Меню Рубрики

Амитриптилин при болезни альцгеймера

Население планеты стареет, что приводит к распространению старческих болезней.

Медицинские исследования показывают, деменция (от латинских слов de – утрата, mentos – ум; безумие, слабоумие) неизлечима.

Но сопровождающие ее симптомы при правильно подобранном лечении успешно корректируются.

Степень развития болезни и особенности ее протекания являются решающими факторами при определении схемы лечения.

В ходе терапии возникает непереносимость лекарств, появляются сопутствующие заболевания, и тогда подбор средств изменится.

Нарушения работы головного мозга лечатся медикаментозно:

  1. Холинергическими препаратами, предотвращающими гибель холинергических нейронов и улучшающими работу головного мозга. Эффективными по лечению и соотношению побочных действий признаны: Донепезил, Галантамин, Ипидакрин и Ривастигмин (или Экселон).
  2. Средствами, влияющими на работу рецепторов NMDA (отвечают за регуляцию нейрональной возбудимости и сохраняют клетки коры головного мозга в рабочем состоянии) – такими, как Мемантин.
  3. Альтернативными лекарствами – ноотропами, нейролептиками, антиоксидантами и др.

Препараты при лечении деменции:

Прием одного из ингибиторов ацетилхолинэстеразы: Ривастигмина, Галантамина, Ипидакрина или Донепезила.

Назначение Мемантина — отдельно или в сочетании с ингибиторами.

Препараты назначаются на неопределенно долгое время или на всю оставшуюся жизнь.

На ранних стадиях дополняют лечение Гинкго Билоба, ноотропы — Кортексин, Фенибут и др.

При эмоциональных нарушениях: Феназепам, Сонапакс, Сероквель и др.

При психотических расстройствах: Галоперидол.

Антидепрессанты и транквилизаторы выписывают с осторожностью, учитывая все особенности заболевания пациента.

Самолечение таблетками от маразма недопустимо! Все дозы назначаются врачом, сочетание лекарств индивидуально!

Ривастигмин принимают в форме таблеток, через инъекции, в виде пластыря Экселона.

При его нанесении действующее вещество проникает в кровь через кожу.

При этом улучшается проведение импульсов по клеткам коры головного мозга. Эффективен при комплексном лечении.

У пластыря меньше побочных эффектов в сравнении с другими формами, но проявления тошноты, депрессии, судорог, брадикардии (замедление сердцебиения), психической слабости, аллергии в месте нанесения, возможны. У больных с весом меньше 50 кг возрастает риск нежелательных последствий.

Начальный прием составляет 4,6 мг с медленным увеличением. Дозу подбирают индивидуально, отслеживая состояние пациента. На чистую неповрежденную кожу прикрепляется только один пластырь с последующей заменой через сутки.

С пластырем нельзя загорать, посещать сауну или солярий. Не отклеивается при соприкосновении с водой, но при его использовании запрещены внешние источники тепла. Для приобретения средства нужен рецепт врача.

При невозможности больного уснуть врачи назначают средства, которые успокаивают центральную нервную систему и увеличивают продолжительность сна.

Димедрол при деменции с нарушением сна применяют все реже, он обладает обширным списком побочных эффектов, среди них трудности с мочеиспусканием, диарея, затрудненное дыхание, эпилептический приступ и т.д.

Препарат противопоказан страдающим сосудистыми заболеваниями, язвой желудка, проблемами с щитовидной железой, глаукомой.

Продается только по рецепту, курс приема не более 10-15 дней по 50 миллиграмм за 20-30 минут перед сном.

Димедрол признан устаревшим, есть средства эффективнее, например, Зопиклон.

Приобретается по рецепту. Сильнодействующий препарат, при этом побочных действий у него меньше: привкус металла во рту, тошнота, аллергия, сонливость, головокружения.

Принимать не больше месяца за полчаса до сна, для людей старшего возраста первоначальная доза – 3.75 мг. Она же максимальна при нарушениях работы печени.

В 2015 году американские ученые выявили: прием людьми снотворных без рецепта опасен. Многие из препаратов являются антихолинергическими, в то время как при деменции назначают лекарства обратного действия. Важно сообщать врачам о всех принимаемых снотворных!

Есть ли лекарства при деменции для подавления агрессии? От бреда и агрессивного поведения врачи выписывают нейролептики или антипсихотики, названные так по своей способности преодолевать расстройства психики.

Хлорпротиксен при деменции лечит нарушения поведения, неврозы, психоматические расстройства. Людям пожилого возраста назначается индивидуальная доза от 15 до 90 миллиграмм в сутки, которая делится на три приема.

Чем старше пациент, тем выше риск побочного действия препарата: усталость (особенно при высоких дозах), доходящая до апатии, дискинезия (непроизвольные сокращения мышц), есть случаи тромбоза вен.

Самые частые побочные эффекты таблеток от слабоумия – увеличение веса, сонливость, головная боль, обстипация (тяжёлый запор), ортостатическая гипотензия (понижение давления при вставании из лежачего или сидячего положения).

Сероквель или Кветиапин назначают пожилым людям по 25 мг в сутки (полтаблетки) с постепенным увеличением на 25-50 мг ежедневно до достижения эффективности.

При этом в инструкции по применению указано, что сероквель при деменции не применяется для лечения психозов, взаимосвязанных с деменцией.

Препарат увеличивает риск поражений сосудов головного мозга. Имеет большой список побочных явлений: увеличение веса (более 7%), сухость во рту, головокружение, сонливость, повышение холестерина. При отмене препарата наблюдается бессонница, тошнота.

Сонапакс при деменции или тиоридазин действует после двух недель приема от 30 до 100 мг в сутки. Дозу подбирает врач индивидуально, курсом в несколько недель, постепенно увеличивая количество лекарства, а затем снижая.

Побочные эффекты: дискинезия, сонливость, апатия, раздражительность, нарушение теплообмена, тахикардия (учащение сердцебиения), панцитопения (недостаток кровяных клеток), желтуха, аллергия.

Галоперидол при деменции эффективен при агрессии, но тревожное состояние он не снимает. Начальная доза 0,25-2,5 мг на два-три приема с увеличением на 0,25-1 мг.

Среди побочных действий: повышение температуры, вялость, задержка мочеиспускания, нарушение зрения и нормальной деятельности желудка.

Все рассмотренные антипсихотики доступны только по рецепту врача.

Таблетки от деменции улучшают способность сосредотачиваться, запоминать факты, сохранять ясный ум.

Кортексин назначается комплексно при познавательных нарушениях.

Вводят внутримышечно, растворив в 0,5 % новокаина, однократно 10 мг в течение десяти дней.

Нужно учитывать побочное действие не только кортексина – индивидуальная непереносимость, – но и новокаина.

Фенибут при деменции не угнетает нервную систему пожилых людей, при этом улучшает работоспособность, повышает координацию. Принимать две-три недели после еды 250-500 мг трехкратно. Среди побочных явлений возбуждение, тревожность, тошнота, зуд.

Оба препарата отпускаются в аптеках при предъявлении рецепта.

При постоянном унынии и подавленном состоянии пациентам с деменцией врачи выписывают антидепрессанты.

Амитриптилин при деменции помогает справиться с угнетением, сопровождающимся нарушением сна.

Пожилым людям назначается с осторожностью, побочные действия препарата обширны: лекарственный психоз, ухудшение работы сердца, нечеткость зрения, спутанность сознания.

Назначают от 25 до 100 мг в сутки на ночь, сразу после еды, внутрь, не разжевывая. Продолжительность приема от месяца до года.

Циталопрам действенен при нарушениях эмоциональных состояний людей старшего возраста. У него мало побочных действий: головная боль, сухость во рту, тошнота. Ежедневная доза его приема — 20 мг с увеличением до 40 при необходимости.

Без рецепта врача лекарства приобрести нельзя, могут вызвать ухудшение.

Нейтрализуя окислительные процессы в клетках, средства замедляют прогрессирование общих признаков деменции.

Мексидол – российский препарат, повышает устойчивость клеток к повреждениям, стимулирует кровообращение мозга. Мексидол для лечения деменции усиливает действие антидепрессантов.

Принимают первоначально два раза в день от 125 до 250 мг, постепенно увеличивая до трех раз, максимум в сутки можно 800 мг. Возможны индивидуальные реакции организма в виде расстройства пищеварения и аллергии.

Гингко билоба — антиоксидант растительного происхождения, улучшает эластичность сосудов, восстанавливает ткани, предотвращает гибель нейронов. Признан как народной, так и официальной медициной.

Есть мнение врачей об эффективности на первоначальных стадиях деменции, особенно сосудистой. Принимать утром, после еды по одной капсуле в течение месяца.

Противопоказан при совместном приеме с лекарствами, разжижающими кровь. Может привести к головокружению, аллергии, расстройству желудка.

Оба средства безрецептурные.

При неоставляющем чувстве страха и беспокойстве пациентам выписывают транквилизаторы и седативные средства.

Подавляя активность нервной системы, препараты приводят к успокаивающему и расслабляющему эффекту. Принимают их с осторожностью, есть риск обратного эффекта: неадекватное поведение, галлюцинации.

Феназепам угнетает центральную нервную систему, снижая напряженность больных, восстанавливает сон, улучшает состояние при перепадах настроения.

Как и все бензодиазепиновые лекарства, вызывает привыкание, поэтом курс приема короткий и одноразовый – 14 дней по 0,5-1 мг три раза в день при среднем количестве от 1,5 до 5 в день.

Побочные явления при приеме: дезориентация, усталость, нарушения координации и внимания, подавленное настроение.

Афобазол, в отличие от феназепама, приобретается без рецепта врача. Не обладает побочными действиями, кроме повышенной чувствительности к препарату. Снимает психологический дискомфорт и тревогу, повышает объем внимания и памяти.

Курс может быть длительным (из-за отсутствия привыкания): трехкратно после еды по 10 мг в течение 4 недель, но с перерывом на месяц.

Однако специалисты отмечают его избирательное действие, некоторым Афобазол при деменции не помогает.

Для лечения в комплексе, особенно для профилактики и на ранних стадиях заболевания, дополнительно могут применяться биологические активные добавки.

Медиками доказано, рыбий жир замедляет угасание когнитивных (познавательных) функций мозга. Но положительный эффект был отмечен только у здоровых пожилых людей, у группы больных деменцией его не зафиксировали.

Назначение большого количества витамина Е, наоборот, оказалось бесполезным для профилактики деменции, но замедлило прогрессирование болезни.

Исследования, связанные с приемом лецитина пациентами со старческим слабоумием, выявили улучшение работы мозга, стабилизацию нервной системы, укрепление памяти, внимания.

Растительный лецитин по своим показателям признан лучше животного.

При начальных признаках болезни пьют настойки женьшеня, элеутерококка, лимонника.

Продаются без рецепта. Стакан черники ежедневно восстанавливает память.

Тревожность снимает корень заманихи, настоянный на спирте в пропорции 1 к 10.

Пьют по двадцать капель трижды в день. При нарушении сна заваривают мяту в кипятке 10 минут, принимая по полстакана утром и на ночь. Популярно принятие ванн с настоем из корней шиповника и веточек можжевельника.

При лечении познавательных нарушений среди немедикаментозных методов ученые признают средиземноморскую диету, включающую:

  • овощи и оливковое масло — ежедневно;
  • морепродукты – 2 раза в неделю и больше;
  • красное вино – не более 150 г в день.

Профилактика заболевания имеет большое значение, так как деменция не поддается лечению. Ее появление необратимо влечет за собой прохождение всех стадий — от легкой до тяжелой.

Выявление при первых признаках и адекватное лечение тормозит протекание болезни. Грамотно подобранные лекарства помогают справиться с признаками недуга, улучшая качество жизни больных и окружающих их людей.

Новые лекарства при лечении деменции:

источник

Амитриптилин – синтетическое лекарственное средство, которое применяется для лечения депрессий, нервных расстройств, психогенной анорексии и иных патологий, вызванных психологическими нарушениями. Принадлежит к трициклическим антидепрессантам.

Амитриптилин выпускается многими фармацевтическими компаниями, как под аналогичным торговым названием, так и под другими названиями: Амирол, Триптизол, Эливел, Амизол и т.д.

Действующим веществом во всех препаратах является амитриптилина гидрохлорид. Таблетированные формы выпускаются с содержанием 10 и 25 мг активного компонента в 1 таблетке, а инъекционные формы – 20 мг амитриптилина в каждой ампуле (2 мл).

Помимо действующего компонента, в составе имеются и вспомогательные вещества. Они отличаются у разных производителей. Наиболее часто в составе инъекционного раствора имеется глюкоза и вода, а в таблетках – крахмал, МКЦ, лактозы моногидрат, тальк и магния стеарат.

Амитриптилин обладает антидепрессивным, антихолинергическим, противоязвенным, антисеротиновым, некоторым анальгетическим, седативным, тимолептическим действием, а также устраняет энурез.

Антидепрессивное действие лекарства проявляется за счет его способности подавлять обратный нейрональный захват норадреналина, серотонина и дофамина мембранами пресинаптических нейронов.

Накопление этих нейромедиаторов обеспечивает улучшение психологического состояния и исчезновение признаков депрессии.

Нужно учитывать при применении препаратов этой группы так называемый «антидепрессивный порог». Он проявляется индивидуальным восприятием препарата, в результате чего для каждого пациента необходим подбор дозы лекарства, которая снизит захват нейромедиаторов в 5-10 раз.

Если этого достигнуто не будет, то антидепрессивное действие не проявится, а будут присутствовать только неспецифические эффекты и побочные действия. Антидепрессивный эффект при лечении препаратом проявляется не ранее чем через 2-3 недели постоянного приема.

Благодаря проявляемому тимолептическому действию происходит улучшение самочувствия и настроения.

Антихолинергическое действие обеспечивается сильным сродством к м-холинорецепторам. Благодаря сродству к H1-гистаминовым рецепторам и обладанием альфа-адреноблокирующим действием препарат оказывает сильное седативное действие.

Противоязвенное действие медикамента обеспечивается за счет его свойства блокировать H2-рецепторы в желудочных клетках. При этом наблюдается устранение болезненности и ускорение заживления язвенно-эрозивных поражений слизистой ЖКТ.

Анальгетическое действие лекарства связано с увеличением концентрации моноамином, в частности серотонина, в ЦНС.

Устранение недержания мочи в ночное время обеспечивается антихолинергическим действием, которое увеличивает способность мочевого пузыря растягиваться, а также бета-адренергической стимуляцией, которая приводит к повышению тонуса сфинктера.

Пока не выяснен механизм действия препарата при борьбе с булимией. Амитриптилин эффективен при булимии с депрессией и без нее.

Амитриптилин хорошо и быстро всасывается при попадании в ЖКТ. Максимальное содержание в крови наблюдается спустя 2-6 часов, время полувыведения составляет около 10-26 часов. С белками крови действующее вещество связывается очень хорошо, практически на 95%.

Метаболизируется лекарство в печени, образуя активные и неактивные метаболиты. Выведение лекарства обеспечивают почки. Полное выведение из организма происходит за 1-2 недели.

Препарат проникает через гистогематические и плацентарный барьеры, а также в грудное молоко.

Показания к применению Амитриптилина следующие:

  • депрессии разной этиологии (невротической, реактивной, эндогенной, лекарственной, инволюционной, при алкогольной абстиненции, при поражениях головного мозга);
  • депрессии, сопровождающихся тревогой, подавленностью, ажитацией, нарушениями сна, чувством безнадежности, понижением самооценки, тоской и т.д.;
  • эмоциональные расстройства смешанного характера;
  • фобические расстройства;
  • изменения поведения психологического характера;
  • психогенная булимия;
  • детский энурез;
  • булимический невроз;
  • шизофренические психозы;
  • хронические болевые синдромы неврогенного характера.

Амитриптилин имеет большое количество противопоказаний, которые заметно ограничивают возможность его применения, запрещен прием лекарства при:

  • инфаркте миокарда в остром и восстановительном периоде;
  • острых заболеваниях печени;
  • сердечной недостаточности;
  • нарушениях функций проводимости миокарда;
  • гипертонии;
  • обострениях язвы желудка и 12-перстной кишки;
  • нарушениях функционирования почек;
  • гипертрофии предстательной железы;
  • паралитической непроходимости кишечника;
  • пиролостенозе;
  • атонии мочевого пузыря;
  • беременности;
  • кормлении грудью;
  • детском возрасте менее 6 лет (таблетки) и 12 лет (инъекционные формы);
  • гиперчувствительности к составляющим препарата;
  • одновременном приеме ингибиторов МАО, а также при перерыве менее 2 недель после их приема.

Особую осторожность при применении лекарства следует соблюдать также при:

  • алкоголизме;
  • бронхиальной астме;
  • эпилепсии;
  • угнетении процесса кроветворения;
  • глаукоме;
  • шизофрении;
  • маниакально-депрессивном психозе;
  • внутриглазной гипертензии.

Амитриптилин в таблетках принимают внутрь во время или сразу по окончанию приема пищи.

Дозировка препарата подбирается в строго индивидуальном порядке. Начальная суточная доза обычно составляет от 50 до 75 мг, разделенных на 2-3 приема.

Дозу препарата необходимо постепенно повышать до достижения наилучшего лечебного эффекта. Обычно достаточно довести прием до 150-200 мг в сутки, однако в некоторых случаях может быть необходим прием 300 мг и больше (до максимальной переносимой дозы). При этом суточную дозу также разделяют на 3 приема, с применением большей части дозы на ночь.

Через 2 недели-месяц после достижения необходимой выраженности лечебного эффекта дозы лекарства начинают постепенно снижать. Резко отменять препарат запрещено из-за возможного развития синдрома отмены.

Если же симптомы депрессии начинают возвращаться, то прием лекарства в высоких дозах начинают вновь. Препарат отменяют (постепенно) при отсутствии успехов лечения за месяц терапии. Пожилым пациентам рекомендуется не превышать суточную дозу 100 мг.

При выраженных тяжелых депрессиях прием препарата осуществляется внутривенно или внутримышечно по 10-40 мг до 4 раз в день.

Максимально допустимая суточная доза – 150 мг. Через 1-2 недели следует постепенно замещать инъекции таблетированной формой препарата.

Для избавления от мигреней и хронических неврогенных болей препарат принимают по 12,5-100 мг в сутки.

Для лечения детского энуреза препарат назначается по 10-25 мг перед сном. Доза рассчитывается индивидуально исходя из рекомендации приема 2,5 мг на кг веса ребенка.

При детских депрессиях назначают по 1,5 мг на кг массы тела.

При чрезмерном употреблении Амитриптилина возможно развитие передозировки. Так как у всех порог чувствительности к препарату разный, то невозможно точно назвать количество лекарства, которое спровоцирует это состояние.

При передозировке отмечаются: дезориентация, одышка, повышение температуры, головокружения, расширение зрачков, нарушения сознания, аритмия, повышенная сонливость, гипотензия, угнетение дыхания, галлюцинации, возбуждение, судороги, кома.

При возникновении каких-либо симптомов передозировки прием препарата немедленно прекращают и обращаются в медицинское учреждение за помощью. Проводится промывание желудка, нормализация водно-электролитного баланса и артериального давления, симптоматическая терапия.

Амитриптилин при приеме в большом количестве вызывает многочисленные побочные действия. Его прием может спровоцировать развитие проблем практически со всеми органами и системами.

Из-за блокирования м-холинорецепторов может:

  • повышаться внутриглазное давление;
  • возникать сухость во рту;
  • нарушаться зрение;
  • задерживаться мочеиспускание;
  • возникать запор и непроходимость кишечника;
  • усилиться потоотделение;
  • развиться парез аккомодации;
  • повыситься температура тела.

Эти побочные эффекты обычно пропадают после привыкания к препарату или в результате снижения дозы.

Также возможны и другие побочные эффекты, вызываемые комплексным проявлением всех действий препарата:

  • нарушения концентрации внимания;
  • чрезмерная сонливость;
  • кошмары;
  • головокружение;
  • дизартрия;
  • тахикардия;
  • изменения в картине крови;
  • тошнота;
  • анорексия;
  • двигательное возбуждение;
  • симптомы сердечной недостаточности;
  • галлюцинации;
  • изжога;
  • аритмия;
  • шум в ушах;
  • стоматит;
  • боль и дискомфорт в эпигастрии;
  • изменение окраски языка;
  • снижение либидо;
  • нарушение вкуса;
  • глюкозурия;
  • отек яичек;
  • ангионевротический отек;
  • рост молочных желез;
  • увеличение веса;
  • выпадение волос;
  • галакторея;
  • лабильность АД;
  • увеличение лимфатических узлов.

При длительном приеме высоких доз препарата вероятно развитие кардиотоксического действия.

Амитриптилин снижает внимание и вызывает сонливость. Из-за этого его прием не рекомендуется при вождении транспорта, а также выполнении работ, требующих повышенной концентрации внимания.

Во время применения Амитриптилина употребление алкоголя категорически запрещено, так как это может привести к серьезным последствиям.

Это объясняется схожестью механизмов действия препарата и алкоголя, что выражается в взаимном усилении влияния на организм и максимально выраженном токсическом воздействии.

При одновременном употреблении спиртного и лекарства может сильно подниматься температура и артериальное давление, нарушаться сердечный ритм, возникать паралитическая непроходимость.

Кроме того, из-за угнетающего действия на дыхательный центр возможно нарушение дыхания вплоть до полной его остановки и наступления смерти.

Также одновременное применение алкоголя и Амитриптилина очень негативно воздействует на печень и почки. Может развиться токсический некроз печени и сильное нарушение функционирования почек.

Запрещен прием препарата при наличии серьезных нарушений функционирования этих органов.

Запрещено применение препарата при беременности и лактации. Таблетки принимаются в возрасте от 6 лет, а инъекционный раствор – от 12.

Амитриптилин достаточно старый препарат, поэтому отзывов, как у врачей, так и у пациентов о нем достаточное количество. В своем большинстве они положительные, но есть и нюансы.

Амитриптилин – один из самых эффективных антидепрессантов. При его приеме у пациентов отмечается улучшение настроения практически после первых доз, а через неделю лечения наблюдается повышение самооценки.

После полного курса лечения можно отметить исчезновение ночных кошмаров, улучшение качества сна и пропадание суицидальных наклонностей.

Амитриптилин дает достаточно хорошие результате при лечении депрессий и других психоневротических расстройств. Некоторую сложность представляет подбор оптимальной дозы. Очень важно информировать пациентов о возможных побочных явлениях и синдроме отмены.

Мария Карловна, врач общей практики

Мне назначили Амитриптилин для избавления от паники, анорексии и депрессии. Первые улучшения начала замечать спустя 10 дней приема.

Теперь живу и наслаждаюсь жизнью, перестала бояться выходить на улицу и ездить в транспорте, улучшился сон и появился аппетит.

Советы по приему Амитриптилина от пациентов:

  • принимать только по назначению врача;
  • внимательно ознакомиться с инструкцией до начала приема и сохранять ее весь период лечения;
  • не превышать рекомендуемых доз;
  • повышение дозы осуществлять постепенно;
  • ни в коем случае не принимать одновременно с алкоголем.
  • высокая эффективность;
  • доступная цена.
  • много противопоказаний и побочных эффектов;
  • рецептурная продажа.

Средняя цена Амитриптилина в аптеках:

  • табл. 25 мг №50 – 29 -60 рублей;
  • табл. 10 мг №50 – 20-50 рублей;
  • 2мл ампулы №10 – 25-67 рублей.

Отпуск препарата из аптек осуществляется строго по рецепту врача.

Выпускается достаточно много аналогов Амитриптилина, имеющих аналогичное действующее вещество: Веро-Амитриптилин, Никомед Дамилена малеинат, Саротен ретард, Эливел, Амизол, Эливел, Амирол.

В некоторых случаях возможна замена на препарат этой же фармакологической группы: Клофранил, Доксепин, Мелипрамин и др. Такая замена препаратов может осуществляться только лечащим врачом.

источник

Некоторые препараты, назначаемые пациентам с депрессией, болезнью Паркинсона и недержанием мочи, могут быть связаны с риском развития деменции. Группа британских ученых призывает врачей выписывать эти лекарства только в самых необходимых случаях

Результаты исследования, проводившегося учеными из университета Восточной Англии (University of East Anglia), опубликованы в Британском медицинском журнале (British Medical Journal). Авторы работы изучили медицинские карты 40 000 пациентов с деменцией в возрасте старше 65 лет и почти 300 000 не страдающих от деменции. Затем они посмотрели, какие препараты им выписывались в течение последних 20 лет, чтобы выяснить, существует ли связь между принимавшимися антихолинергическими препаратами и последующим развитием деменции у пациентов.

Деменция – не болезнь, а группа симптомов, которые включают нарушение памяти, способности к мышлению и социальным взаимодействиям. Тяжесть этого состояния приводит к тому, что люди, страдающие от него, становятся неспособными выполнять ежедневные рутинные дела. Частный случай деменции – болезнь Альцгеймера.

Исследования рассмотрело последствие приема трициклических антидепрессантов, таких как амитриптилин, который также выписывают для снятия боли и улучшения сна, а также одного из препаратов класса селективных ингибиторов обратного захвата серотонина (СИОЗС), пароксетина. Также в спектр интереса ученых попали препараты против недержания мочи (оксибутинин) и болезни Паркинсона (проциклидин).

Их прием оказался связан с повышением риска развития деменции на 30%. То есть, если у человека риск деменции изначально составлял 10% в течение любого одного года, при длительном лечении указанными лекарствами он повышался до 13%.

Амитриптилин ранее называли одним из наиболее эффективных антидепрессантов. Известно, что только в Англии эти препараты регулярно принимают 1,5-2 миллиона человек, хотя они могут вызвать кратковременную дезориентацию и повышать риск внезапных падений. Каждый пятый человек из принимающих антидепрессанты принимает именно антихолинергические препараты, обычно — амитриптилин.

В то же время, антигистаминные и некоторые гастроэнтерологические препараты оказались в данном случае вне подозрений, хотя они также являются антихолинергическими.

Исследователи предупреждают, что отчасти проблема может быть связана с тем, что многие пожилые люди сейчас все чаще принимают «коктейль» из препаратов от разных заболеваний.

«За последние 20 лет число пожилых людей, принимающих пять и более препаратов, увеличилось в четыре раза. Многие из этих препаратов имеют определенное антихолинергическую действие и в свете результатов исследования мы должны рассмотреть вопрос о том, перевешивают ли риски деменции пользу от приема “коктейля” выписанных препаратов», — утверждает доктор Иэн Мэйдмент (Ian Maidment), из Астонского университета (Aston University).

Он считает, что врачи и фармацевты должны стараться снижать лекарственную нагрузку на пациентов, когда это возможно. Назначая препараты, они должны убедиться, что польза превышает потенциальный вред антихолинергических препаратов.

Лекарства от различных расстройств могут иметь общий принцип действия — блокировать такой нейромедиатор, как ацетилхолин, который оказывает влияние на мочевой пузырь, желудок, глаза и сердце, но также присутствует в мозге и важен для процесса познания, обучения и сохранения памяти.

Исследователи не утверждают, что данные препараты непосредственно вызывают деменцию. Ранние симптомы деменции включают в себя депрессию и недержание мочи, поэтому, поэтому возможно, что препараты иногда назначают пациентам, у которых уже были ранние стадии деменции. Тем не менее, наблюдался и «эффект дозы» — чем больше таких таблеток принимали пациенты, тем больше была вероятность, что у них будет диагностирована деменция.

При этом авторы исследования также предупредили, что пациенты не должны самостоятельно прекращать принимать данные препараты без консультации со своим лечащим врачом.

источник

О том, что мы, психиатры, назначаем пациенту с деменцией, я писал здесь: http://dpmmax.livejournal.com/369976.html И о том, что обычно назначают неврологи и терапевты — тоже. Теперь пора (знаю, знаю, что уже давно) коснуться того, чего дементному пациенту назначать не следует.

Транквилизаторы (они же — анксиолитики).

Поскольку такие пациенты часто бывают беспокойными, суетливыми, могут испытывать тревогу, плохо спать по ночам — у родственников, а также у ряда врачей, которые не в курсе всех тонкостей психофармакологии, возникает соблазн дать что-нибудь успокоительное. А что считается эффективным успокоительным? Ну, если не считать народных средств вроде валерьянки или пустырника? Правильно, транквилизаторы.

И чаще всего — транквилизаторы (зажмурьтесь, сейчас буду ругаться) бензодиазепинового ряда. То есть — феназепам, диазепам (он же реланиум, он же релиум, он же сибазон), элениум, тазепам, реладорм, радедорм и всё такое прочее.

А потом сильно удивляются: а что это пациент не успокоился, а вовсе даже наоборот — подурнел, пошустрел, а то и вовсе галлюцинирует на разные темы? А потому. У людей старше 60 лет возрастает риск неадекватной, искаженной реакции на транквилизаторы, вплоть до психомоторного возбуждения, спутанности сознания и делирия (да-да, почти как при белой горячке, только совсем без водки). Я не утверждаю, что такая реакция наблюдается у всех, но положа руку на сердце — оно вам надо, играть в такую психиатрическую рулетку?

Бензонал, фенобарбитал. Дешёвое и сердитое средство, когда речь заходит о лечении эпиприступов. А фенобарбитал ещё и снотворным эффектом обладает. Всё бы ничего, но. Сон-то он, возможно, улучшит. А заодно и деменцию углубит, особенно при постоянном приёме. Кстати, как и транквилизаторы. Внимание! Я говорю о влиянии этих лекарств на пациентов с уже развившейся деменцией. На людей в полном расцвете интеллекта они действуют иначе.

Бывает такое, что невролог или терапевт назначает дементному больному амитриптилин: плаксивость уменьшить, сон наладить. А потом — да, опять сюрприз. У дедушки почему-то задержка мочи. И сердечко стало пошаливать. А то и делирий наступил. Коллеги, прошу вас, не назначайте амитриптилин пожилым людям вообще! Лучше не поленитесь прислать человека к нам. Мы подберём что-нибудь из более новых и более безопасных антидепрессантов. Снова должен отметить особо: амитриптилин сам по себе неплох. И сравнительно недорог. Но далеко не всем и далеко не во всех ситуациях он подходит.

Он же ноотропил. А с ним за компанию — ещё и фенотропил. Тоже из тех препаратов, выписать которые нашему дементному пациенту так и норовят неврологи или терапевты. Не надо, пожалуйста! Есть у этих препаратов риск так простимулировать нашего больного в деменции, что родственники потом будут его по всему городу наперегонки с полицией и спецбригадой отлавливать.

И ещё несколько слов о нейролептиках.

Да, мы их нередко используем при лечении дементных больных. Бывают такие ситуации, когда бонусом к слабоумию идут бред или галлюцинации, когда пациент бывает настолько беспокоен (до откровенного буйства), что без нейролептиков не обойтись. Но. Во-первых, лучше стараться назначить новые, атипичные нейролептики, у которых риск возникновения побочных эффектов заметно ниже, чем у классических. Во-вторых, стоит учитывать, что эти пациенты чаще, чем прочие, дают на приём нейролептиков, особенно классических, осложнения в виде нейролептического синдрома — вплоть до злокачественной нейролепсии. А уж если деменции сопутствует болезнь Паркинсона — тут, скорее всего, придётся вовсе обойтись без этой группы препаратов.

источник

Новое исследование убедительно доказывает, что антихолинергические препараты могут повышать риск развития деменции у пожилых людей.

Исследуемые препараты принимает примерно пятая часть пожилого населения при различных заболеваниях. Они включают в себя популярные антигистаминные препараты, которые продаются без рецепта в качестве снотворного, например, димедрол (Benadryl, McNeil-PPC Inc) или противоаллергические, такие как — хлорфенирамин; оксибутинин и толтеродин для гиперактивного мочевого пузыря; трициклические антидепрессанты, такие как амитриптилин или доксепин, даже при использовании в малых дозах для профилактики мигрени или невропатической боли.

Исследование, опубликованное в Интернете в JAMA Internal Medicine 26 января, было проведено группой специалистов под руководством Шелли Грей, PharmD, Университет штата Вашингтон, Сиэтл.

«Мы нашли очевидную связь доза-реакция между приемом антихолинергических препаратов и риском развития деменции: чем более частый прием, тем больше риск развития заболевания», прокомментировала профессор Грей для Medscape Medical News.

Даже низкие дозы могут иметь последствия
Люди, принимающие минимально эффективную дозу данных препаратов в течение длительного времени, квалифицированные как имеющие высокую частотность приема, оказались подвержены большему риску развития слабоумия по сравнению с теми, кто не принимает такие лекарства.

«Это не частый прием», — заметила профессор Грей. «Многие из этих препаратов используются людьми для лечения хронических заболеваний, то есть на протяжении длительного времени, — а это — категория наивысшего риска для развития деменции. Несмотря на то, что уже предыдущие исследования связывали антихолинергические препараты с возникновением когнитивных проблем, большая часть населения и даже самих врачей не знают об этом».

«Антихолинергические препараты имеют и другие, более признанные, побочные эффекты, такие как сухость во рту, запор и задержка мочи, поэтому уже постепенно отходят от их использования, но они все еще очень часто назначаются и покупаются без рецепта».

Хотя данное исследование расширяет предыдущие выводы о связи между антихолинергическими препаратами и когнитивными проблемами, оно не доказывает причинно-следственную связь, потому что по-прежнему основывается на данных одних наблюдений.

«Причинно-следственную связь невозможно доказать данными, полученными в результате наблюдений», — добавила профессор Грей. «Я бы сказала, что мы не доказали, что эти препараты вызывают слабоумие, но наши результаты, безусловно, укрепляют опасения по поводу этого вопроса. Хотя есть понимание того, что данные препараты могут вызвать кратковременную сонливость или спутанность сознания, что и указано в инструкции, нет никакого упоминания о долгосрочных отрицательных последствиях для мыслительных процессов, и, соответственно, недостаточно информирование по этому вопросу. Фармацевт или врач могут ничего не знать о вреде данных препаратов. Осведомление по этому вопросу является ключевым, чтобы и пациенты, и врачи стремились использовать, по-возможности, альтернативные методы лечения».

Профессор Грей отметила, что все исследования проводились на пожилых людях. «Отсутствуют данные о том, как антихолинергические препараты могут повлиять на молодых, но лично я не стала бы принимать их», — добавила она.

Настоящее исследование проводилось с участием 3434 пожилых людей (средний возраст которых составлял 73 года). График приема лекарственных препаратов за последние10 лет был записан с их аптечных рецептов, и в течение семилетнего периода каждые 2 года для них проводился скрининг на выявление деменции.

Около 20% испытуемых принимали антихолинергические препараты. Исследователи разработали минимальную эффективную дозу каждого антихолинергического препарата, а затем рассчитали совокупное воздействие, которое было определено как общая стандартная суточная доза (TSDD) препаратов, выдаваемых в течение последних 10 лет.

За период наблюдения, у 797 участников (23,2%) развилась деменция, а у 637 из них (79,9%) развилась болезнь Альцгеймера.

В течение 10-ти лет наблюдалась кумулятивная связь доза-реакция, характерная для деменции. Аналогичные результаты получены по болезни Альцгеймера.

TSDD антихолинергических лекарственных средств и риск развития деменции (по сравнению с неприемом данных лекарств)

Легкая и умеренная деменция
Прогрессирование заболевания
TSDD коэффициент риска (95% доверительный интервал)
1 — 90 0.92 (0.74 — 1.16)
91 — 365 1.19 (0.94 — 1.51)
366 — 1095 1.23 (0.94 — 1.62)
>1095 1.54 (1.21 — 1.96)

Профессор Грей объяснила, что прием минимальной суточной эффективной дозы одного из антихолинергических препаратов каждый день в течение 3-х лет — представляет наивысшую категорию риска для людей. «Вы также можете попасть в эту высшую категорию, принимая эту дозу спорадически в течение более длительного периода, или, принимая высокие дозы в течение более короткого периода».

«Наиболее достоверные результаты»
Соавтор статьи, Нолл Л.Кэмпбелл, профессор фармацевтики, из Университета Пердью, Вестлаффает, Индиана, сообщил Medscape Medical News, что данное исследование предоставило «убедительнейшие доказательства того, что антихолинергические препараты вызывают слабоумие». Его поддерживает Малаз А. Бустани, MD, MPH, из Института Регенстриф, Медицинской школы Университета Индианы

Профессор Кэмпбелл, который также проводил подобные исследования и приходил к похожим результатам, пояснил, что данное исследование охватывает наибольший период наблюдения истории болезни, и поэтому результаты являются «наиболее достоверными», и это «вероятно, самое лучшее, что может быть сделано в наблюдательном исследовании».

«Даже низкие дозы препаратов, включенных в это исследование, повышают риск развития деменции при приеме их в долгосрочной перспективе. Это своего рода кумулятивный эффект. Чем больше вы принимаете, тем выше ваш риск заболеть», — отметил он.

«В настоящее время результаты уже нескольких исследований говорят о том, что прием антихолинергических препаратов вызывает когнитивные проблемы. Но в то время, как многие гериатры и психиатры осведомлены об этом, семейные врачи находятся в неведении и по-прежнему прописывают эти лекарства больным. Публикация этого исследования в JAMA Internal Medicine — прекрасная возможность информационного обеспечения семейных врачей» — подытожил он.

Профессор Кэмпбелл добавил: «Пожалуй, самая важная группа, которая должна быть осведомлена об этой проблеме — сами пациенты. Деменция — это очень серьезное заболевание, это внушает страх. Для меня будет приоритетом не принимать те препараты, которые повышают риск заболевания ею».

Профессор Грей отметила, что будущие исследования будут сосредоточены на понимании биохимических механизмов, которые могут лежать в основе этой связи, добавив, что группа пациентов текущего исследования дала разрешение на получение их мозговой ткани после вскрытия для изучения этого вопроса.

Доктор Кэмпбелл предположил, что следующим шагом может быть рандомизированное исследование риска развития деменции у пациентов, принимающих эти препараты и либо продолжающих, либо прекращающих их прием. Его группа подает заявку на финансирование такого исследования.

Материал подготовила А. Далинская

источник

Амитриптилин-опосредованное когнитивное усиление у пожилых 3 × Tg мышей с болезнью Альцгеймера связано с нейрогенезом и нейротрофической активностью

Задуманные и разработанные эксперименты: WC JC BM SM. Выполнены эксперименты: WC NM JC YZ S-SP LW. Проанализированы данные: КГБ YZ EL WW BM SM. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: JC BM SM. Написал газету: WC JC BM SM.

Около 35 миллионов человек во всем мире страдают от болезни Альцгеймера (AD). Существующие терапевтические средства, хотя и умеренно эффективны, в настоящее время не могут остановить широко распространенный рост распространенности AD. AD ассоциируется с увеличением амилоидных бета (Aβ) олигомеров и гиперфосфорилированных тау, наряду с когнитивными нарушениями и нейродегенерацией. Несколько антидепрессантов продемонстрировали свою перспективу в улучшении познания и облегчении окислительного стресса в БА, но не прошли долговременную терапию. В этом исследовании амитриптилин, одобренный FDA трициклический антидепрессант, вводили перорально к пожилым и когнитивно нарушенным трансгенным мышам AD (3 × TgAD). После лечения амитриптилином тестирование на когнитивное поведение показало, что произошло значительное улучшение как долговременного, так и краткосрочного хранения памяти. Обработка амитриптилином также вызывала значительное усиление нетоксичного Aβ-мономера при сопутствующем снижении нагрузки на цитотоксический димер Aβ по сравнению с контрольными 3 × TgAD-носителями. Кроме того, введение амитриптилина вызывало значительное увеличение нейрогенеза зубного отростка, а также увеличение экспрессии нейросинаптических маркерных белков. Обработка амитриптилином приводила к увеличению белка нейротрофического фактора мозга гиппокампа, а также повышенному фосфорилированию тирозина его родственного рецептора (TrkB). Эти результаты показывают, что амитриптилин обладает значительными полезными действиями в престарелых и поврежденных головных мозгах AD и что он демонстрирует перспективность в качестве переносимого нового терапевтического средства для лечения AD.

Болезнь Альцгеймера (AD) является наиболее распространенной формой деменции, связанной с памятью и снижением познавательной способности. Воздействие AD на общественное здоровье усиливается по мере увеличения доли пожилых людей в населении. Классические биохимические признаки AD включают накопление амилоидных бета (Aβ) пептидных олигомеров и растворимых гиперфосфорилированных тау-агрегатов. Сообщалось, что генерация этих агрегатов приводит к окислительному и воспалительному повреждению, что приводит к нарушению метаболизма и синаптической дисфункции. Приблизительно 40% пациентов с АД развивают депрессивные симптомы, также известные как аффективное расстройство, связанное с АД, что само по себе способствует снижению познавательной способности [1]. На сегодняшний день наиболее эффективными лекарственными средствами являются ингибиторы холинэстеразы, которые могут частично улучшить познание. Тем не менее, пациенты с АД, страдающие депрессией, получающие терапию антихолинэстеразой, демонстрируют значительное снижение когнитивной функции по сравнению с пациентами с депрессией AD, получающими комбинацию как антихолинэстераз, так и селективных ингибиторов обратного захвата серотонина (SSRI) [2]. Несмотря на то, что комбинационная терапия показала свою перспективу, SSRI и трициклические антидепрессанты (TCAs) также продемонстрировали независимое снижение тяжести когнитивного спада у пациентов, не страдающих депрессией AD [3]. Интересно отметить, что также было показано, что у пациентов с депрессией, получавших низкую дозу пароксетина (СИОЗС), наблюдалось снижение уровня BDNF в сыворотке на 12%, тогда как у пациентов с депрессией, получавших низкую дозу трициклического антидепрессанта амитриптилина (АМИ), наблюдалось увеличение на 13% в уровнях BDNF в сыворотке [4]. Хотя ТЦА в значительной степени были заменены СИОЗС для лечения депрессии, ТСА, такие как ОИМ, в настоящее время назначаются для лечения невропатической боли в дозах, значительно превышающих значения антидепрессантов, что предполагает дозозависимые плюрипотентные действия этого агента. Интересно, что недавно было показано, что AMI обладает нейротрофической активностью и может связываться с рецептором B (TrkB [5], [6]) нейротропина и активировать его. Нейротрофины имеют решающее значение для поддержания периферической и центральной нервной систем, а полезные эффекты нейротрофических факторов на функцию нейронов и патофизиологию AD хорошо известны [7], [8]. Важным соображением для разработки успешной терапии АД является то, сохраняет ли агент функциональную эффективность у пожилых людей с развитой патологией и симптомами. Чтобы исследовать потенциал терапевтического эффекта, который обладает эффективностью в престарелых и поврежденных мозгах, мы вводили низкую хроническую дозу AMI к тройной трансгенной мышиной модели AD (3 × TgAD [9]). У этих 3 × TgAD мышей наблюдаются возрастное зависимое отложение Aβ и тау-патология в гиппокампе, что связано с дефицитом в задачах пространственного обучения [9]. Мы использовали старших 3 × TgAD мышей (14 месяцев), которые продемонстрировали значительную AD-патологию и когнитивный дефицит, чтобы определить потенциальные положительные эффекты AMI на когнитивную функцию и существующую патологию AD. Ранее мы продемонстрировали, что существуют значительные нейрофизиологические различия между мышами 3 × TgAD и их контрольными группами дикого типа [10], которые могут оказывать различное влияние на реакцию лекарственного средства. Поэтому в этом исследовании мы главным образом сосредоточились на непосредственных когнитивных эффектах лечения ОИМ на мышиной модели 3 × TgAD в отличие от любых потенциальных воздействий на непатофизиологических животных. Конечной целью развития терапии АД является эффективная профилактика, но в то время как ранние и точные диагностические инструменты в настоящее время недоступны, способность продемонстрировать терапевтическую эффективность в когнитивно нарушенном заболевании является важным терапевтическим шагом вперед.

Уход за животными и экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам NIH и были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Национального института по проблемам старения (NIA) по протоколу NIA № 293-LNS-2010. Мужские мыши 3 × TgAD, 14 месяцев, поддерживали в 12-часовом темном цикле в условиях отсутствия возбудителя. Животные получали пищу и воду ad libitum. Испытуемая группа получала 100 мкг / г массы тела амитриптилина-гидрохлорида в день в питьевой воде (Sigma-Aldrich, St. Louis MO) в течение 4 месяцев (n = 15), а контрольная группа принимала воду (n = 15). Два месяца в эксперимент 50 мкг / г BrdU вводили внутрибрюшинно обеим группам ежедневно в течение 9 дней для изучения потенциальных эффектов ОИМ на нейрогенез. Для обеспечения стабильности и зрелости каких-либо новых AMD-продуцируемых BrdU-положительных клеток прошло два месяца после первоначальной инъекции BrdU до времени сбора ткани. В конце периода исследования животных подвергали эвтаназии с ингаляцией и обезглавливанием изофлураном. Одна половина головного мозга тщательно рассекали на льду, замораживали и хранили при -80 ° C для дальнейшего анализа. Другая половина каждого мозга была зафиксирована в 4% параформальдегиде для иммуногистохимических анализов.

Водный лабиринт Морриса (MWM) использовался для оценки когнитивной функции. Протокол испытаний MWM был подробно описан ранее [11], [12]. Короче говоря, животным давали четыре испытания в день в течение семи дней, чтобы изучить задачу. В последний день тестирования животным было дано пробное испытание, в котором платформа удалена, и количество времени, проведенного в каждом квадранте животным, регистрируется в течение 60 секундного интервала. Это пробное исследование было проведено 4 часа, 24 часа и 2 недели после последнего дня обучения. Испытание зонда указывает, может ли животное помнить, где расположена платформа для побега. В дополнение к MWM мы также использовали тест Novel Object Preference (NOP) для определения способности к обучению и памяти. Животных помещали в непрозрачные коробки (в течение 15 минут), которые содержали два одинаковых объекта, и измерялось время, затрачиваемое на исследование каждого объекта. На следующий день один из объектов был заменен новым объектом, и снова измерялось время, затрачиваемое на исследование каждого объекта (в течение 15 минут). Животные, которые не имеют нарушения памяти, будут тратить больше времени на изучение нового объекта во второй день тестирования. Данные были представлены как индекс предпочтений (PI), то есть общее время, затрачиваемое на исследование нового объекта / общее время, проведенное животным, исследуя оба объекта. Впоследствии мы измерили общие уровни активности, используя стандартную процедуру открытого поля, с 2 зонами (I и II), как описано ранее [11]. Были измерены следующие показатели: время, проведенное в конкретной зоне (I или II), общее количество амбулаторных пациентов, количество вертикальных показателей активности и общее время вертикальной активности. Для оценки уровня тревоги использовался лабиринт с повышенным плюсом. Аппарат (Сан-Диего Инструменты, Сан-Диего, Калифорния) состоял из двух открытых рук и двух закрытых рукавов, которые простирались от общей центральной платформы. Аппарат был поднят на высоту 38 см над уровнем пола. Каждая мышь помещалась в центральный квадрат, обращенный к открытой руке, и позволяла свободно исследовать аппарат в течение 10 минут. Было записано общее время, проведенное с изучением открытых рукавов (2 и 4) и закрытых рукавов (плечи 1 и 3). Все поведенческие данные были собраны с использованием программного обеспечения отслеживания поведения Stoelting Any Maze (Wood Dale, IL).

Хембрины фиксировали в 4% параформальдегиде (PFA) и хранили в 30% сахарозе. Исправленные гемибраины секционировали (40 мкм) с использованием вибратома, а затем обрабатывали с использованием стандартных протоколов [13]. Каждая восьмая секция была иммунизирована с использованием антител, направленных против Aβ (плюс антигенное восстановление: (5 минут, 99% муравьиная кислота) или гиперфосфорилированное тау (AT8, AT180) с использованием наборов ABC Vector Elite и диаминобензидина (Vector Laboratories, Burlingame, CA). (источники и разведения) перечислены в таблице S1. Иммуногистохимические результаты количественно определяли с использованием двух разных методов исследователем, ослепленным в экспериментальных условиях. Во-первых, иммунореактивность Aβ определялась методом иммуногистохимической нагрузки [13]. Значения нагрузки определяли по выбранным 420 мкм × 330 мкм области иммуноблочных секций, которые были захвачены и оцифрованы с использованием системы видеозахвата: черно-белая CCD-камера, подключенная к оптическому микроскопу Olympus Optical (Tokyo, Japan) BX40. Используя NIH Image J (v.1.61), цифровой полутоновые изображения были преобразованы в бинарные положительные / отрицательные данные с использованием постоянного порогового предела. Во-вторых, числа отложений Aβ и АТ8-иммунореактивных количественно определяли нейроны, как описано ранее [13].

Тканевую бета- или гамма-секретазную активность измеряли у обработанных машиной или обработанных AMI мышей с использованием специфических наборов флуорометрических анализов (бета-секретаза — FP002, гамма-секретаза — FP003), полученных от R & D Systems (Миннеаполис МН, США). Анализы проводили с использованием тканевых гомогенатов (конечная концентрация белка 1 мг / мл), созданных с использованием поставляемого специфического экстракционного буфера в соответствии с инструкциями производителя. В анализах используют специфичные для секретасе субстратные пептиды, конъюгированные с флуоресцентной репортерной молекулой EDANS ((5 — ((2-аминоэтил) амино) нафталин-1-сульфоновая кислота) и молекулярный тушащий агент DABCYL (4- (диметиламиноазо) бензол-4- карбоксильная кислота). Расщепление субстратных пептидов снимает опосредованное DABCYL флуоресцентное тушение фрагмента EDANS, поэтому уровни активности секретазы (на единичный тканевой белок) пропорциональны генерируемой флуоресценции, измеренной с использованием пластинчатого ридера Molecular Devices Spectramax 384-Plus (Molecular Devices Corporation, Саннивейл, Калифорния).

Гиппокамп и ткань коры были фракционированы с использованием набора клеточного отсека Qproteome ™ в соответствии с инструкциями производителя (Qiagen, Valencia CA). Все белковые экстракты количественно определяли с использованием реактива BCA (ThermoScientific, Rockford IL) до разрешения с SDS-PAGE и электропередачи на мембраны PVDF (Perkin Elmer, Waltham MA). Мембраны блокировали вестерн-блоты, как описано ранее [10], и иммунореактивные комплексы первичных антител идентифицировали с использованием вторичной антисыворотки с щелочной фосфатазой (Sigma Aldrich) с фермент-связанной химиофлюоресценцией (GE Healthcare, Piscataway NJ) и определяли количественно с помощью тайфуна 9410 фосфоример.

Диссоциированные культуры гиппокампа и кортикальной нейроны высевали на пластинах с покрытием из поли-D-лизина и выращивали в нейробазальной среде (Invitrogen, Carlsbad CA) и дополняли B27 (Invitrogen) и 0,5 мМ глутамином. После 7, а в некоторых случаях 21, дней созревания клетки обрабатывали АМИ в течение 3 дней и контрольные клетки получали фосфатно-буферный солевой раствор (PBS). Затем клетки удаляли в буфер для лизиса на основе NP40 (250 мМ NaCl, 5 мМ HEPES, 10% глицерина, 0,5% NP40, 0,5% Triton-X 100, 2 мМ EDTA, ингибиторы протеазы), перемешивали в течение 40 минут при 4 ° С, а затем центрифугируют при 14000 об / мин при 4 ° С в течение 15 минут. Супернатантные белковые лизаты были нормализованы (1 мг / мл) перед процедурами вестерн-блоттинга (см. Выше). Для экспериментов с острой АМИ-стимуляцией клетки гиппокампа / кортикальной инкубации в течение 40 минут инкубировали в искусственной спинномозговой жидкости до воздействия AMI (на указанный период времени). После стимуляции клеточные монослои лизировали в буфере для лизиса на основе NP40 и готовили для вестерн-блоттинга. Гиппокампальные и кортикальные клетки для конфокальной микроскопии высевали в восемь камерных слайдов (ThermoFisher, Rochester NY). Через 10 дней после посева клетки обрабатывали AMI в течение 3 дней. Для иммуноокрашивания нейробазальная среда для роста была аспирирована, а монослои промывали PBS и фиксировали в ледяной 4% PFA в течение 20 минут. Клеточные монослои дважды промывали PBS и затем инкубировали в пермеабилизационном буфере (трис-буферный солевой раствор, 10% козьей сыворотки, 0,1% Triton-X 100, 30 минут). После пермеабилизации монослои инкубировали с анти-MAP2-сывороткой. Клетки затем инкубировали с 1 000 000 разведения конъюгированного с родамином антимышиного антитела в течение 1 часа при комнатной температуре. Монослои промывали PBS между первичными и вторичными инкубаторами антител, а также перед визуализацией. Для получения клеток нейронов-предшественников [14] использовались щенки эмбрионального дня 14 (E14) C57 / BL6. Клетки-предшественники высевали в 6-луночные планшеты с покрытием из поли-L-лизина. Затем клетки поддерживали в DMEM с добавкой B27 (Invitrogen), 25 нг / мл фактора роста фибробластов и 25 нг / мл эпидермального фактора роста. Клетки обрабатывали AMI (10-20 нМ), 10 нг / мл нейротрофического фактора мозга (BDNF) или PBS (контроль на транспортном средстве) в течение 2 недель. Затем клетки лизировали (8% SDS, 125 мМ Трис-HCl, pH 7,4) и центрифугировали (14000 об / мин, 10 минут) перед определением концентрации белка и нормализацией (1 мг / мл). Все эксперименты проводили в трех экземплярах.

Первичные клетки коры и гиппокампа обрабатывали AMI в течение указанного периода времени / дозы и затем лизировали в ледяном буфере RIPA. Лизаты перемешивали в течение 20 минут при 4 ° С перед центрифужным осветлением (14000 об / мин / 10 минут / 4 ° C). Нормализованные супернатантные белковые лизаты предварительно очищали с использованием предварительно конъюгированных агарозных гранул A / G (EMD Chemicals, Gibbstown NJ). PY20 (антифосфотироин) предварительно конъюгированные сыворотки (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz CA) затем добавляли к предварительно очищенным супернатантам при перемешивании при 4 ° C. Иммунопреципитаты собирали центрифугированием, промывали в буфере RIPA и белки элюировали в 30 мкл буфера Laemmli (8% SDS). Затем образцы обрабатывали для вестерн-блоттинга. Для иммунопреципитаций тканей фракции плазматической мембраны, полученные фракционированием Qproteome ™, были нормализованы, предварительно очищены, инкубированы с анти-PY20 и обработаны далее, как описано ранее [15].

Изоляция РНК, последующая генерация кДНК, маркировка и гибридизация с Illumina Sentrix Mouse Ref-8 Expression BeadChips (Illumina, San Diego, CA) проводили, как описано ранее [15]. Массивы были сканированы с использованием сканера Genetic Analysis Systems Illumina BeadStation и данных изображения, извлеченных с использованием Illumina BeadStudio v.3.0. Мы разместили необработанные транскрипционные данные в этой рукописи в GEO / ArrayExpress под номером присоединения GSE26836, мы можем подтвердить, что все детали соответствуют требованиям MIAME.

источник

Читайте также:  Мозг при болезни альцгеймера фото

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *