населения в год) (М.А.Величко, 1994).

Единственным методом предупреждения и лечения этого заболевания по-прежнему являются антирабическая вакцина и рабический иммуноглобулин. Поэтому необходимость усовершенствования и разработки новых эффективных и безопасных антирабических вакцин является наиболее реальным путем улучшения антирабической помощи.

Многочисленными исследованиями подтверждено, что в сравнении с мозговой вакциной и вакциной, приготовленной на куриных или утиных эмбрионах, культуральная вакцина на первичных клетках почек сирийского хомяка или диплоидных клетках человека является более безопасным препаратом (М.А.Селимов с соавт., 1965-1974; В.М.Морогова с соавт., 1980, 1981; P.Fenje, 1960; Y.Crick, F.Brown, 1970; S.Sehgal, 1992).

Культуральная вакцина на первичных клетках почек сирийского хомяка, впервые лицензированная в нашей стране для лечебной иммунизации человека, изготавливается с 1974 г. в ИПВЭ АМН СССР и с 1976 г. в НПО «Иммунопрепарат» (г.Уфа). Многолетними наблюдениями подтверждена ее высокая эффективность и хорошая переносимость при

профилактическом лечении многих тысяч людей, укушенных явно бешеными животными (М.А.Селимов, 1986).

Однако в свете последних практических достижений в области биотехнологии клеток животных, в качестве субстрата для изготовления противовирусных инактивированных вакцин приоритет отдается перевиваемым гетероплоидным клеткам. Их применение позволяет накапливать вируссодержащий материал с большим инфекционным титром и в больших количествах, а приготовленная вакцина, как правило, является более безопасной и имеет более низкую себестоимость (B.Y.Montagnon et al., 1981, 1983; R.E.Spier,1992; WHO, 1994).

Целью нашего исследования являлось изучение возможностей культивирования вируса бешенства штамма Внуково-32 в культуре перевиваемых клеток Vero для производства антирабической вакцины. Задачи исследования:

1. Подбор субстрата перевиваемой клеточной линии для успешной репродукции вируса бешенства штамма Внуково-32.

2. Адаптация штамма Внуково-32 к культуре гетероплоидных клеток зеленой африканской мартышки Vero.

3. Изучение репродукции штамма Внуково-32 при различных методах культивирования в культуре клеток Vero.

4. Поиск оптимальных условий суспензионного метода культивирования штамма Внуково-32 в культуре клеток на отечественных микроносителях.

5. Масштабирование процессов культивирования вируса бешенства, штамм Внуково-32, в культуре клеток Vero.

6. Получение экспериментальных серий антирабической вакцины в культуре клеток Vero на отечественных микроносителях.

Научная новизна и практическая значимость: — впервые изучена репродуктивная активность штамма Внуково-32 в перевиваемых клетках Vero, культивируемых различными методами (стационарным, роллерным, псевдосуспензионным);

впервые определены оптимальные параметры культивирования клеток Vero и вируса Внуково-32 на отечественных микроносителях;

впервые определены оптимальные условия крупномасштабного культивирования вируса бешенства Внуково-32 в псевдосуспензионной культуре;

— разработана технология получения антирабической вакцины из штамма Внуково-32 на псевдосуспензионной культуре клеток Vero.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены в докладах на конференции «Культивирование клеток животных и человека» в г.Пущшю. Результаты. исследований были доложены на. международном симпозиуме «Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине» (Уфа, 1995) и международной конференции «Настоящее и будущее вакцинологии» (Уфа, 1996).

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Уфимского НИИВС им.И.И.Мечникова. По материалам работы составлена и утверждена Инструкция по изготовлению и контролю препарата «Вакцина антирабическая культуральная концентрированная очищенная инактивированная сухая на перевиваемых клетках».

Дисссертация апробирована на заседании Ученого Совета Уфимского НИИ ВС им. И.И.Мечникова.

Публикация результатов исследований. Материалы исследований отражены в 9 публикациях. По способу получения вирусного материала подана заявка ГР № 94043360 и получено положительное решение о выдаче патента РФ от 22.01.96.

Объем и структура работы. Работа состоит из введения, обзора литературы (3 главы), описания материалов и методов (1 глава), раздела собственных исследований (4 главы), обсуждения полученных результатов и выводов. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, иллюстрирована 20 таблицами, 5 рисунками и 14 фотографиями. Библиографический указатель содержит 77 отечественных и 100 иностранных литературных источников.

КЛЕТКИ И СРЕДА. В работе использовали гетеро-плоидные перевиваемые клетки почек зеленой африканской мартышки Vero, полученные из Российской коллекции клеточных культур (Институт цитологии РАН, г. Санкт-Петербург) на уровне 153 пассажа. В качестве ростовой среды использовали среду Игла MEM с 7% инакгивированной гыворотки крупного рогатого скота (СКРС) и добавлением канамицина в концентрации ЮОмкг/мл. Культивирование клеток на микроносителях проводили при 37° С в силиконизи-рованных ферментерах фирмы Techne вместимостью Зл и Юл, а также в ферментерах вместимостью 50л, изготовленных в Институте медицинской биотехнологии МЗ СССР. Жизнеспособность клеток определяли методом включения трипанового синего (Р.Адамс, 1983).

МИКРОНОСИТЕЛИ. В качестве микроносителей использовали Цитолар-1 и Цитолар-2 производства НПО «Биолар» (г.Олайнс, Латвия). Микроносители применяли в концентрации 3-5 мг/мл.

ВИРУС. Использовали вакцинный штамм культурального вируса бешенства Внуково-32, применяемый в производстве культуральной антирабической вакцины на первичных клетках почек сирийского хомяка. Заражение клеток проводили в монослой и во взвесь. Контакт клеток с вирусом составлял 1,5 ч при (20 + 2)° С. Множественность инфекции составляла 0,001-0,1 ЛДзо/клетку. На 3-й день проводили смену ростовой среды на поддерживающую, в качестве которой использовали среду 199 с добавлением 0,1% человеческого сывороточного альбумина (ЧСА). Сборы вируссодержащей жидкости проводили каждый день. Перед сбором контролировали качество монослоя на микроносителях.

ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ. Работа проведена совместно с И.Б.Ишкильдиным в лаборатории физических методов исследований Уфимского НИИВС им. И.И.Мечникова. Препараты исследовали с помощью электронного микроскопа JEM-100B фирмы JEOL (Япония)

при инструментальном увеличении 20000-25000Х, просматривали не менее 5-6 ячеек предметной сетки. Для фотографирования объектов применяли фотопластинки для ядерных исследований типа «МК» и «MP».

ЖИВОТНЫЕ. Использовали в работе кроликов породы шиншилла массой 2,0-2,5 кг, беспородных белых мышей для титрования вирусного материала массой 6-8 г, контроля имму-ногенности и антигенности массой 10-12 г, безвредности -16 г. Животных получали из питомника лабораторных животных Уфимского НИИВС им, И.И.Мечникова.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНФЕКЦИОННОГО ТИТРА. Инфекционный титр вирусного материала на всех этапах работы проверяли путем интрацеребрального заражения мышей десятикратными разведениями вируса в объеме 0,03 мл. За мышами наблюдали 21 день. Гибель мышей учитывали с 5 дня. ЛД50 вируса определяли по Reed и Muench (1938).

Контроли экспериментальных серий проводили в соответствии с ФС на культуральную антирабическую вакцину инактивированную сухую и приказом Минздрава СССР N31 от 13.01.83 г.

Определение глюкозы проводили О-толуидиновым методом согласно приказу МЗ СССР № 290 от 11.04.72.

ИНАКТИВАЦИЯ ВИРУСА. Инактивацию концентрированного очищенного культурального вируса бешенства, после добавления к нему стабилизатора — 1% желатозы и 7,5% сахарозы, проводили на аппарате-иррадиаторе УФ-лучей конструкции Уфимского НИИВС им. И.И.Мечникова.

ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ. Изучение иммуногенной активности проводили на мышах по методу национальных институтов здоровья, США (Методы лабораторных исследований бешенства, Женева, 1975, с.275). В качестве референс-препарата использовали отраслевой стандартный образец, полученный из НИИСК медицинских биологических препаратов им. ЛЛ.Тарасевича, приготовленный на основе штамма Внуково-32 фиксированного вируса бешенства.

Оценку антигенных свойств вакцины осуществляли с помощью реакции нейтрализации (РН) на мышах по общепринятой методике (А.К.Шубладзе, С.Я.Гайдамович, 1954)

я реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с эритроцитарным диагностикумом, полученным в нашей таборатории Р.Г.Латыповой, Р.С.Шафеевой, В.М.Мороговой ;1980).

Антигенную активность вируссодержащего материала эпределяли с помощью иммуноферменной тест-системы для выявления антигена вируса бешенства, выпускаемой малым предприятием «Диагност» при Омском НИИ природноочаговых 1шфекш1Й.

Статистическую достоверность разницы между сравниваемыми результатами средними индексами имму-ногенности и титрами вируссодержащей жидкости проводили путем вычисления показателя t Стьюдента-Фишера. При оценке достоверности результатов пользовались руководством И.П.Ашмарина и А.А.Воробьева ( 1962 ).

Общеизвестно, что одним из нежелательных контаминатов вакцин, полученных в клеточных культурах, является сыворотка, добавляемая в ростовую, а иногда и в поддерживающую среду. Поэтому усилия разработчиков направлены либо на снижение концентрации сыворотки в среде, либо замены ее на ростовые факторы.

На первых этапах нашей работы мы провели исследования, направленные на снижение содержания сыворотки крупного рогатого скота (КРС) в среде культивирования клеток Vero. Для этого мы постепенно снижали содержание сыворотки КРС с 10% до 7%. Коэффициент прироста клеток при этом не изменился и составил 6,2-6,4. Кроме того, мы изучили возможность культивирования клеток Vero в среде с 1% сыворотки КРС с одновременным добавлением панкреатического гидролизата казеина-14 (ПГК-14) в комплексе с поливинилпирролидоном (ПВП). В результате 10 серийных пассажей, проведенных различными способами культивирования клеток Vero, индексы пролиферации клеток не изменились по сравнению с контролем. Использование ПГК-14 в комплексе с ПВП позволяет снизить содержание сыворотки КРС в питательной

среде в 10 раз, что дает большие преимущества в производстве иммунобиологических препаратов.

Пролиферация клеток Vero при культивировании в среде с 1% СКРС и ростовыми добавками

Способ культивирования клеток Индексы пролиферации клеток

Игла МЕМ+1%СКРС+ ПВП+ПГК-14+ХХ Игла МЕМ+10%СКРС

С целью удаления высокомолекулярных белков сыворотки, не связанных с ростовыми свойствами, мы провели фильтрацию ее через мембрану с порогом отсечения по молекулярной массе 300 кД и затем культивировали клетки Vero в среде с добавлением 7% фильтрата сыворотки КРС. Результаты, полученные после 10 серийных пассажей, свидетельствуют о возможности использования фильтрата сыворотки КРС с сохранением ростовой активности для клеток Vero.

Изучение ростовых свойств различных фильтратов сыворотки КРС при культивировании клеток Vero

Среда количество коэффициент

1. Игла МЕМ+фильтрат-25 (мембрана с порогом отсечения 25 кД) 1 —

2. Игла МЕМ+фильтрат-100 2 2,0-3,0

3. Игла МЕМ+фильтрат-300 10 6,0-6,2

Таким образом, нами показана возможность культивирования клеток Vero в среде с уменьшенным

количеством сыворотки КРС в питательной среде или фильтрата сыворотки КРС.

В процессе исследования мы провели опыты по адаптации культурального вируса бешенства Внуково-32 на уровне 35 пассажа на клетках почек сирийского хомяка с титром 5,0 lg ЛД50/о,оз мл к культуре гетероплодных клеток Vero. После 20 серийных пассажей в процессе адаптации инфекционный титр вируса повысился с 4,5 lg ЛД50/МЛ до 8,0 lg ЛД50/МЛ. Определение специфической активности вируса в тесте связывания антител на мышах показало увеличение ее в 3-4 раза. Индексы антигенности при этом на уровне 10, 20 и 30 пассажей составили соответственно 0,5, 1,6 и 1,9 против 150 ЛД50 фиксировано«) вируса бешенства CVS.

При выращивании вируса бешенства Внуково-32 в линии клеток Vero ни в одном из опытов не было обнаружено цитопатического действия вируса. Следовательно, размножение вируса в клетках Vero проходило по типу хронической инфекции. При исследовании культуры клеток Vero методом флуоресцирующих антител в цитоплазме клеток обнаруживался специфический антиген в виде ярких желтовато-зеленых включений.

Результаты электронномикроскопического контроля адаптированного к клеткам Vero вируса бешенства Внуково-32 показали, что в процессе адаптации не происходит морфологических изменений вирионов бешенства. Размножение вируса происходит без задержки зрелого вируса в клетках. Формирование вирионов происходит в основном в матриксе.

С целью повышения титра штамма Внуково-32 в культуре клеток Vero определяли оптимальные значения температуры и времени адсорбции. Наиболее высокое накопление вируса было отмечено при продолжительности адсорбции до 120 мин и температуре +22° С. Понижение температуры до +4° С или повышение до +37° С и сокращение времени адсорбции приводили к удлинению сроков накопления вируса и снижению урожая вируса.

Накопление вируса бешенства Внуково-32 в клетках Vero при различных условиях адсорбции

Температура адсорбции Время адсорбции, мии Тптр вируса, lg ЛД50 /мл День с момента заражения

Изучение размножения вируса бешенства Внуково-32 при различной температуре инкубации показало, что наиболее активно вирус размножался при +32° С и +37° С. Существенных различий в накоплении вируса при +32° С и +37° С нами не выявлено. Снижение температуры инкубации до +22° С приводило к удлинению сроков максимального выхода вируса.

Изучение размножения вируса бешенства Внуково-32 в культуре клеток Vero в зависимости от неличины его заражающей дозы показало, что наибольшее накопление вируса в культуральной жидкости достигается, когда заражающая доза вируса составляет 0,001-0,1 ЛД50 на клетку. Инфекционный титр вируса при этом достигал 8,0 Ig ЛД50/МЛ- Использование высокой концентрации вируса (до 10 ЛД50) не способствовало более интенсивному накоплению вируса в среде, что, видимо, объясняется превышением в популяции количества интерферирующих частиц над инфекционными и в целом приводит к снижению инфекционного титра. Влияние множественности инфекции 0,001-0,1 ЛД50 на клетку на динамику и сроки максимального накопления вируса бешенства в линии клеток Vero нами не обнаружено.

Рост требований к качеству вирусных вакцин предполагает усовершенствование методов культивирования клеток, подразумевающее более жесткий контроль процесса культивирования (van Wezel A.L., 1978; Грачев В.П. с соавт., 1983,1985). Принципиальный шаг в этом направлении был связан с переходом к суспензионному культивированию. Согласно литературным и экспериментальным данным (D.W.Levine et al., 1978; BJ.Montagnon et al., 1981,1983; Nilsson Kjell, 1988; Leist C.H. et al., 1990) этот метод имеет наиболее высокие характеристики использования питательной среды, продуктивности клеток в накоплении вируса и наиболее реальные перспективы усовершенствования.

Мы провели серию исследований по изучению размножения вируса бешенства Внуково-32 в клетках Vero, культивируемых различными методами (стационарный, роллерный и псевдосуспензионный). Сравнительное изучение накопления вируса показало, что при роллерном и псевдосуспензионном методах максимальный титр вируса был выше и составил 8,0 lg ЛД50/МЛ.

Инфекционный ТИТр, Ig ЛД50/МЛ

(По оси ординат: инфекционный титр вируса в ДД50/МЛ. а-культивирование в монослое; Ь-культивирование в роллере;

с-культивирование на микроносителях в биореакгоре.)

Установлено, что динамика накопления вируса бешенства Внуково-32 не отличалась при культивировании клеток Vero различными способами и графически представляет собой кривую, имеющую два максимума накопления вируса. Наши данные подтверждаются работами других авторов на культурах клеток 455, Vero, 4647 (Аксенова Т.А. с соавт,, 1991).

Изучение способа заражения клеток Vero (в монослой и во взвесь) для различных методов культивирован™ не выявило преимущества какого-либо из них. Антигенная активность вирусного материала, полученного разными методами культивирования, не отличалась. Индексы антигешюсти составили в среднем 2,0 против 158 ЛД50 стандартного вируса С VS.

Накопление вируса бешенства, штамм Внуково-32, при различном способе заражения клеток

Способ заражения Инфекционный титр, lg ЛДед/мл

стационарный метод роллерный метод на микроносителях в ферментере

в монослой 5,7 ±0,3 7,2 + 0,5 7,0 ± 0,6

во взвесь ‘ 6,0 ± 0,5 7,1 ±0,4 7,5 ±0,5

Таким образом, при прочих равных условиях псевдосуспензиониый метод получения вирусного материала выгодно отличается от стационарного и роллерного. Этот метод позволяет значительно увеличить поверхность для роста клеточного монослоя, обеспечить постоянство условий культивирования системы вирус-клетка, снизить расход питательных сред и сывороток, повысить производительность труда. Так, на одной частице микроносителя диаметром 160-280 мкм могут поместиться 350-630 клеток. При этом в 1 мл среды можно суспендировать несколько тысяч частиц микроносителей, общая ростовая поверхность которых составляет от нескольких квадратных сантиметров до 48 см2/мл. В 1 л культуры на микроносителях можно получить такое же количество клеток, как в 100-150 матрасных колбах объемом 1,5 л или 400-

530 чашках Петри диаметром 100 мм (Грачев В.П.. Завальный М.А., 1983).

Результаты работы, проведенной в нашей лаборатории, свидетельствуют о возможности накопления вируса бешенства в 3, 10 и 50 л биореакторах на клетках Vero псевдосуспензионным методом для приготовления антирабической вакцины.

Сравнительное изучение репродукции вируса бешенства Внуково-32 в культуре клеток Vero при использовании трех типов микроносителей (Cytodex 1, Цитолар 1 и Цитолар 2) показало, что отечественные микроносители Цитолар могут применяться с той же степенью эффективности, как и зарубежные микроносители Cytodex 1. Нами установлено наличие прямой пропорциональной зависимости между исходной концентрацией клеток во взвеси, временем генерации и инфекционным титром вируса.

Наиболее оптимальными условиями для накопления вируса в псевдосуспензионной культуре клеток Vero явились: посевная доза клеток-2,0х105 кл/мл, множественность инфекции-0,01 ЛД50/КЛ, концентрация микроносителей Цитолар 2-3 мг/мл. Инфекционный титр вируса при этом варьировал от 7,1 lg ЛД50/МЛ до 8,0 lg ЛД50/мл.

Для наилучшего прикрепления клеток к микроносителям и увеличения урожая вируса в процессе культивирования важен режим перемешивания суспензии. Мы отработали оптимальные режимы вращения магнитной мешалки для 3, 10 и 50 л биореакторов. Интенсивность и время перемешивания взвеси зависели от объемов биореакторов. Для 3 л биореактора оптимальным режимом работы являлось периодическое перемешивание со скоростью вращения мешалки 25 об/мин в течение 1 мин, остановка — 30 мин в первые 4-5 суток с последующим постоянным перемешиванием со скоростью 30 об/мин. Для 10 и 50 л биореакторов перемешивание проводили 5 мин со скоростью 25 об/мин, остановка — 90 мин и далее время покоя уменьшали ежесуточно на 30 мин.

Динамика репродукции вируса при переходе объема биореакторов от 3 л к 50 л сохранялась. С целью оптимизации процесса получения вирусного материала в большом объеме и с высоким инфекционным титром мы производили подсев в

биореактор свежей порции зараженных вирусом клеток. По данному способу подана заявка ГР №94043360 с решением о выдаче патента РФ от 22.01.96.

Полученный псевдосуспензмонным методом вирусный материал обладал высокой антигенной и иммуногенной активностью. Индексы антигенности в тесте ИФА и в тесте связывания антител на мышах соответственно были 1,8 и 2,0 против 158 ЛДзо вируса CVS. Индексы иммуногенности колебались от 3,6 до 15,0 против 50-100 ЛД50 вируса CVS при контроле общепринятым тестом NIH США.

Специфическая активность вируса бешенства Внуково-32 при суспензионном культивировании в клетках Vero на микроносителях (тест связывания антител — па мышах)

культи- ный титр, тво анти- Тест связывания антител

ния МЕ/мл индекс антигенности доза вируса, лд™

Одним из требований, предъявляемых к инактиви-рованным вакцинам, приготовленным на перевиваемых клеточных линиях, является отсутствие биологически активных макромолекул в препарате, в том числе и клеточной ДНК. По данным A.L.Weze] el al. (1982) и B.J.Montagnon et al. (1985) количество клеточной ДНК в неочищенной культур альной жидкости после разрушения зараженных вирусом полиомиелита клеток Vero составляло 0,28 мкг/мл и от 5 до 100 мкг/мл соответственно. Контроль на содержание остаточной

клеточной ДНК вирусных проб, приготовленных псевдосуспензионным методом, проведен нами совместно с В.В.Блохой в НИИСК медицинских биологических препаратов 1Ш.Л.А.Тарасевича. Количество клеточной ДНК в пробах колебалось в пределах 800-4000 пг/мл. С помощью гель-фильтрации на сефарозе 4В и протамин сульфата очищали суспензию вируса бешенства и снизили концентрацию остаточной ДНК до 32-64 пг/мл.

Очистка суспензии вируса бешенства Внуково-32 гелъ-филътрацией на сефарозе 4В

Вирусный материал Методы очистки Степень очистки Концентрация остаточной ДНК, пг/мл

концентрат вируса Уф+Дф 2 320-800

концентрат вируса Гх.сеф. 12-25 32-64

концентрат вируса Уф+Дф+Сеф. 25-50 32

Очистка концентрата вируса Внуково-32 от клеточной ДНК обработкой протамин сульфатом

Вирусный материал Содержание клеточной ДНК в пг/мл при концентрации протамин сульфата

до обработки 1мг/мл 5мг/мл 10мг/мл

концентрат вируса 800-4000 128 64 32-64

инфекционный титр вируса, Ы ДД^/мл 8,0-8,5 8,0 8,0 8,0

В процессе исследований мы показали возможность масштабирования псевдосуспензионного метода накопления вируса бешенства Внуково-32 в клетках Vero при переходе от Зл к 50 л биореактору. В процессе масштабирования проводили последовательное наращивание клеточной массы в 3, 10 и 50 л биореакторах путем снятия клеток с частиц микроносителей Цитолар 2 аналогично процедуре снятия клеток для монослойных культур. Снятые с микроносителей клетки со свежей порцией носителей загружали- в биореактор и проводили дальнейшее субкультивирование. Визуальный контроль проб и подсчет клеток в камере Горяева показали сохранение ростовой активности последних и хороший уровень формирования монослоя на носителях ( до 80% ).

Таким образом, в нашей работе мы показали возможность получения эффективного препарата КОКАВ да вирусного материала, полученного псевдосуспензионным методом на отечественных микроносителях Цитолар 2, используя фиксированный вирус бешенства Внуково-32 и культуру перевиваемых клеток Vero.

1. Установлена возможность выращивания перевиваемой клеточной линии Vero в малосывороточной среде, что достигается в результате:

a) снижения содержания СКРС (сыворотки крупного рогатого скота) до 7% в ростовой среде;

b) снижения содержания СКРС до 1% в среде при добавлении в качестве ростовых добавок 5% ПГК-14 (панкреатического гидролизата казеина-14), 2% ПВП (поливинилпирролидона) и 50 мг/л XX (холинхлорида);

c) использование фильтрата СКРС (мембрана с порогом отсечения по молекулярной массе 200-300 кД ).

2. Получен вариант фиксированного вируса бешенства Внуково-32, адаптированный к гетероплоидной перевиваемой линии клеток Vero и сохраняющий морфологию и специфическую активность исходного штамма.

3. При сравнительном изучении репродукции вируса бешенства Внуково-32 в культуре клеток Vero при разных способах их культивирования установлено преимущество псевдосуспензионного метода.

4. Установлены оптимальные условия получения вирусного материала при псевдосуспензионном культивировании зараженных вирусом клеток в биореакторах объемом 3, 10 и 50 л на микроносителях Цитолар 2: посевная концентрация клеток — 2x10s кл/мл, концентрация микроносителей — 3 мг/мл, множественность инфекции — 0,001-0,1 ЛДзо/кл.

5. Изучение специфической активности вируссодержащей жидкости, полученной в биореакторах на микроносителях, показало высокую антигенную и иммуногенную активность • вируса. Индексы антигенности в тесте ИФА и связывания антител соответственно были 1,8 и 2,0 против 158 ЛД50 вируса CVS. Индексы иммуногенности колебались от 3,6 до 15,0 против 50-100 ЛД5о вируса CVS при контроле общепринятым тестом NIH США.

6. Показана возможность получения эффективной концентрированной очищенной культуральной инакгивированной антирабической вакцины из вирусного материала, при использовании нового клеточного субстрата перевиваемой гетероплоидной линии Vero и фиксированного вируса бешенства Внуково-32.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

источник

1. Острые инфекционные и неинфекционные заболевания, хронические заболевания в стадии обострения или декомпенсации — прививки проводят не ранее одного месяца после выздоровления (ремиссии).
2. Системные аллергические реакции на предшествовавшее введение вакцины КОКАВ (генерализованная сыпь, отек Квинке и др.).
3. Аллергические реакции на антибиотики.
4. Беременность.

Содержимое ампулы с вакциной должно быть растворено в 1,0 мл воды для инъекций.

Время растворения не должно превышать 5 мин. Растворенная вакцина представляет собой прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость от бесцветного до светло-желтого цвета.

Растворенную вакцину вводят медленно внутримышечно в дельтовидную мышцу плеча, детям до 5 лет — в верхнюю часть переднебоковой поверхности бедра. Введение вакцины в ягодичную область не допускается.

Оказание антирабической помощи

Антирабическая помощь состоит из местной обработки ран, царапин, ссадин, мест ослюнений и последующего введения антирабической вакцины КОКАВ или, при наличии показаний, комбинированного введения антирабического иммуноглобулина (АИГ) и антирабической вакцины КОКАВ.

Интервал между введением АИГ и КОКАВ — не более 30 минут.

Местная обработка ран (укусов, царапин, ссадин) и мест ослюнений должна начинаться немедленно или как можно раньше после укуса или повреждения. Она заключается в обильном промывании в течение нескольких минут (до 15 минут) раневой поверхности водой с мылом или другим моющим средством (детергентом) или, в случае отсутствия мыла или детергента, место повреждения промывается струей воды.

После этого края раны следует обработать 70% этиловым спиртом или 5% спиртовым раствором йода. По возможности следует избегать наложения швов на раны.

Наложение швов показано исключительно в следующих случаях:

• при обширных ранах — несколько наводящих кожных швов после предварительной обработки раны;
• по косметическим показаниям (наложение кожных швов на раны лица);
• прошивание кровоточащих сосудов в целях остановки наружного кровотечения.

При наличии показаний к применению антирабического иммуноглобулина, его используют непосредственно перед наложением швов (см. раздел Доза антирабического иммуноглобулина (АИГ)).

После местной обработки ран (повреждений) немедленно начинают лечебно-профилактическую иммунизацию.

Показания. Контакт и укусы людей больными бешенством животными, животными с подозрением на заболевание бешенством, дикими или неизвестными животными.

Беременность не является противопоказанием.

Лечебно-профилактической иммунизации подлежат все лица, подвергшиеся риску заражения бешенством. Если имеются показания к комбинированному лечению, то сначала вводится АИГ и, не более чем через 30 мин, после него вводится КОКАВ.

Антирабический иммуноглобулин (АИГ) назначают как можно раньше после контакта с бешеным животным или животным с подозрением на заболевание бешенством, диким или неизвестным животным.

Перед введением гетерологичного (лошадиного) антирабического иммуноглобулина необходимо проверить индивидуальную чувствительность пациента к лошадиному белку (см. «Инструкцию по применению иммуноглобулина антирабического из сыворотки крови лошади, жидкого»).

Перед введением гомологичного (человеческого) антирабического иммуноглобулина индивидуальная чувствительность не проверяется. Гетерологичный антирабический иммуноглобулин вводят не позднее 3 суток после укуса, гомологичный антирабический иммуноглобулин вводят не позднее 7 суток после укуса.

Доза антирабического иммуноглобулина (АИГ). Гетерологичный (лошадиный) антирабический иммуноглобулин назначается в дозе 40 ME на 1 кг массы тела.

Объем вводимого гетерологичного антирабического иммуноглобулина не должен превышать 20 мл. Гомологичный (человеческий) антирабический иммуноглобулин назначается в дозе 20 ME на 1 кг массы тела.

Введение антирабического иммуноглобулина (АИГ). Как можно большую часть рекомендованной дозы АИГ следует инфильтрировать в ткани вокруг раны и в глубине раны.

Неиспользованная часть дозы препарата вводится глубоко внутримышечно в место, отличное от введения антирабической вакцины.

Показания. С профилактической целью иммунизируют лиц, имеющих высокий риск заражения бешенством (сотрудники лабораторий, работающие с уличным вирусом бешенства; ветеринарные работники; егеря, охотники, лесники; лица, выполняющие работы по отлову и содержанию животных и другие профессиональные группы).

Вакцина вводится внутримышечно в дельтовидную мышцу плеча по 1,0 мл в 0, 7 и 30 день. Ревакцинацию проводят однократно, в дозе 1,0 мл через год и далее каждые три года.

Не пригоден к применению препарат в ампулах с нарушенной целостностью, маркировкой, а также при изменении цвета и прозрачности, при истекшем сроке годности, неправильном хранении.

Вскрытие ампул и процедуру вакцинации осуществляют при строгом выполнении правил асептики. Хранение растворенной вакцины более 5 мин не допускается.

Вакцинированный должен находиться под медицинским наблюдением не менее 30 мин. Места для проведения прививок должны быть оснащены средствами противошоковой терапии.

• Введение вакцины может сопровождаться местной или общей реакцией. Местная реакция характеризуется незначительной припухлостью, гиперемией, краснотой, зудом, болезненностью в месте инъекции, увеличением регионарных лимфоузлов. Общая реакция может проявиться в виде недомогания, головной боли, слабости, повышения температуры тела.

Рекомендуется симптоматическая терапия, применение гипосенсибилизирующих средств. В редких случаях могут развиться неврологические симптомы, такой больной должен быть срочно госпитализирован.

• После введения антирабического иммуноглобулина из сыворотки крови лошади могут наблюдаться осложнения: местная аллергическая реакция, наступающая на 1-2 день после введения; сывороточная болезнь, которая наступает чаще всего на 6-8 день; анафилактический шок. В случае развития анафилактоидной реакции вводят подкожно раствор адреналина или норадреналина в возрастной дозировке и 0,2-1,0 мл эфедрина гидрохлорида раствора для инъекций 5%.

При появлении симптомов сывороточной болезни рекомендуется парентеральное введение антигистаминных лекарственных средств, кортикостероидов, препаратов кальция.

источник

Бешенство – опасный смертельный недуг из группы зоонозов, который развивается при ослюнении или укусе больным животным. Болезнь проявляется возбуждением, судорогами, боязнью воды, нарушением работы нервной системы и дыхания, обильным слюноотделением. Основным источником заболевания выступают дикие (лисы, ежи, волки, кабаны) или домашние (собаки, кошки, овцы) животные.

После укуса рекомендуется срочно обратиться в больницу, для получения первой медицинской помощи и введения профилактической антирабической вакцины из инактивированной культуры штамма вируса бешенства — Рабивак-Внуково-32.

Прививка выпускается в форме лиофилизата для приготовления раствора для подкожного введения в область живота или межлопаточный промежуток. Форма выпуска: флакон с белым порошком.

Состав одной дозы (0,5 МЕ – международные единицы) следующий:

• Инактивированный штамм вируса «Внуково-32».
• Желатин.
• Альбумин.
• Канамицина моносульфат.

В упаковке находится 5 комплектов: пять флаконов (по 3 мл каждый) с растворителем (дистиллированная вода) в ампулах по 3 мл.

Перед введением препарата рекомендуется провести первичную хирургическую обработку раны.

Благодаря наличию в составе вакцины инактивированной культуры штамма вируса бешенства, формируется стойкий и специфический иммунитет. При попадании в организм человека вакцина запускает каскад реакций, направленный на формирование защитных сил организма. Активируется, как клеточная (группа активных лейкоцитов), так и гуморальная (в виде антител) цепочка. Максимальная концентрация защитных клеток наблюдается на 45 день после применения и сохраняется на протяжении года. На территории с широким распространением бешенства прививку осуществляют ежегодно.

Экстренная профилактика обеспечивает быстрое нарастание количества лимфоцитов и антител, благодаря частому введению препарата.

Бешенство поражает людей всех возрастных категорий. Но выделяют лиц, которым показано введение Рабивак-Внуково-32:

• Жители эндемических территорий по гидрофобии.
• При подозрении болезни у человека.
• Людям после укуса больного животного (экстренная профилактика).
• Работники лабораторий, ветеринары, зоотехники, охотники, егеря – профессиональная деятельность сопряжена с риском заболевания.
• Контакт с больным животным (при ослюнении человека носителем).

Специальная подготовка перед введением препарата не требуется.

Совет врача! После укуса животного необходимо провести экстренную профилактику в кратчайшие сроки. При соблюдении схемы введения, формируется стойкий иммунитет и вирус обезвреживается. В данном случае обязательное присутствие врача-инфекциониста. Он назначит схему и сроки прививания вакциной, которые индивидуальны и специфичны в каждом случае. Не стоит откладывать визит к специалисту

Флакон, в котором содержится 0,5 МЕ, растворяют в 3 миллилитрах воды для инъекций. Готовый раствор сохраняют не больше 20 минут после приготовления при комнатной температуре. Вводят подкожно в жировую прослойку живота или межлопаточную область (при наличии повреждений или травм на передней брюшной стенке). Запрещено вводить в область ягодиц и местах прохождения крупных сосудов.

Схема проведения вакцинации (совместно с введением антирабического иммуноглобулина) изображена в таблице:

Характер контакта (видимые укусы или ослюнения)

Данные о больном животном

Отсутствует повреждение кожи и слизистых оболочек, нет ослюнений

Не применяется ни введение иммуноглобулинов, ни Кокава

Наличие ослюнений и неповрежденных слизистых оболочек и кожи, поверхностные укусы (исключая область головы, шеи, лица, кистей и стоп)

В течение 10 дней наблюдения животное без признаков бешенства – лечение прекращают (проведено 3 инъекции).

При наличии лабораторного подтверждения отсутствия заболевания – лечение прекращают с момента подтверждения.

Во всех случаях, когда невозможно установить десятидневное наблюдение (животное умерло или убежало) – продолжать весь курс лечения по стандартной схеме

Немедленно начать лечение: Кокав 1 мл в 0; 3; 7; 14; 30; 90 день заболевания

При ослюнении слизистых оболочек; укусах головы, шеи, стоп и кистей; глубоких и рваных ранениях; повреждения и ослюнения, нанесенные дикими животными

В течение 10 дней наблюдений животное без признаков гидрофобии – лечение прекращают (проведено 3 инъекции).

При наличии лабораторного подтверждения отсутствия заболевания – лечение прекращают с момента подтверждения.

Во всех случаях, когда невозможно установить десятидневное наблюдение (животное умерло или убежало) – продолжать весь курс лечения по схеме

Комбинированное лечение антирабическим иммуноглобулином с дня заболевания и Кокав по одному миллилитру в 0; 3; 7; 14; 30; 90 день болезни

Людям, которым была проведена иммунизация менее года назад, назначается курс профилактики с введением трех доз по 3 мл на 1-й; 3-й и 7-й день после обращения в медицинское учреждение.

Важно! Иммунизация проводится со строгим соблюдением правил и сроков введения. При применении схемы организм человека формирует стойкий иммунитет и обезвреживает вирус бешенства в кратчайшие сроки. Каждый случай – индивидуальный и особенный. Врач сумеет распознать риск болезни и принять верное решение в короткие термины

Препарат вводится подкожно в область передней брюшной стенки или межлопаточное пространство. Первичная иммунизация проводится в 0; 7 и 30 дни по 3 мл. Через год повторно – 3 миллилитра разово. Далее вводить по одной дозе каждые 3 года.

До того как вводить препарат, рекомендуется осмотреть упаковку и ампулу с вакциной. При обнаружении дефектов запрещено проводить иммунизацию. Место введения осмотреть на наличие повреждений и обработать раствором спирта.

Прививка Рабивак-Внуково-32 используется, как для экстренной, так и для плановой профилактики бешенства. Введение препарата при неотложных ситуациях сопровождается не только применением вакцины, но и первичной хирургической обработкой места укуса. Плановое использование препарата требует сдачи общеклинических анализов и консультации врача перед введением. Данные меры предупреждают возникновение побочных реакций и осложнений.

Прививание – процесс, который проводится в специально отведенных кабинетах в школах, детских садах, поликлиниках и больницах. Помещение оснащено кушеткой, стульями, столом, холодильником для хранения вакцин, шкафчиком для оказания первой медицинской помощи.

Упаковка, флакон или шприц осматриваются врачом. Он оценивает наличие повреждений, цвет и консистенцию препарата, наличие физиологического раствора для инъекций. При обнаружении отклонений от нормы – сообщить главному врачу и перенести иммунизацию и повторно ознакомиться с инструкцией.

При экстренной профилактике абсолютные противопоказания отсутствуют, так как основной целью служит сохранение жизни человека.

При плановой иммунизации выделяют некоторые противопоказания:

• Тяжелые дефекты иммунной системы человека (СПИД).
• Беременность.
• Наличие осложнений и побочных реакций при предыдущих введениях.
• Острые инфекционные заболевания.
• Активизация хронического процесса.

Пренебрегать противопоказаниями не стоит, так как они приводят к необратимым последствиям и тяжелым осложнениям.

Возникают вследствие неправильного хранения препарата или индивидуальной непереносимости компонентов.

Реакция на вакцинирование проявляется в виде системных и местных реакций:

• Первая группа – повышение температуры, слабость, сыпь на теле, недомогание, головная боль, потеря сознания или анафилактический шок.

Совет врача! Возникновение побочных реакций свидетельствует о чрезмерной активации иммунной системы и ее составляющих. Но не стоит беспокоиться. Нужно обратиться к врачу за помощью. Также возникновение подобных реакций может быть обусловлено погрешностями по уходу места укола. Не забывайте о локальном осмотре следа после инъекции. Он должен быть сухим, чистым, без изменения цвета

Как при срочной, так и плановой профилактике беременность и кормление грудью являются абсолютным противопоказанием для введения прививки Рабивак-Внуково-32. Но иногда в экстренных случаях и при отсутствии других вакцинальных препаратов разрешено использование данной вакцины. Только врач принимает решение о применении вакцины.

Запрещено использование других иммунных препаратов: вакцины, глюкокортикоидные средства и цитостатики. Допускается введение лекарств данной группы после 2-х месяцев с момента применения Рабивак-Внуково-32.

Разрешено вводить на фоне использования базисной терапии при лечении болезней сердца, дыхательных путей и пищеварительной системы.

Плюс 2-8 градусов по Цельсию – оптимальная температура хранения прививки. Обязательное хранение в холодильной установке, недоступной для детей и прямых солнечных лучей.

Срок хранения вакцины полтора года.

Условия транспортировки идентичны таковым при хранении.

После вакцинации привитый человек находится в месте прививания некоторое время (30 минут). Это способствует исключению и предотвращению побочных реакций и осложнений. При возникновении нежелательных последствий врач окажет медицинскую помощь.

Существует разнообразное количество прививок для плановой и экстренной профилактики бешенства. Наиболее распространенные:

• Рабипур (Индия).
• Верораб (Франция).
• Индираб (Индия).

Вышеперечисленные препараты имеют в своем составе инактивированный штамм вируса бешенства, но различаются страной производителем.

Бешенство – заболевание, которое приводит к смертельным последствиям. Исключительно прививка обеспечит наличие стойкого и специфического иммунитета против гидрофобии. Благодаря препарату некоторые страны полностью искоренили бешенство из списка болезней, распространенных на территории государства.

На территории нашей страны существует традиция тесного взаимодействия человека и дикого или домашнего животного. Охота, домашнее хозяйство или наличие в доме любимых питомцев повышают риск заболевания бешенством.

источник

В современной медицинской практике вакцина против бешенства является единственной мерой спасения человека при взаимодействии с зараженными животными, птицами.

Бешенство считается неизлечимой болезнью после того, как возникнут клинические симптомы. Поэтому актуальность своевременного применения антирабической вакцины бесспорна и сегодня является безальтернативным видом лечения.

Это препарат повышенной концентрации по сравнению с предыдущим аналогом, содержит вирус бешенства штамм Внуково-32. Он лишен активности с помощью формалина, обладающего способностью свертывать белки, а также ультрафиолетового излучения.

Повысить концентрацию вируса удалось высокоэффективным методом ультрафильтрации. Подготовленный таким образом и очищенный препарат позволяет сократить количество, дозировку вакцинации, и, соответственно, проявление побочных эффектов.

Лекарство обладает способностью повышать и вырабатывать иммунитет против вируса Rabies lyssavirus.

Вирус передается инфицированными животными, как через укус, так и слюной, по нервным проводникам переносится из раны и достигает нервных клеток коры головного мозга.

Вирус вызывает тяжёлые нарушения ЦНС, воспаление головного мозга у зараженных. Слюнные железы получают высокую дозу патогена, что вызывает повышенное слюноотделение. Лишняя слюна стекает в желудок, обеспечивая быстрое развитие болезни и во внешнюю среду, способствуя распространению вируса.

Смерть инфицированного с момента заражения может наступить в течение 2-5 дней вследствие удушья и остановки сердца.

Для разных животных этот период варьируется. Летальный исход для большинства млекопитающих наступает в течение 2-6 недель, но есть представители животного мира, которые могут быть бессимптомно инфицированными несколько лет, например африканский желтый мангуст.

Потенциальными распространителями Rabies lyssavirus в животном мире чаще всего являются лисы, волки, барсуки, енотовидные и домашние собаки, летучие мыши, кошки.

Вне организма вирус нестоек, чувствителен к ультрафиолету, прямому солнечному излучению и многим дезинфекторам, погибает за 15 минут при нагревании более 50°С, за 2 минуты — при кипячении. При низких температурах патоген сохраняет свою жизнедеятельность, устойчив по отношению к фенолу – антисептическому препарату.

К первичным признакам заражения на 1-й стадии относятся слабость, рост температуры, отсутствие сна, беспокойство, болезненность укушенного места. Продолжительность проявления симптомов 1-3 дня.

2-я стадия продолжается около 4 дней. Появляется острая реакция на свет, звуки, возникают фобии, страх, появляются галлюцинации. У больных отделяется много слюны, появляется агрессивность.

3-я стадия скоротечна, характеризуется множественными параличами: глаз, скул (отвисает челюсть), ног. Больной может съедать несъедобные и опасные вещи. Человек становится асоциальным, личность исчезает, начинается бешенство. Удушье вызывает смерть.

При подозрении на возможность заболевания до момента прибытия к врачу нужно провести обработку раненой поверхности мыльной водой для снижения степени инфицирования. Края раны необходимо обработать йодом или спиртом.

Выделяют несколько видов контакта с животными, птицами и повреждений кожных покровов, нанесенных ими.

Первая категория характеризуется отсутствием или взаимодействием без повреждений, переносом слюны на неповрежденную кожу здоровыми домашними животными. Данный вид взаимодействия происходит в повседневной жизни в процессе ухода за прирученными животными и игре с ними.

Вторая категория характеризуется попаданием слюны в глаза, рот, раны на коже, а также легкими укусами тела человека, кроме мест сосредоточения нервных окончаний, произведенными домашними или дворовыми животными.

Если животное здоровое, опасность вирусного заражения отсутствует, а в течение 10 дней клиника заболевания не наблюдалась, то уколы человеку не требуются. Лечение по плану назначается при появившихся признаках болезни у животного, или имевшихся у него на момент укуса.

Третий вид контакта характеризуется наличием царапин, оставленными когтями животных, укусами в голову, шею, повреждениями промежности, кистей рук, а также множественными ранениями разной степени тяжести, любой локализации. В данном случае назначается комплексная схема лечения.

Если признаки заболевания предполагаемого переносчика не проявились в течение 10 дней и оно не бешеное, то лечение отменяют. Вакцинация следует обязательно, если человек укушен лесным зверем или поцарапан летучей мышью, а возможность проверить в лаборатории наличие у них болезни отсутствует.

Выделяют профилактическую и лечебную вакцинации.

В Национальном календаре на 2017г. профилактическая прививка от бешенства для российских детей не предусмотрена. Отсутствие подозрительного контакта и повреждений не предполагает вакцинирование.

Однако людям, чья профессиональная деятельность сопряжена с высокой вероятностью заражения вирусом, таким как егеря, охотники, ветеринары, обязательны профилактические прививки, проводимые по следующей схеме:

• первое вакцинирование (0-й, 7-й и 30-й дни);
• повторная инъекция через год и каждые 5 лет.

Если укус состоялся или существует подозрение на неблагополучный контакт, то осуществляется лечебная вакцинация.

В случаях первой, второй и третьей категории взаимодействия с животным вакцинация от бешенства не требуется человеку, если укусившее домашнее или дворовое животное внешне здоровое и в течение десяти дней не проявляются признаки заболевания.

При второй категории контакта, когда у животного появились на протяжении десяти дней или в процессе контакта имелись признаки заболевания, схема лечения включает шесть разовых инъекций внутримышечно: 0-й день (день обращения), 3-й, 7-й, 14-й, 30-й, 90-й дни от нулевого дня.

Вакцинация против бешенства эффективна, если назначена в первые сутки, когда произошло нападение животного.

Повреждения 3-й степени являются основанием для назначения комплексного лечения. К стандартному плану уколов добавляется антирабический иммуноглобулин. Лекарство способствует угнетению и нейтрализации вируса, усиливает действие вакцины. Обязательная вакцинация назначается лицам, имевшим контакт любой локации и размера с бродячими животными, жителями леса, летучими мышами.

Если у животного, за которым можно понаблюдать, не проявились признаки болезни на 10-й день, то вакцинацию человека заканчивают после 3-й прививки. Введение инъекций прекращают немедленно, если лабораторные анализы крови животного показали отсутствие вируса.

Лицам, получившим полный курс лечения и повторно заразившимся, назначают следующие лечебные схемы:

• разовые инъекции в 0-й, 3-й, 7-й дни, если с момента лечения прошло менее года;
• стандартная схема лечения, если после нее прошло больше года.

Использование антирабической вакцины имеет побочные эффекты, проявляющиеся в виде локальных кожных высыпаний, тремора конечностей, роста температуры тела, слабости. Перечисленные реакции отмечаются всего у 0,03% пациентов.

Противопоказаний у лекарства нет. Количество препарата, вводимое пациенту, составляет 1 мл внутримышечно независимо от возраста. Локация введения препарата отличается: лицам старше 16 лет ставят укол в плечо; детям — в бедро, но не в ягодицу.

Антирабический иммуноглобулин является чужеродным для человека белком, поскольку вырабатывается из лошадиной кровяной сыворотки. Препарат отторгается иммунной системой человека. Побочными действиями могут быть такие реакции организма, как отек Квинке, анафилактический шок, сывороточная болезнь. Эти реакции редко появляются, но высокая вероятность летального исхода, делает его применение рискованным.

Доза антирабического иммуноглобулина величиной 40 ME рассчитывается на 1 кг массы взрослого человека и ребенка. Общий максимальный объем иммуноглобулина составляет 20 мл. Введение лекарства осуществляется по особой схеме, с проведением проб и в палате интенсивной терапии, оборудованной средствами противошоковой терапии.

Существует антирабический иммуноглобулин, вырабатываемый из человеческой крови. Он более эффективный и его применение не сопровождается серьезными побочными эффектами. Однако, в редких случаях, лицам, имеющим в анамнезе аллергические реакции на препараты из крови, лекарство отменяют либо вводят после консультации специалиста.

Доза препарата рассчитывается на 1 кг массы тела в объеме 3-4 мл для детей, 25-50 мл для взрослых.

Максимально разрешенный объем инъекции детям составляет не более 25 мл.

Исследования американских, китайских, мексиканских ученых подтвердили тот факт, что ни вакцина, ни иммуноглобулин не имеют вредного влияния на беременных женщин и плод. Дети до года, рожденные от вакцинированных мам, ничем не отличались от контрольной группы детей.

Беременность не является противопоказанием для лечения.

В течение курса вакцинации и последующие 6 месяцев после него вакцинированным лицам нужно соблюдать определенный режим жизнедеятельности, исключающий потребление спиртных напитков, переохлаждение, перегрев и переутомление.

Употребление некоторых видов препаратов одновременно с терапией способно снизить ее эффективность. К ним относят стероидные гормоны и иммунодепрессанты, обладающие свойством подавлять иммунитет.

источник