Взятие патматериала при бешенстве

25.11.2018
Снижение цен на ультразвуковые аппараты KAIXIN !Подробнее

10.02.2017
Фотоотчет с выставки «Агроферма 2017″Подробнее

05.01.2017
Приглашаем посетить наш стенд на выстаке «Агроферма-2017» 7-9 ферваля 2017, ВДНХ, павильон 75 стенд G13Подробнее

10.12.2016
Новый обновленыый ультразвуковой сканер kx5200!Подробнее

источник

Бешенство (Б) – остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением ЦНС. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также человек.

Болезнь регистрируется в различных регионах земного шара. Не отмечено случаев распространения болезни в Австралии, Великобритании, Японии. Заболевание почти всегда заканчивается смертью. Имеются фактически документированные случаи выздоровления от бешенства человека и собак после экспериментальной инфекции.

Вирус бешенства (ВБ) относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. В настоящее время установлено, что ВБ имеет 4 серотипа, что обусловлено, видимо, различием в составе мембранных белков. Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны, но различаются по вирулентности. ВБ обладает ГА и ГАД свойствами. Между инфекционной и ГА активностью существует линейная зависимость. Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют ВНА, КСА, антиГА и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) АТ.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений (они имеют меньшее значение) и, главным образом, результа­тов лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика заключается в исследовании головного мозга животных с целью выявления вирусного АГ в ИФ, РДП, обнаружении те­лец Бабеша — Негри и биопробе на белых мышах.

В Российской Федерации в настоящее время организовано производство наборов для диагностики Б в ИФ и РДП в ВНИТИБП и КазНИВИ.

Выделение вируса. В лабораторию для исследования направляют свежие трупы мел­ких животных, от крупных животных — голову или головной мозг. В некоторых случаях до­пускается консервирование головного мозга в 50%-ном глицерине. Труп или голова должны быть тщательно упакованы в полиэтиленовый мешок, мозг — в банку с притертой стеклянной или резиновой пробкой, залитой парафином. Материал упаковывается во влагонепроницае­мую тару. Для вирусологических исследований пригоден только не консервированный мозг. Необходимо помнить, что вскрытие трупа, извлечение мозга и другие операции с патологи­ческим материалом следует проводить в условиях стерильности и строгого соблюдения мер личной профилактики: прочно фиксируют голову животного, защищают руки 2-мя парами перчаток (хирургические и анатомические), для защиты глаз надевают очки, а на нос и рот-6-слойную марлевую повязку.

Лабораторные исследования материала на бешенство проводят вне всякой очереди; результаты немедленно сообщают врачу хозяйства и главному врачу района (города).

Индикация и идентификация вируса. Порядок проведения исследований: из каждого отдела головного мозга левой и правой сторон (аммонова рога, мозжечка, коры полушарий и продолговатого) готовят по 4 мазка-отпечатки для ИФ и обнаружения телец Бабеша — Негри; с мозговой тканью ставят РДП; при отрицательных результатах ставят биопробу.

Обнаружение специфических телец-включений. Мазки-отпечатки окрашивают по Селлерсу, Муромцеву или другими методами. После окрашивания препараты просматрива­ют в световом микроскопе с иммерсионной системой. Положительным результатом считают наличие специфических телец Бабеша — Негри (при окраске по Селлерсу — четко очерченные овальные или продолговатые гранулярные образования розово-красного цвета в протоплаз­ме, при окраске по Муромцеву — светло-фиолетовые с темно-синими включениями тельца Бабеша — Негри, чаще они расположены вне нервных клеток.

Наиболее характерная особенность телец Бабеша — Негри — их внутренняя структура, по­зволяющая абсолютно точно дифференцировать их. Внутри видны маленькие зернышки — базофильные зернистости темно-голубого, даже черного цвета величиной 0,2-0,5 мкм.

Диагностическая ценность обнаружения телец-включений для доказательства заражения ВБ общепризнана. Однако и у здоровых животных, в особенности у кошек и белых мышей, имеются образования, присутствие которых может вызвать диагностические затруднения. В отдельных случаях в мозге кошки можно с уверенностью дифференцировать подобные включения от телец Бабеша — Негри, и здесь рекомендуется воспользоваться методами иден­тификации, в особенности ИФ. Равным образом и у собак, погибших в результате отравле­ния змеиным ядом или поражения электрическим током, можно найти тельца-включения, напоминающие тельца Бабеша – Негри. Тельца Бабеша — Негри выявляют лишь в 65-85% случаев бешенства, поэтому отсутствие их не является отрицательным ответом, и материал исследу­ется в других тестах (ИФ, РДП, биопроба).

ИФ. Один из основных тестов при диагностике Б. При высококвалифицированном вы­полнении получают в 99-100% совпадения с методом биопробы. Обычно в диагностической практике используют прямой метод ИФ, который проводят с применением антирабического флюоресцирующего Ig. Фиксацию препаратов в охлажденном (8-10°С) ацетоне проводят не менее 4-х ч. В качестве отрицательного контроля используют мазки-отпечатки головного мозга здоровых белых мышей. Учитывают результаты визуально в люминесцентном микро­скопе на основе оценки интенсивности свечения комплекса АГ-АТ. АГ ВБ выявляется в ви­де ярких желто-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины в клетках (чаще вне клеток). Диагноз считают установленным, если в нескольких полях зрения обнаружи­вают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленым свечением или множество мельчайших точек, В контроле подобного свечения не должно быть.

Для доказательства специфичности свечения комплекса АГ-АТ используют метод по­давления ИФ, который заключается в способности рабического АГ, связанного с нефлюоресцирующими AT, вторично не вступать в соединение с флюоресцирующими специфиче­скими AT. Для этого на фиксированные препараты, приготовленные из исследуемого голов­ного мозга, наносят 5%-ный антирабический нефлюоресцирующий Ig, выдерживают 30 мин при 37°С во влажной камере, промывают физраствором, а затем окрашивают флюоресци­рующим антирабическим Ig общепринятым прямым методом. В обработанных таким обра­зом препаратах флюоресценции не должно быть.

Метод ИФ дает возможность обнаруживать ВБ в клетках роговицы глаз и предвари­тельно поставить диагноз прижизненно: во время болезни животных, а также за 1-2 дня и более до клинического её проявления. Метод может быть использован для исследования по­дозреваемых в заболевании Б животных, а также клинически здоровых собак и кошек, по­кусавших людей и животных. Для этого готовят отпечатки с роговицы, соблюдая все прави­ла личной безопасности, раскрывают глазную щель животного большим и указательным пальцами и на слегка выпяченное глазное яблоко надавливают поверхностью предметного стекла, отступив 0,5 см от конца. Нужно следить, чтобы животное не моргало третьим ве­ком, так как со стекла удаляются эпителиальные клетки и получается некачественный мазок. С каждого глаза делают не менее 2 препаратов, содержащих по 2 отпечатка. Для кон­троля аналогичным образом готовят отпечатки роговицы от здоровых животных. Их можно приготовить в хозяйстве. Отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в тече­ние 4 ч при 4°С, упаковывают и отправляют в лабораторию. Окрашивают препараты, как при ИФ, по общепринятой методике.

В препаратах, полученных от больных животных или находящихся в конце инкубаци­онного периода болезни, в цитоплазме многих эпителиальных клеток наблюдаются разной формы ярко светящиеся гранулы разного размера — от пылевидных точек до 2 мкм и более. С целью получения достоверных результатов в каждом препарате просматривают по 50-100 клеток, а всего от животного — не менее 200-400 клеток. Результаты микроскопии считают положительными, если в отпечатках роговицы животного обнаруживают 11% и более кле­ток с характерными очажками свечения. Необходимо иметь в виду, что в препаратах от здо­ровых животных (контроль), вследствие аутофлюоресценции, могут встречаться единичные клетки с подобными по форме и свечению очажками.

Важно отметить, что ИФ дает возможность ускорить ответ при окончательной постанов­ке диагноза путем биопробы, поскольку диагноз при Б может быть установлен только на 4-8-й день после заражения мышей исследуемым материалом, а инкубационный период забо­левания мышей может достигать и 20 дн. ИФ может выявлять ВБ в тканях подчелюстной слюнной железы. Из подчелюстных слюнных желез готовят препараты-мазки, беря матери­ал не менее чем из 6 разных участков железы, так как распределение в ней вируса нерав­номерно. Часто, чтобы получить отпечаток, приходится делать сильный нажим, поскольку из-за обилия муцина на стекле остается мало материала.

Показана возможность идентификации ВБ в коже методом ИФ, С этой целью берут пробы кожи головы, а также фолликулы сенсорных и тактильных волос морды или лате­ральных сенсорных сосочков (на щеке собаки). Пробы хранят при -20 или -70°С. Из них де­лают криосрезы, которые обрабатывают флюоресцирующим глобулином. Результаты ИФ анализа, полученные при идентификации ВБ в коже, в высокой степени коррелируют с дан­ными, полученными при исследовании мозга того же животного. Показана близкая корре­ляция между обнаружением АГ вируса в пробах мозга и тканях губы методом ИФ.

РДП. Применяют для обнаружения АГ ВБ в неконсервированном головном мозге жи­вотных, павших от уличного бешенства, или мышат, используемых в биопробе. РДП ставят микро­методом на предметных стеклах, используя 1-1,5%-ныЙ агаровый гель по общепринятой ме­тодике. Наибольший процент положительных результатов выявляют при использовании следующего трафарета: А — аммонов рог (правая сторона); В — кора головного мозга (правая сторона); С — мозжечок (правая сторона);
Д — продолговатый мозг (правая сторона); + (плюс) — положительный контроль; — (минус) — отрицательный контроль; 1, 2, 3, 4 — лунки с разведе­нием специфического иммуноглобулина 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 соответственно

Из каждого отдела головного мозга с помощью пинцета готовят гомогенную пастооб­разную массу, которую и помещают в соответствующие лунки. От мышей исследуют весь головной мозг. Из отделов головного мозга левой стороны готовят АГ аналогичным образом ( на каждую экспертизу в общей сложности требуется 4 предметных стекла с агаровьм ге­лем). Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч. При наличии 1 или 2-3 линий преципитации между лунками, содержащими АГ и иммуноглобулин, реакцию считают положительной.

РДП проста по выполнению и специфична, но процент выявления вирусного АГ в ис­следуемом материале составляет 45-70. При исследовании головного мозга мышей, полу­ченного при положительной биопробе, РДП выявляет до 100% случаев. Отсутствие в иссле­дуемом материале телец Бабеша — Негри, специфической флюоресценции и отрицательная РДП не дают основания исключить наличие вируса. В этом случае окончательный диагноз ставят по результатам биопробы на белых мышах с последующей идентификацией вируса.

Биопроба. Принято считать, что биопроба является более эффективным методом, чем обнаружение телец Бабеша — Негри, ИФ и др. Однако и она в отдельных случаях оказыва­лась отрицательной, несмотря на подтверждение диагноза Б путем обнаружения телец-включении и ИФ. Процент отрицательных результатов по биопробе колебался от 1,3 до 12.

Сведения о различной эффективности биопробы могут быть объяснены рядом факторов: выбора экспериментального животного, количества их в опыте, способа заражения, способа и срока хранения материала до поступления в лабораторию. Может играть роль и явление интерференции инфекционных частиц неактивными частицами, если для инокуляции ис­пользуют недостаточно разведенный материал.

В мозге и слюнных железах лисиц и скунсов, павших от бешенства, обнаружено вещество, ингибирующее инфекционность вируса, что не позволяет провести диагностику болезни у этих животных методом внутримозгового заражения мышей. Наличие ингибирующего вещества в исследуемом материале не препятствует выявлению вирусного АГ методом ИФ; для скун­сов и лисиц это самый чувствительный метод диагностики.

Из животных всех видов (кролики, морские свинки, взрослые белые мыши и хомячки), использованных для биопробы, многие отдают предпочтение мышам-сосунам, поскольку они более чувствительны к разным штаммам ВБ и менее опасны в работе. Сирийские хо­мячки по чувствительности не уступают мышам, но они менее доступны.

РСК. Выявление специфического АГ в РСК при диагностике бешенства применяется реже, чем другие методы. Из присланного для исследования мозга готовят АГ. Для этого мозговую ткань (особенно богаты АГ, связывающим комплемент, кусочки таламуса и стволового от­дела мозга) растирают в вероналовом буфере в соотношении 1:10 и оставляют при комнат­ной температуре на 1 ч, после чего суспензию инактивируют при 56°С в течение 5 ч. Такая обработка убивает вирус и снимает антикомплементарность мозговой ткани, не повреждая специфический АГ. Суспензию центрифугируют 15 мин при 3500 мин- 1 из надосадочной жидкости, которая представляет собой материал для исследования на наличие АГ, готовят 2-кратно возрастающие разведения от 1:2 до 1:64 и используют для исследования в РСК.

ИФА. В ИФА специфическое окрашивание АГ в клетках мозга павших от бешенства животных выявляют как в свежевзятых, хранившихся в глицерине, а также в пробах, хранившихся без глицерина при 20°С 8-18 ч. Данный тест пригоден для рутинной диагностики бешенства у животных, для выявления АГ ВБ в тканевых парафиновых срезах при фиксации препаратов 10%-ным р-ром формалина с рН 5,3 и последующей обработки препаратов, заключенных в парафин, пепсином.

В отличие от РН на мышах и в культуре клеток ИФА позволяет выявить AT у животных в течение нескольких часов, ИФА — наиболее перспективный лабораторный метод обнару­жения AT и индикации самого вируса. Экспресс-методом диагностики бешенства является тех­ника захвата и метод ИФ для выявления АГ ВВ. Доказано, что метод выявления АГ ВБ в парафинизированных срезах пероксидазо-антиперокисдазным методом значительно пре­восходит метод ИФА. В 1987 г. создан набор для быстрой энзимиммунодиагностики бешенства (RREID), приемлемый для эпидемиологических и лабораторных исследований.

РН. Используется редко. Рекомендуется модификация с разведением ВБ и постоянной дозы γ-глобулина. ИН 2 указывает на АГ специфичность выделенного вируса.

Вариантная идентификация с помощью монАТ. С помощью монАТ к гликопротеинам ВБ селектированы АГ варианты, среди которых выделены фенотипически термола­бильные (авирулентные) варианты. При использовании 2-х групп монАТ показано, что штаммы дикования отличаются от шт. Fixe (Пастера), CVS, Flury HEP, ERA и «утиных» штаммов по АГ детерминантам. Изучение с помощью монАТ 7-ми штаммов, выделенных от больных Б людей, позволило выявить определенные отличия их от вакцинного штамма в отношении АГ детерминант.

Общепризнано, что AT отличия между дикими штаммами удается обнаружить, исполь­зуя монАТ против нуклеокапсидного AT N, которые реагируют с цитоплазматическими включениями зараженных вирусом клеток; против гликопротеина (G АГ), которые реаги­руют с мембранами инфицированных клеток, лизируют эти клетки в присутствии компле­мента и нейтрализуют вирус. В связи с возможной АГ вариабельностью поверхностного гликопротеина ВБ из различных географических зон в качестве протективного АГ исполь­зовали рибонуклеопротеин, характеризующийся консервативностью АГ структуры. Таким образом, не только G белок, но и РНП ВБ обладают протективной активностью.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Эти методы для бешенства нетипичны, поскольку используются только с целью проверки поствакцинального иммунитета. Для обнаружения и титрования поствакцинальных AT ис­пользуют РН, которую ставят общепринятым методом. В качестве АГ используют фиксиро­ванный ВБ. РН на клетках ВНК-21 была более чувствительной, чем непрямая ИФ при выяв­лении AT в сыворотках вакцинированных лис. Кроме того, предложены РТГА и ELISA.

РТГА. Пока еще не нашла широкого применения в диагностической практике из-за на­личия в сыворотках крови неспецифических ингибиторов, к которым ВБ высокочувствите­лен, а главное, ГА АГ, не подвергавшиеся достаточной очистке, обладали низкой чувстви­тельностью. Для приготовления ГА АГ ВБ предложено использовать шт. Москва, выращен­ный в культуре клеток ВНК-21, после его обработки сапонином с последующей очисткой и концентрированием. ГА отделяют от других компонентов вириона ультрацентрифугирова­нием. Полученный препарат имел степень очистки 99,92%, обладал высокой ГА активно­стью (1:128), хорошо сохраняющейся в течение 1 мес при рН 5-9.

Перед постановкой РТГА следует проводить умеренную 2-кратную трипсинизацию гу­синых эритроцитов для их сенсибилизации. При использовании 0,25%-ной взвеси трипси-низированных эритроцитов (лучше 10 7 клеток в 1 мл) чувствительность РТГА повышается в 4 раза. Для разбавления АГ и сывороток применяют боратно-солевой р-р (рН 9) с добавле­нием 0,4% бычьего сывороточного альбумина. Взвесь эритроцитов готовят в солевом р-ре с кислым рН, чтобы после соединения со смесью вируса и сывороток, рН которой 9, оконча­тельный рН установился бы в пределах 6,2. После внесения в лунки суспензии эритроцитов панель встряхивают, заклеивают прозрачной пленкой и ставят на лед. Результаты РТГА учитывают через 40-50 мин, а с эритроцитами 2-дн цыплят или макаки-резус — через 1-1,5 ч.

Разработан радиоиммунологический анализ, основанный на способности AT связы­ваться с меченым 125 1-АГ ВБ. Меченый IgG, выделенный из антирабической гипериммун­ной сыворотки, можно применять для обнаружения АГ ВБ твердофазным РИА. Лучшие ре­зультаты получены при использовании фосфатно-солевого р-ра (рН 6,0) с ионной силой 0,01 М и меченого IgG с активностью 200-250 тыс. имп./мин.

Твердофазный конкурентный РИА применим для выявления антирабических AT в сы­воротке и гибридомных супернатантах.

Дифференциальная диагностика. Необходимо исключить болезнь Ауески, при кото­рой больные животные неагрессивны, не бывает извращения аппетита. У собак исключают нервную форму чумы. Подозрение на бешенство может возникнуть при инфекционном энцефаломие­лите лошадей. Комплекс лабораторных исследований позволяет поставить точный диагноз на бешенство. Предложен новый метод дифференциации различных штаммов ВБ, основанный на рестриктазном расщеплении продуктов амплификации в ПЦР сегмента гена N.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

4.1. При возникновении подозрения на заболевание бешенством организации и граждане – собственники животных, юридические лица, индивидуальные предприниматели, граждане, заключившие охотхозяйственные соглашения и федеральные органы исполнительной власти при наличии подведомственных им охотхозяйств (заказников), особо охраняемых природных территорий федерального значения немедленно (в течение 24 часов) сообщают (устно или письменно) должностному лицу органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения о подозрении на заболевание животных бешенством, о случаях заболевания или необычном поведении диких животных (отсутствие страха перед человеком, неспровоцированное нападение на людей или животных) и случаях покуса сельскохозяйственных и домашних животных дикими хищниками, собаками или кошками, принимают необходимые меры к надежной изоляции подозрительных по заболеванию или покусанных животных.

Покусавшие людей или животных собаки, кошки и другие животные (кроме явно больных бешенством) подлежат немедленной доставке владельцем или специальной бригадой по отлову безнадзорных собак и кошек в ближайшее государственное ветеринарное учреждение для осмотра и карантинирования под наблюдением специалистов в течение 10 дней.

В отдельных случаях, по разрешению руководителя государственного ветеринарного учреждения, животное, покусавшее людей или животных, может быть оставлено у владельца, выдавшего письменное обязательство содержать это животное в изолированном помещении в течение 10 дней и представлять его для осмотра в сроки, указанные ветеринарным специалистом данного учреждения, осуществляющим наблюдение.

Результаты наблюдения за карантинированным животным регистрируют в специальном журнале и в письменном виде сообщают учреждению, где прививают пострадавшего человека, и в территориальное управление Роспотребнадзора по месту жительства пострадавшего.

По окончании срока карантинирования клинически здоровые животные после предварительной вакцинации могут быть возвращены владельцам — при условии их изолированного содержания в течение 30 дней. Животных, заболевших бешенством, уничтожают.

4.2. При возникновении подозрения на заболевание бешенством животных на объектах, подведомственных федеральным органам исполнительной власти в области обороны, в сфере внутренних дел, в сфере исполнения наказаний, в сфере государственной охраны и в области обеспечения безопасности, руководители ветеринарных (ветеринарно-санитарных) служб указанных органов немедленно (в течение 24 часов) сообщают (устно или письменно) о подозрении на заболевание бешенством животных должностному лицу органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации (на территории которого расположен соответствующий объект), осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения (подразделения); организуют и осуществляют отбор проб биологического материала и направляют эти пробы в лабораторию (испытательный центр), входящую в систему органов и учреждений государственной ветеринарной службы Российской Федерации, или иную лабораторию (испытательный центр), научно-исследовательские учреждения аккредитованные в национальной системе аккредитации для исследования на бешенство.

В случае невозможности осуществления отбора проб патологического материала руководители ветеринарных (ветеринарно-санитарных) служб органов, указанных в настоящем подпункте, оказывают содействие специалистам госветслужбы в проведении отбора и направления проб биологического материала.

4.3. Должностное лицо органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения (подразделения) в течение 24 часов после получения информации о подозрении на возникновение очага бешенства:

— выезжает на место предполагаемого эпизоотического очага, совместно со специалистами органов, уполномоченных осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический надзор определяет границы предполагаемого эпизоотического очага (квартиры, жилые дома, личные подворья граждан, животноводческие помещения, скотобазы, летние лагеря, участки пастбищ, охотничьи хозяйства, пастбища, часть лесного массива, урочища, другие территории и другие объекты, где обнаружены больные бешенством животные). Границы эпизоотического очага определяются с учетом эпизоотической ситуации, хозяйственных и ландшафтно-географических особенностей местности;

— проводит эпизоотологическое расследование с составлением акта;

— осуществляет отбор проб биологического материала и направляет указанные пробы в лабораторию (испытательный центр), входящую в систему органов и учреждений государственной ветеринарной службы Российской Федерации, или иную лабораторию (испытательный центр), аккредитованную в национальной системе аккредитации, для исследования на бешенство.

4.4. Должностное лицо учреждения (подразделения), подведомственного органу исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющему переданные полномочия в сфере ветеринарии, в течение 24 часов после получения информации о подозрении на возникновение очага бешенства, информирует о подозрении на заболевание бешенством руководителя органа местного самоуправления, на территории которого располагается предполагаемый эпизоотический очаг.

4.5. Должностное лицо органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации, осуществляющего переданные полномочия в сфере ветеринарии, или подведомственного ему учреждения (подразделения):

— любым доступным способом информирует население муниципального образования, на территории которого возник предполагаемый очаг бешенства и владельцев животных о требованиях настоящих Правил по предотвращению распространения бешенства

— уточняет количество имеющегося на учете поголовья кошек, собак, пушных зверей на территории муниципального образования, восприимчивых продуктивных животных в хозяйствах в зоне предполагаемого очага бешенства, наличие и необходимость дополнительной потребности в биопрепаратах для вынужденной специфической профилактики (вакцинации) бешенства

4.6. Руководитель органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации в области ветеринарии при получении им информации (уведомления) о возникновении подозрения на бешенство, немедленно (в течение 24 часов) обеспечивает направление в населенный пункт (местность), где расположен предполагаемый очаг бешенства, специалистов госветслужбы для:

— клинического осмотра животных и проведения эпизоотологического обследования предполагаемого эпизоотического очага;

— уточнения вероятных источников, путей заноса возбудителя болезни;

— уточнения границ предполагаемого эпизоотического очага и возможных путей распространения болезни,

— организации проведения комплекса мероприятий по предупреждению распространения и ликвидации болезни в случае подтверждения подозрения на бешенство (установления диагноза на бешенство).

Дата добавления: 2017-02-24 ; просмотров: 669 | Нарушение авторских прав

источник

Памятка по отбору
патматериала, крови, кормов и пересылки их
для лабораторного исследования

1. При необходимости определить или подтвердить причину заболевания животных при подозрении на инфекционную или инвазионную болезнь или на отравление ветеринарный врач (фельдшер) обязан взять соответствующий патматериал и направить его в ветлабораторию для исследования.

Кроме того, в лабораторию необходимо направить корма для различных видов исследования (бактериологическое и токсикологическое), а также кровь или другой материал от животных для биохимических анализов.

ВЗЯТИЕ И ПЕРЕСЫЛКА ПАТМАТЕРИАЛА
ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2. Патматериал необходимо брать стерильными инструментами.

3. Патматериал должен быть взят как можно раньше после смерти животного, особенно в теплое время года. Начавшееся разложение трупа может сделать его негодным для исследования.

Патматериал отправляют в лабораторию в неконсервированном виде или в замороженном состоянии с хладагентами. В том случае, если невозможно доставить его в лабораторию в течение ближайших 24-30 часов, патматериал посылают только в консервированном виде — 30% водный раствор хч глицерина (вода должна быть стерильная).

4. Взятие и пересылка разного вида патматериала (трубчатая кость, кишечник, внутренние органы, кал, кровь и другой жидкий материал, участки кожи)-см. стр. 156.

5. Взятие и пересылка патматериала при отдельных инфекционных болезнях – см. стр. 159.

ВЗЯТИЕ КРОВИ
ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

6. При взятии крови, нужно следить, чтобы кровь стекала по стенке в пробирку струей, а не каплями. Кровь, взятая каплями вспененная, скорее гемолизуется и часто дает неправильные результаты показаний при исследовании. Брать кровь надо по возможности утром, до кормления животных.

7. Объем: Для серологического исследования от крупных животных кровь берут в количестве 7-10 мл, а от мелких животных в объеме 2-4 мл.

8. Правило взятия: Взятую кровь необходимо выдержать около 1 часа при t 30-35 0С для свертывания, а затем выносить в прохладное помещение для отстаивания.

9. Сроки доставки: кровь должна быть доставлена в лабораторию в течение 1-х суток, и в исключительных случаях не позднее 3-го дня после взятия крови.

10. При пересылке сыворотки на большое расстояние, особенно летом, ее необходимо консервировать 5-% раствором карболовой кислоты на физиологическом растворе из расчета на каждые 9 мл сыворотки 1 мл раствора карболовой кислоты или 1-2 капли раствора на 1 мл сыворотки.

11. Для высушивания сыворотку наносят на фильтровальную бумагу размером 5х5 см в количестве 0,4 мл и выдерживают в комнате до полного высыхания. После этого на каждой бумаге с высушенной сывороткой делают соответствующие записи простым карандашом и завертывают в пергаментную бумагу, а затем упаковывают в конверт и в таком виде отсылают в лабораторию.

12. Оформление: к сопроводительному письму на пробы крови, направляемые в плановом порядке для серологического или гематологического исследования, прилагается опись проб в 2-х экземплярах.

Приложение 2 (Форма сопроводительного документа к пробам крови).

13. Маркировка: На каждой пробе сыворотки крови или крови необходимо указывать ее номер или кличку животного или фамилию владельца животного.

14. Упаковка и транспортировка: Пробирки с кровью или сывороткой крови плотно закрывают стерильными пробками и устанавливайте для пересылки в строго вертикальном положении (на лицевой стороне посылки вверху должна быть надпись «Осторожно – стекло!» и «Верх»). Зимой кровь упаковывают и пересылают так, чтобы они не замерзали.

УПАКОВКА И ПЕРЕСЫЛКА ПАТМАТЕРИАЛА

15. Посылаемый материал, особенно от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, должен быть тщательно упакован в отдельном запечатанном полиэтиленовом пакете, который помещают в плотный влагонепроницаемый и герметичный контейнер, чтобы предупредить возможность рассеивания инфекции в пути. Перед упаковкой материал необходимо завернуть в холст или мешковину, смоченную дезинфицирующим раствором, уложить в контейнер с адсорбирующим материалом, для защиты от повреждении и предотвращения утечки.

16. Материал, подозрительный на наличие особо опасных болезней(сап, сибирская язва, эмфизематозный карбункул, бруцеллез, туляремия, перипневмония крс, чума крс, чума свиней, псевдочума птиц, ящур и бешенство) упакованный как в п.15 необходимо пломбировать или опечатывать.

На взятый патматериал составляется сопроводительный документ. Приложение 1 (Форма сопроводительного документа к патологическому материалу).

ПОРЯДОК ОФОРМЛЕНИЯ И ОТПРАВКИ
СОПРОВОДИТЕЛЬНЫХ ДОКУМЕНТОВ К ПАТМАТЕРИАЛУ,
НАПРАВЛЯЕМОМУ НА ИССЛЕДОВАНИЕ

17. Первый экземпляр сопроводительного документа помещают в контейнер, а второй передают с нарочным.

18. В сопроводительном письме указывают: вид, пол и возраст животного, от которого взят материал для исследования, его номер, или кличка, на какое исследование посылается материал, краткое описание клинических признаков и патологоанатомических изменений.

19. Если нет возможности напечатать сопроводительные документы, напишите разборчиво или печатными буквами!

20. При посылке корма указывают его название, дату взятия образца, с какого угодья. Если корм получен с завода или заготовительного пункта, указывайте с какого именно, место взятия (склад, с кормушек и т. д.).

21. При необходимости к письму прилагают дополнительные сведения, в частности, какая помощь оказана животному, какие лекарственные средства применялись, с какого времени скармливался корм животным и т. д.

Источник: «Правила взятия патматериала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного исследования» от 1971г. (Ветеринарное Законодательство, т.2, стр.155).

Заведующая
диагностическим отделом

Форма сопроводительного документа к патологическому материалу

В _______________________________________________ ветеринарную лабораторию

При этом направляется для _________________________________________________

Патологический материал для (перечислить, какой) _____________________________

от _________________________________________, принадлежащ. _________________
(вид и возраст животного) __________________________________________________________________________
(название хозяйства, фермы, отделения, фамилия владельца животного)
__________________________________________________________________________

Дата заболевания животного _________________________________________________

Клиническая картина _______________________________________________________

Данные патологоанатомического вскрытия _____________________________________

Предположительный диагноз ________________________________________________

Дата отправки материала ___________________________________________________

К бесплатным относятся исследования на особо опасные болезни животных, птиц, рыб: сибирская язва (кроме асколизации кожевенного сырья), бешенство, туберкулёз, бруцеллёз (планово-профилактические исследования), трихинеллёз, лептоспироз всех видов животных; африканская и классическая чума, болезнь Тешена свиней; сап лошадей; грипп, пситтакоз (орнитоз) и болезнь Ньюкасла птиц; вирусная геморрагическая болезнь кроликов; геморрагическая септицемия карпов и фурункулез лососевых.

В случае, если вышеуказанные исследования связаны с племпродажей (племпокупкой), соревнованиями, экспортом и другими коммерческими целями, они проводятся на возмездной основе.

Форма сопроводительного документа к пробам крови

Отметка лаборатории Дата поступления материала_____________________
Доставлено проб_______________________________
Забраковано __________________________________

В ________________________________________________ ветеринарную лабораторию
Адрес: ____________________________________________________________________
При этом направляется _______ проб крови (сыворотки) от _______________________
(вид животных)
__________________________________________________________________________, принадлежащих_____________________________________________________________
(наименование хозяйства)
__________________________________________________________________________
(населенного пункта, района)

Для _________________________ исследования на ______________________________
(вид исследования) (какое заболевание)
Хозяйство, бригада, отара, гурт, табун _________________________________________ __________________________________________________________________________
(благополучное, неблагополучное, __________________________________________________________________________
вакцинировано, указать вакцину, дату вакцинации)
Исследование проводится — первично, повторно (нужное подчеркнуть)
Дата и результат предыдущего исследования: __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________
Дата взятия крови __________________________________________________________
Список животных, от которых взята кровь для исследования:

Наименование хозяйства, фермы, отделения, фамилия владельца животного

К бесплатным относятся исследования на особо опасные болезни животных, птиц, рыб: сибирская язва (кроме асколизации кожевенного сырья), бешенство, туберкулёз, бруцеллёз (планово-профилактические исследования), трихинеллёз, лептоспироз всех видов животных; африканская и классическая чума, болезнь Тешена свиней; сап лошадей; грипп, пситтакоз (орнитоз) и болезнь Ньюкасла птиц; вирусная геморрагическая болезнь кроликов; геморрагическая септицемия карпов и фурункулез лососевых.

Ветврач (фельдшер),
направивший пробы

Ветврач,
проводивший исследование

В случае, если вышеуказанные исследования связаны с племпродажей (племпокупкой), соревнованиями, экспортом и другими коммерческими целями, они проводятся на возмездной основе.

источник

Гистологическое исследование является важным, а иногда решающим в постановке диагноза. Его проводят в тех случаях, когда на основании эпизоотической ситуации, клиниче­ских признаков, картины вскрытия, бактериологического и других исследований установить диагноз невозможно.

Патматериал берут из разных мест подлежащих исследованию органов и тканей от свежих трупов или только что убитых живот­ных в чистую, сухую стеклянную или реже глиняную посуду.

Площадь кусочков органов и тканей, отбираемых для гистоисследования, не должна превышать 1-2 см 2 , толщина — 1 см. Из ка­ждого органа берут 3-4 кусочка, мелкие органы берут полно­стью. При наличии видимых невооружённым глазом изменений в ор­ганах или тканях кусочки вырезают на границе так, чтобы в них попали измененные и неизмененные участки. Обязательно’ надо взять кусочки органа с капсулой. Головной мозг можно брать полностью (целиком) или вырезать кусочки с учетом особенностей заболевания центральной нервной системы. Почки, надпочечники, яичники надо брать так, чтобы попали корковый и мозговой слои.

Отобранный патматериал сразу же помешают в фиксирующую жид­кость, количество которой должно быть в 10-15 раз больше, чем патматериала. На дно банки предварительно помещают слой ваты для равномерного пропитывания патматериала. Если патматериал в день взятия не отправлен в лабораторию, то через 24 часа фик­сирующую жидкость сменяют. Смену фиксирующей жидкости осущест­вляют необходимое число раз до завершения процесса фиксации, о чём судят следующим образом. Один из кусочков разрезают попе­рёк, если при этом вся поверхность разреза окажется равномер­ного серо-белого цвета, то фиксация завершена, если центр ку­сочка имеет розовый цвет, то смену жидкости продолжают с су­точным интервалом необходимое число раз. Следует помнить, что при фиксации в формалиновом растворе патматериал хранят в тем­ном месте или в темной посуде.

Для гистоисследования можно направить целые трупы, органы или. их части в нефиксированном виде. В таком случае должна быть обеспечена быстрая доставка их в лабораторию.

1. Раствор формалина 10%-ной концентрации. Это наиболее распро­страненная, недорогая и универсальная фиксирующая жидкость. Раствор готовят на водопроводной или колодезной воде. Для приготовления 1 литра раствора берут 100 мл 40%-ного- форма­лина и 900 мл воды.

Лучше, пользоваться нейтральным формалином. Способ его приготовления: к 1 л продажного формалина добавляют 100-200 г молотого мела или углекислой магнезии. Полученный раствор в течение первого дня несколько раз перемешивают. Затем дают отстояться, после чего формалин готов для приготовления ней­трального раствора.

2. Ацетон или спирт с эфиром поровну. Эти вещества применяют для фиксации материала при необходимости исследования на бе­шенство . Формалиновая фиксация для этой цели непригодна.

3.Спирт-ректификат 96°-ный является универсальной фиксирую­щей жидкостью, которую можно применять во всех случаях. С целью экономии спирта кусочки патматериала берут размером 5x5x5 мм.

Во избежание промерзания материала при перевозке в зимнее время его необходимо хорошо профиксировать на месте, затем пе­реложить в жидкость для транспортировки: 30-50%-ный раствор глицерина, приготовленный на 10%-ном растворе формальна или 70°-ного спирта.

Профиксированныи на месте патматериал можно пересы­лать в емкости меньшего размера. Фиксирующую жидкость и патма­териал в таком случае можно брать в соотношении 1:3-5, а не 1:10-15, как это требуется для фиксации свежего патматериала. Правила упаковки и пересылки патматериала для

Патматериал для гистоисследования можно направлять по почте и нарочным. В свежем (нефиксированном) виде патматериал на­правлять только с нарочным. В том и другом случае патматериал надо обязательно тщательно упаковывать, лучше в стеклянную по­суду или в полиэтиленовую пленку (но не в мешочек, который мо­жет разорваться по шву). Затем уложить в деревянный или метал­лический ящик, приняв при этом все меры предосторожности про­тив разрыва пленки и рассеивания возбудителей болезней во внешней среде. Упаковка должна гарантировать доставку патма­териала в целости. На верхней стороне ящика делает— надпись: «Осторожно — стекло», «Верх».

При отсутствии полиэтиленовой пленки материал можно упако­вывать в клеенку, брезент, холст, мешковину, смоченные креолином, лизолом или другим дезинфицирующим раствором.

При пересылке фиксированного или консервированного патматериала емкость герметически закрывают пробкой (стеклянной, ре­зиновой, пробковой или деревянной). Пробку закрепляют тонкой проволокой или шпагатом и заливают сургучом или смолой, вос­ком, парафином, менделеевской замазкой. На банки с кусочками органов и тканей наклеивают этикетки с указанием номера иго: клички животного, внутрь банки кладут этикетку из ватмана или картона, полотна с написанным тушью или простым (не химиче­ским) карандашом номером животного.

В банку лучше брать патматериал от одного животного. Если берут от нескольких животных в одну банку, то кусочки от каж­дого животного с этикеткой (номером) завязывают в кусочки мар­ли. Банки устанавливают в ящик и плотно обкладывают их ваток или паклей, бумагой, опилками, стружками, соломой, чтобы они не разбились при транспортировке. Ящик закрывают и опечатыва­ют.

Профиксированный на месте патматериал для пересылки можно пересылать в лабораторию без использования посуды. Для этого его следует обложить ватой, смоченной фиксирующей жидкостью, тщательно завернуть в клеенку, а затем упаковать в ящик.

Если надо пересылать целые органы или их куски толщиной бо­лее 3 см, то для лучшего проникновения фиксирующей жидкости следует сделать на органах разрезы и вложить туда вату.

Кости упаковывают в полиэтиленовую пленку или целлофан, клеенку, марлю, ткань, смоченные в каком-либо дезинфицирующем растворе.

При пересылке нефиксированного патматериала от животных, болевших особо опасными болезнями (сибирская язва, бешенство, шумящий карбункул, бруцеллез, чума, инфекционная анемия, туля­ремия, ящур) должна соблюдаться особая осторожность. Такой патматериал помещают э герметически закрываемую емкость. Крышку укрепляют, заливают сургучом или другим веществом. Емкость устанавливают в металлический ящик (коробку), который необхо­димо запаять, опломбировать или опечатать, а затем металличе­ский ящик поместить в деревянный и сделать надпись: «Осторожно — стекло», «Верх». Если такой материал отправляют с нарочным, то герметически закрытые банки можно тщательно упаковывать в деревянный ящик без металлической коробки.

К посылаемому патматериалу прилагают сопроводительный доку­мент на упаковку материала и протокол вскрытия трупа или ос­мотра убитого животного.

В сопроводительной на упаковку указывают, какой патматериал направлен, сколько, в какой посуде, какая фиксирующая жид­кость использована, род упаковки. Один экземпляр сопроводи­тельной отправляют запечатанным в конверт вместе с патматериалом, а второй остается у отправителя. В случае обнаружения в лаборатории или на кафедра несоответствия упаковки, количества патматериала с данными сопроводительного документа или обнару­жения порчи патматериала составляется акт. Копия такого акта отсылается отправителю патматериала.

источник