Мужское бесплодие днк фрагментация

*Импакт фактор за 2017 г. по данным РИНЦ

Журнал входит в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК.

Введение
В настоящее время около 15–20% всех наступивших беременностей заканчиваются неудачно – это либо неразвивающаяся беременность, либо невынашивание (выкидыш) [1, 2]. Также к данной категории можно отнести и внематочную беременность. Все эти состояния относятся к репродуктивным потерям беременности. Значительную долю среди них составляют неудачные попытки применения программ вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) – неразвивающиеся беременности после экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и/или интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ).

Принято считать, что в абсолютно здоровой супружеской паре может встречаться не более 3 случаев невынашивания беременности в сроках ранее 20 нед. беременности, и это не требует какого-либо лечения. Однако при превышении этого порога такое состояние называют привычным невынашиванием беременности (ПНБ) или привычным выкидышем. Существует мнение, что этот диагноз должен ставиться уже после 2 произошедших выкидышей, поскольку вероятность последующего невынашивания беременности после 2 и 3 выкидышей схожа [2]. Частота ПНБ в популяции составляет 2% от числа беременностей. Риск повторного невынашивания после 2 выкидышей составляет 24%, после 3 – 30%, после 4 – 40% [3, 4].

Основными причинами ПНБ на сегодняшний день являются: инфекции мочеполовой системы, нарушения гемостаза (предрасположенность к тромбофилиям, нарушения фолатного цикла и др.), антифосфолипидный синдром, совпадения в системе HLA (II класса), хромосомные анеуплоидии [4, 5].

Новый взгляд на роль мужчины при ПНБ
В то же время остается невыясненной роль мужского фактора в ПНБ. До сих пор считалось, что у мужчин необходимо только лечение инфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовой системы. Следовало добиться эрадикации возбудителей инфекций, в т. ч. передающихся половым путем (хламидии, микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллы и т. д.). Однако в последнее время были выяснены новые обстоятельства.
Как известно, с возрастом у женщин снижаются овариальный резерв и целостность ооцитов. У мужчин существует способность поддерживать определенный уровень фертильности в течение всей жизни, однако эта функция ухудшается постепенно. Наблюдаются снижение уровня половых гормонов, ухудшение сексуальной функции, ухудшение показателей сперматогенеза и, как следствие, снижение фертильности. Кроме того, увеличиваются неблагоприятные исходы беременности, мутации сперматозоидов de novo (растут на 4% в год), чаще встречаются хромосомные анеуплоидии. Все это приводит к репродуктивным потерям беременности или врожденным дефектам и заболеваниям у потомства [6].

Влияние отцовского возраста на качество спермы
Возрастные изменения обычных параметров спермы проявляются в сокращении объема спермы, уменьшении общего количества сперматозоидов, ухудшении подвижности и морфологии сперматозоидов. При этом концентрация сперматозоидов достоверно не меняется. Многие изменения до настоящего времени остаются предметом дискуссии. Этиология изменений связана с накоплением с возрастом сопутствующих заболеваний, таких как: сосудистая недостаточность (диабет, артериальная гипертензия), хронические инфекции (простатит и др.), ожирение, гормональная недостаточность. Однако до конца этиология все еще четко не определена [6].
L. Vagnini et al. оценивали влияние возраста на качество спермы. Oказалось, что с возрастом уменьшается количество и ухудшается качество сперматозоидов, увеличивается количество сперматозоидов с большими ядерными вакуолями (более 50% объема ядра), значительно возрастает степень фрагментации ДНК сперматозоидов (TUNEL, p

источник

Фрагментация ДНК сперматозоидов (наличие одно- и двухцепочечных разрывов молекулы) – не так давно открытая причина мужского бесплодия. Чем больше таких повреждений, тем ниже степень целостности генетического материала. Следует отметить, что сперматозоиды даже со значительным количеством повреждений ДНК могут сохранять оплодотворяющую способность, однако в дальнейшем эмбриональное развитие может блокироваться, приводя к прерыванию беременности. В настоящее время патофизиологические механизмы, приводящие к фрагментации ДНК, еще не до конца выяснены. Предполагают, что их причиной могут быть дефекты ремоделинга хроматина, сопровождающегося заменой гистонов на протамины в ходе спермиогенеза, апоптоз и окислительные процессы. Предположение о корреляции между морфологическими параметрами сперматозоидов и частотой фрагментации ДНК было выдвинуто на основании того, что важная роль апоптоза в соматических клетках состоит в устранении дефектных клеток. В аномальных сперматозоидах ДНК разрушается по аналогии с таковым процессом в различных типах соматических клеток.

Фрагментация хроматина сперматозоидов часто ассоциирована с низкими показателями спермограммы, однако многие исследователи констатируют, что частота фрагментации не имеет четкой корреляции с параметрами сперматозоидов, рекомендованными ВОЗ при спермиологическом исследовании (концентрацией, подвижностью, морфологией сперматозоидов). Сперматозоид, морфологически оцененный как нормальный, может иметь поврежденную ДНК. Поэтому целью нашего исследования стало выявление корреляции между морфологическими параметрами и повышенной частотой фрагментации ДНК сперматозоидов на крупнокогортной выборке мужчин, в анамнезе которых указано бесплодие. Группу обследованных составили 460 неродственных мужчин с нарушением репродуктивной функции, обратившихся в лабораторию генетики нарушений репродукции для медико-генетического и спермиологического обследования.

Фрагментацию ДНК определяли методом TUNEL на мазках эякулята. Образцы спермы наносили на адгезивные стекла (Histo Bond) и обрабатывали по протоколу фирмы-изготовителя (DеadEndTM Fluorometric TUNEL System, PROMEGA). Препараты обрабатывали DAPI (4,6-diamino-2-phenylidole, Sigma) для специфической окраски ДНК. Просмотр осуществляли с помощью микроскопа Axiovert 200V (Carl Zeiss, Германия). Спермиологическое исследование выполняли согласно рекомендациям соответствующего руководства ВОЗ (2010).

Уровень фрагментации ДНК у обследованных мужчин с нарушением репродуктивной функции варьировал от 1 до 84%. Средний уровень составил 12,6%. При этом у 23% мужчин с бесплодием частота фрагментации ДНК сперматозоидов была выше нормы (15%). У 18% пациентов частота фрагментации ДНК сперматозоидов находилась в диапазоне от 15 до 30%, а у 5% пациентов превышала 30%.

Установлено, что количество сперматозоидов с фрагментированной ДНК у пациентов с тяжелыми нарушениями сперматогенеза выше, чем у пациентов с менее выраженными нарушениями сперматогенеза. Чем больше тяжесть олигозооспермии, тем больше вероятность того, что будет высокая частота фрагментации ДНК сперматозоидов. Уровень атипии сперматозоидов (в диапазоне от 80 до 100% морфологически аномальных сперматозоидов) коррелирует с частотой фрагментации ДНК в них. Чем выше процент атипичных сперматозоидов, тем больше вероятность того, что имеется повышенная степень фрагментации ДНК в мужских гаметах. Показатель подвижности сперматозоидов (PR) в диапазоне от 0 до 20% обратно коррелирует с частотой мужских гамет, имеющих повышенную фрагментацию ДНК. Кроме того, выявлена отрицательная временная динамика в изменении концентрации сперматозоидов у мужчин с повышенной частотой фрагментации ДНК в них. Таким образом, полученные нами результаты выявили диапазон патозооспермии, в котором существует корреляция между морфологическими параметрами и частотой фрагментации ДНК сперматозоидов.

Обнаружено увеличение частоты фрагментированной ДНК в мужских гаметах при рассмотрении отдельных показателей спермограммы (концентрации, морфологии и подвижности сперматозоидов), находящихся в пределах нормы, что не может объясняться механизмом апоптоза, связанным с элиминацией поврежденных сперматозоидов. Очевидно, важная роль в этом процессе отведена окислительному стрессу и нарушениям в процессе ремоделинга хроматина. Его целостность является внутренним параметром повреждения сперматозоидов, который нельзя выявить с помощью обычного спермиологического исследования и который имеет прогностическое значение в отношении успешности лечения и/или решения проблемы репродукции с помощью методов вспомогательной репродукции.

Источник: Фрагментация ДНК сперматозоидов и мужское бесплодие// Конгресс РОУ 2014// Руднева С.А., Брагина Е.Е., Черных В.Б., Сорокина Т.М., Шилейко Л.В., Ермолаева С.А., Курило Л.Ф. Медико-генетический научный центр РАМН, Москва 2014г

источник

Согласно последним статистическим данным, средний показатель бесплодия в мире составляет 15%. Каждая восьмая пара испытывает проблемы с зачатием первенца. У каждой шестой возникают сложности с рождением последующих детей. В 50% это случается из-за повреждения генетического материала. Если показатели спермограммы нормальные, есть смысл пройти анализ фрагментации ДНК сперматозоидов.

Сперматозоид — это самая мелкая клетка в организме человека, состоящая из головки и хвостика. Главная задача мужской половой клетки — быстро добраться к яйцеклетке, внедриться в неё и поделиться генетической информацией.

Важнейший показатель качества сперматозоидов — это целостность генетической структуры. Фрагментацией называется нарушение структуры спирали ДНК. Из-за этого происходит повреждение информации, которую несёт в себе половая клетка мужчины. Что, в свою очередь, существенно снижает вероятность нормального развития зародыша.

Одна из основных причин этой неприятной патологии — пониженный синтез транспортных белков — протаминов. Они содержатся в хромосомах и выполняют очень важную защитную функцию, предохраняя ДНК от агрессивных внешних факторов.

Половые клетки, имеющие фрагментацию ДНК, на анализе спермограммы не обнаруживаются, ведь они ничем внешне не отличаются от своих здоровых собратьев и способны к оплодотворению яйцеклетки. Однако из-за повреждённого генетического материала происходят многочисленные сбои уже на ранних стадиях развития плода. Обычно всё заканчивается выкидышем или замершей беременностью.

Важно понимать, что повреждённые сперматозоиды — это бракованный материал, не подлежащий восстановлению. Невозможно искусственно провести дефрагментацию ДНК.

Спермограмма не может выявить эту патологию, для этих целей разработана современная методика под названием TUNNEL. К сожалению, далеко не все пары, страдающие от бесплодия, знают об этом методе изучения половых клеток.

В некоторых случаях, если нарушения в цепочке генов не слишком масштабные, целостность возвращается природным путём. Яйцеклетка восстанавливает структуру мужской ДНК при помощи своего генетического материала. Однако это встречается довольно редко.

Существуют две внутренние причины, способные вызвать нарушение целостности ДНК в сперме. Первая — это сбои в процессе образования семенной жидкости. Дело в том, что сперматозоиды созревают в придатках мужских яичек. Одновременно с этим происходит активизация хроматинового комплекса, состоящего из молекул ДНК и специфических белков в ядрах клеток. Случается, что этот процесс идёт не так, как положено, в результате происходят многочисленные повреждения генетических цепочек.

В половой системе у мужчин есть природный механизм контроля половых клеток. Каждый сперматозоид проверяется на соответствие стандарту. В случае выявления каких-либо отклонений в строении или в качестве наследственного материала, он выбраковывается и немедленно уничтожается.

Случается, что эта защитная система работает неправильно. Может наблюдаться такое явление: когда здоровые экземпляры не проходят контроль и организм от них избавляется, а дефективный материал допускается к участию в оплодотворении. Сперма мужчины с этой патологией неполноценна, так как содержит смесь из повреждённых и здоровых клеток.

Кроме внутренних факторов развития патологии, существует несколько внешних причин:

Острые и хронические заболевания, особенно перенесённые без соответствующей медицинской помощи и не долеченные до конца.
Воспалительные процессы, локализованные в мочеполовой системе, могут очень активно повлиять на репродуктивные свойства человека.
Многие представители сильного пола страдают от варикозного расширения вен, оплетающих яички (варикоцеле). Это распространённое заболевание является главной причиной бесплодия у мужчин. Патологию легко выявить при самостоятельном осмотре, а также по характерным симптомам.
Высокая температура без каких-либо видимых причин, которая длится довольно долго и не проходит.
Оксидативный стресс — множественные повреждения клеток в результате их окисления.
Длительное воздействие ионизирующего излучения, например, рентгеновские лучи.
Курс химиотерапии.
Чрезмерное употребление алкоголя и прочие вредные привычки.

Особенно губительно воздействие курения. Это доказано многими исследованиями.

Сейчас существует немало методик для избавления от этой вредной привычки. Будущему отцу желательно отказаться от употребления никотина за 2−3 месяца до зачатия.

Грамотное планирование семьи обязательно включает в себя проверку качества мужской спермы. Для рождения полноценного здорового ребёнка требуется соответствующий генетический материал. Это поможет сделать стандартный анализ — спермограмма.

Параметры проверки мужского семени:

концентрация;
строение;
подвижность;
соответствие определённым нормам;
кислотность;
содержание лейкоцитов;
цвет;
запах.

Здоровая сперма должна быть белой или кремовой, допускается розовый оттенок. Запах чем-то напоминает каштан.

В результате этого теста можно определить причину проблем с оплодотворением. Если спермограмма не выявила никаких патологий, а зачать ребёнка не выходит — причина кроется именно в нарушениях ДНК.

Недостаток спермограммы в том, что исследуются только внешние свойства сперматозоида. Классический анализ не способен определить качество наследственной информации. Для того чтобы выявить фрагментацию ДНК, придётся воспользоваться более точными и продвинутыми методиками. Наиболее совершенная на сегодняшний день техника исследования семенной жидкости, которая позволяет с большой точностью определить процентное содержание фрагментированных сперматозоидов, это — TUNNEL.

Правила для проведения анализа:

в течение недели нельзя принимать горячую ванну;
походы в сауну и баню также исключаются;
половое воздержание и отказ от алкоголя на тот же период;
сбор эякулята в день проведения процедуры, используется специальная пластиковая ёмкость.

Для проведения анализа собранный эякулят подвергают воздействию специальных реактивов, в результате чего дефективные клетки начинают существенно отличаться от здоровых. Полученный таким образом препарат попадает под микроскоп, где тщательно исследуется опытным медицинским специалистом.

Исследователь сразу же выявляет наличие клеток с фрагментированной ДНК. Их количество подсчитывается и вычисляется соотношение здоровых и больных экземпляров.

Индекс фрагментации:

До 15% — норма. Оплодотворению ничего не мешает и беременность должна наступить природным путём.
От 15 до 25% — зачатие возможно, но придётся подождать.
Начиная от 30% вероятность забеременеть естественным способом снижается, может потребоваться процедура искусственного оплодотворения — ЭКО.
Если фрагментировано более 50% сперматозоидов, самостоятельно зачать не получится. ЭКО тоже не всегда помогает. Наилучший вариант в такой ситуации — это интрацитоплазматическая инъекция (ИКСИ).
Если повреждено более 60% половых клеток, поможет лишь донорская семенная жидкость.

Результат исследования выдаётся пациенту в виде фотографии с описанием, в нём указывается процентное содержание повреждённых клеток. Врач даёт пациенту подробные рекомендации для успешного зачатия ребёнка.

Пройти анализ на фрагментацию можно почти в любой государственной клинической лаборатории, оборудованной современной аппаратурой. Процедура проводится бесплатно, а результат можно получить уже через несколько дней. Для создания более целостной картины и получения точных данных рекомендуется сделать несколько тестов.

Некоторые частные лаборатории выдают результат исследования в тот же день. Цена такого удовольствия в столице составит 5−10 тыс. рублей.

К сожалению, многие мужчины не подозревают о своём бесплодии, предпочитая сваливать всё на женщин. Далеко не каждый пойдёт сдавать спермограмму, а про исследование дефрагментации ДНК кое-кто даже и не слышал. Всё это способствует всеобщему росту бесплодия в стране.

Существует несколько основных признаков, которые должны насторожить представителей мужского пола, а также навести на мысль о походе к врачу.

Причины для беспокойства:

несмотря на все старания в течение нескольких лет зачатие ребёнка не происходит;
опыт неуспешного искусственного оплодотворения;
выявление патологий эмбриона на ранних стадиях развития;
частые случаи выкидыша у жены без видимых на то причин и каких-либо патологий репродуктивной системы;
расширенные вены на яичках и семенном канатике;
повышенная температура тела на протяжении нескольких месяцев.

Безусловно, все эти признаки ещё не означают, что у мужчины проблемы с ДНК сперматозоидов. Необходим осмотр врача, он назначит все необходимые исследования, на основе которых поставит правильный диагноз.

Действенных методов коррекции дефрагментированной ДНК в мужских половых клетках, к сожалению, пока не найдено. Но поиски решения проблемы постоянно ведутся. Проводятся многочисленные исследования. Недавно выяснилось, что введение в организм веществ с антиоксидантными свойствами способствует уменьшению количества повреждённых генетических цепочек. Однако, если нарушения вызваны токсинами или высокой температурой, положительного результата не наблюдается.

Ещё одно открытие основано на наблюдении за образом жизни и питанием большого количества мужчин. В результате этого исследования выяснилась взаимосвязь между потреблением фолиевой кислоты и образованием повреждённых клеток. Диета с низким содержанием витамина В9 способствует повышению риска фрагментации в спиралях ДНК.

источник

Способ лечения мужского бесплодия при высоком показателе днк-фрагментации эякуляторных сперматозоидов

Владельцы патента RU 2685797:

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для лечения мужского бесплодия. Производят открытую биопсию яичка и забор тестикулярных сперматозоидов при высоком показателе ДНК-фрагментации эякуляторных сперматозоидов. Перед выполнением биопсии осуществляют цветное ультразвуковое доплерографическое исследование кровотока в субкапсулярных отделах внутрияичковых артерий. Забор сперматозоидов осуществляют из сектора яичка с показателем максимальной систолической скорости кровотока не менее 5,0 см/с. Полученные сперматозоиды используют в процедуре интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов с ооцитами, полученными в тот же день путем трансвагинальной пункции. Способ обеспечивает получение потенциально качественного биоматериала для оплодотворения яйцеклеток при мужском факторе бесплодия, обусловленном высоким показателем ДНК-фрагментации эякуляторных гамет в результате прицельного хирургического извлечения сперматозоидов из изначально фиксированного сектора вмешательства, с учетом допплерографии яичек. 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно, к урологии, и может быть использовано для лечения мужского бесплодия при высоком показателе ДНК-фрагментации эякуляторных сперматозоидов. Способ позволяет осуществить забор из яичка сперматозоидов, наиболее пригодных для использования в программах вспомогательных репродуктивных технологий и повысить показатель рождаемости.

В настоящее время частота бесплодия в браке составляет от 15 до 20%. В России показатель превышает 17%. В большинстве стран мира данная проблема имеет тенденцию к росту [Божедомов В.А., 2015; Гамидов С.И. и соавт., 2013].

Доля мужского фактора в бесплодном браке составляет около 50%. В 30-40% случаев мужское бесплодие носит идиопатический характер [Nieschlag S. Et al. Andrology: Male Reproductive Health and Dysfunction. Berlin, Heidelberg: Springer Berlin Heidelberg 2010]. Более чем в 40% наблюдений, в связи с отсутствием эффекта от терапии, пары вынуждены прибегать к лечению бездетного брака методами вспомогательных репродуктивных технологий.

На сегодняшний день определение уровня фрагментации ДНК сперматозоидов не рутинный метод исследования в клиниках, занимающихся репродуктивным здоровьем. Тем не менее, целостность структуры ДНК мужской половой клетки является важным элементом, определяющим оплодотворение яйцеклетки, предимплантационное развитие эмбрионов, риски потерь беременности на ранних сроках и ассоциируется с развитием врожденных пороков развития у потомства [Simon L, Brunborg G, Stevenson M, Lutton D, McManus J, Lewis SE. Clinical significance of sperm DNA damage in assisted reproduction outcome. Hum Reprod 2010; Simon L. et al. Sperm DNA damage has negative association with live birth rates after IVF. Reprod. Biomed 2013].

Высокий уровень фрагментации ДНК сперматозоидов (более 15%) является сложно преодолимой формой мужского бесплодия. Основными признанными этиологическими факторами, приводящими к разрывам цепочек ДНК гамет признаны: варикоцеле, инфекционно-воспалительные заболевания полового тракта, вредные привычки (курение, алкоголь), профессиональные вредности (высокие температуры, контакт с тяжелыми металлами, ионизирующее излучение), метаболические нарушения, сахарный диабет, расстройства эякуляции, прием гаметотоксичных медикаментов. И в этих случаях, лечение носит этиотропный характер. Но нередко генез фрагментации ДНК остается невыясненным.

Исследования демонстрируют отрицательную корреляцию между показателем ДНК-фрагментации сперматозоидов и частотой наступления и развития клинической беременности в программах вспомогательных репродуктивных технологий, как экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), так и ИКСИ (интрацитоплазматической инъекции сперматозоида). Высокий уровень ДНК-фрагментации ассоциируется с низким показателем рождаемости после процедур ЭКО/ИКСИ [Lynne Robinson Ioannis D. Gallos Sarah J. Conner Madhurima RajkhowaDavid Miller Sheena Lewis Jackson Kirkman-Brown Arri Coomarasamy. The effect of sperm DNA fragmentation on miscarriage rates: a systematic review and meta-analysis Human Reproduction, Volume 27, Issue 10, 1 October 2012, Pages 2908-2917; M.H. Коршунов, E.C. Коршунова, С.П. Даренков. Прогностическая ценность показателя ДНК фрагментации сперматозоидов в успехе программ вспомогательных репродуктивных технологий. Эмпирическая антиоксидантная терапия в коррекции ДНК-фрагментации на фоне патологического окислительного стресса эякулята. Экспериментальная и клиническая урология. №3 2017. Стр 70-76].

Таким образом, преодоление бесплодия у мужчин с идиопатическим высоким показателем ДНК-фрагментации сперматозоидов имеет особую актуальность.

На сегодняшний день методы коррекции патологического уровня ДНК-фрагментации сперматозоидов неясного генеза основываются на эмпирическом подходе.

Медикаментозная коррекция представлена антиоксидантной и гормональной терапией.

Антиоксиданты — биологические и химические соединения, которые нивелируют выраженность окислительного стресса в организме, в том числе семенной жидкости. Это группа органических нутриентов, которые включают: витамины, провитамины, минералы, активные ингредиенты растительного происхождения. Их назначение может улучшить качество спермы и снизить фрагментацию гамет.R. Aitken и соавторы провели метаанализ 20 клинических работ о влиянии использования различных препаратов с антиоксидантным профилем действия в коррекции ДНК-фрагментации сперматозоидов, сочетающейся высокой активностью свободных радикалов спермы. Авторы указали, что антиоксидантная терапия является эффективным методом коррекции патоспермии и окислительного стресса, однако на сегодняшний день нет абсолютных доказательств клинической эффективности использования антиоксидантов, особенно при ДНК-фрагментации [Gharagozloo, P., Aitken, R.J. The role of sperm oxidative stress in male infertility and the significance of oral antioxidant therapy. Hum. Reprod 2011, 26(7); 1628-40]. Кроме того, в ряде случаев назначение антиоксидантов может приводить к ухудшению интеграции генома сперматозоида, вследствие неконтролируемого подавления физиологического уровня свободных радикалов эякулята, необходимого для процесса гаметогенеза.

Альтернативным методом лечения является назначение синтетического рекомбинантного фолликулостимулирующего гонадотропина. Garolla А. с соавторами описали положительный эффект подкожного назначения данного гормона мужчинам с идиопатическим повышенным уровнем ДНК-фрагментации сперматозоидов [Garolla A. et al. FSH treatment in infertile males candidate to assisted reproduction improved sperm DNA fragmentation and pregnancy rate. Endocrine. 2017 Мау;56(2):416-425]. Важно отметить, что наилучший ответ на данный вид терапии отмечается у пациентов с изначально невысокими показателями фолликулостимулирующего гормона сыворотки крови и ДНК-фрагментации и напрямую коррелирует с наличием рецепторного полиморфизма ФСГ p.N680S [Simoni М et al. Treatment with human, recombinant FSH improves sperm DNA fragmentation in idiopathic infertile men depending on the FSH receptor polymorphism p.N680S: a pharmacogenetic study. Hum Reprod. 2016 Sep;31(9): 1960-9].

Поведенческая терапия, направленная на снижение уровня ДНК-фрагментации, основана на получении свежих эякуляторных сперматозоидов. Было отмечено, что меньший срок полового воздержания с предварительными режимом частых эякуляций может привести к улучшению качества спермы и повысить эффективность процедур вспомогательных репродуктивных технологий. Данный метод сложно использовать у больных с нарушенной эякуляторной и сексуальной функциями.

Вышеперечисленные инструменты в большинстве случаев могут оказывать благотворный эффект на целостность цепочек генома мужской половой клетки. Но есть категория пациентов с аномально высокими значениями фрагментации, при которых данные лечебные манипуляции оказываются безуспешными. Сохраняющийся высокий показатель ДНК-фрагментации сперматозоидов может стать причиной повторных неудачных протоколов ЭКО/ИКСИ, обусловленных низким качеством полученных эмбрионов, остановкой их развития после 3-х суток культивирования или выкидышами на ранних сроках гестации.

Несколько экспериментальных исследований показали, что сперматозоиды могут повреждаться свободными радикалами на посттестикулярном уровне в процессе пассажа по семявыносящим путям. При этом было доказано, что у мужчин с данной формой патоспермии, показатель фрагментации тестикулярных сперматозоидов в 2,5-3 раза ниже эякуляторных. Клинические работы показали, что при мужском факторе бесплодия, обусловленном аномально высоким показателем фрагментации ДНК, использование тестикулярных гамет для оплодотворения в процедуре ИКСИ, в сравнении с эякуляторными, приводит к достоверно лучшим показателям рождаемости. [Moskovtsev SI1, Jarvi K, Mullen JB, Cadesky KI, Hannam T, Lo КС. Testicular spermatozoa have statistically significantly lower DNA damage compared with ejaculated spermatozoa in patients with unsuccessful oral antioxidant treatment. Fertil Steril. 2010 Mar 1;93(4):1142-6. Esteves SC. et al. Comparison of reproductive outcome in oligozoospermic men with high sperm DN A fragmentation undergoing intracytoplasmic sperm injection with ejaculated and testicular sperm. Fertil Steril. 2015 Dec;104(6):1398-405; Коршунов M.H., Коршунова E.C., Даренков С.П. Клиническая эффективность использования тестикулярных сперматозоидов в программах вспомогательных репродуктивных технологий при высоком показателе ДНК-фрагментации. Урологические ведомости. 2017 Т. 7 (S):57-58]. Последний источник является наиболее близким аналогом заявленного изобретения. Данный метод лечения оптимален для пациентов, имеющих в анамнезе безуспешные попытки консервативной терапии и неудачные протоколы вспомогательных репродуктивных технологий. Важным моментом является то, что в описываемой литературе сперматозоиды получали по стандартным методикам (путем закрытых и открытых биопсийных вмешательств) без оценки васкуляризации сегментов яичка — «вслепую». Однако, возможно различие в качестве продуцируемых сперматозоидов в сегментах testis. Сперматогенез сложный многоэтапный процесс и на этапах дифференцировки и пролиферации высокочувствителен к гипоксическим воздействиям. В процессе выполнения биопсийного пособия «вслепую» не представляется возможным определить участок яичка для забора с потенциально хорошим качеством сперматозоидов.

Допплерографическое ультразвуковое исследование является признанным методом диагностики в андрологической практике. Показано, что показатели кровотока органов мошонки напрямую коррелируют с функцией гонад и фертильностью. [Schurich М, Aigner F, Frauscher F, Pallwein L. The role of ultrasound in assessment of male fertility. European journal of obstetrics, gynecology, and reproductive biology. 2009;144 Suppl 1:S192-8]. Так, предоперационное допплерографическое ультразвуковое сканирование яичек может быть полезным инструментом при обследовании пациентов с обструктивной и необструктивной формами азооспермии, так как позволяет определить область, наиболее благоприятную для поиска или забора сперматозоидов хирургическим путем, являясь своего рода предиктором. [Nowroozi MR, Ayati М, Amini Е, Radkhah K, Jamshidian Н, Delpazir A, Ghasemi F, Rajabzadeh Kanafi A. Assessment of testicular perfusion prior to sperm extraction predicts success rate and decreases the number of required biopsies in patients with non-obstructive azoospermia. Int Urol Nephrol. 2015 Jan;47(l):53-8]. В случаях достаточной концентрации сперматозоидов в эякуляте, их нахождение в яичках не представляет технических сложностей. Существующий метод мультифокальной биопсии яичка, основанный на заборе гамет из разных участков, позволяет эмбриологу выбрать сперматозоиды для оплодотворения по внешним качествам. Но морфологическая характеристика не коррелирует с эффективность процедур ЭКО/ИКСИ, в отличие от целостности структуры генома гаметы, что может быть напрямую связано с состоянием кровотока. К тому же прицельная биопсия позволяет избежать избыточной травматизации органа.

В литературе не выявлены сведения о корреляции скоростных показателей кровотока в артериях яичка с показателем фрагментации сперматозоидов.

Задачей настоящего исследования является разработка способа эффективного лечения мужского бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий при высоком показателе ДНК-фрагментации эякуляторных сперматозоидов.

Техническим результатом заявленного изобретения является получение потенциально качественного биоматериала для оплодотворения яйцеклеток при мужском факторе бесплодия, обусловленным высоким показателем ДНК-фрагментации эякуляторных гамет за счет прицельного хирургического извлечения сперматозоидов из изначально фиксированного сектора вмешательства, с учетом данных допплерографии яичек.

Для решения задачи при оплодотворении в процедуре ЭКО/ИКСИ используют гаметы, полученные методом открытой биопсии из участка яичка с наилучшими показателями интрапаренхиматозного кровотока, то есть с показателем максимальной систолической скорости кровотока в субкапсулярных отделах внутрияичковых артерий не менее 5,0 см/сек. Полученные из такого участка яичка сперматозоиды имеют уровень фрагментации ДНК менее 15%.

При этом на этапе подготовки супружеской пары к процедуре вспомогательных репродуктивных технологий мужчине выполняется ультразвуковое допплерографическое исследование органов мошонки. Определение кровоснабжения дает возможность оперирующему хирургу прицельно выбрать зону для забора сперматозоидов из яичек.

Способ осуществляют следующим способом.

На этапе предоперационной подготовки пациенту выполняют ультразвуковое исследование органов мошонки с использованием спектрального датчика в режиме допплерографии. Яички полипозиционно делят по секторам (фигура 1). Сканирование проводится по всей проекции органа: передняя и задняя поверхности, медиальная, латеральная области, верхний, средний и нижний сегменты. Регистрируется скорость систолического кровотока в субкапсулярных отделах внутрияичковых артерий (см/сек) в каждом секторе. Результаты фиксируются на бланке (фигура 2).

В день трансвагинальной пункции яичников и получения ооцитов выполняется биопсия яичка. Выбор стороны проведения операции изначально основывается на результатах допплерографии: с максимальными значениями интрапаренхиматозного кровоснабжения.

Продольным срединным разрезом острым и тупым способом выделяется яичко до белочной оболочки. В соответствии с маркировкой анатомо-топографического состояния кровотока в сегменте с показателем максимальной систолической скорости кровотока в субкапсулярных отделах внутрияичковых артерий не менее 5,0 см/сек прицельно иссекается небольшой участок тестикулярной ткани. После предварительной микроскопической оценки эмбриологом материала в случае достаточного количества забранных сперматозоидов для оплодотворения ооцитов, выполняется послойное ушивание оболочек яичка. Полученные сперматозоиды после предварительной обработки в специальных средах используются в процедуре ИКСИ. Таким образом, прицельное хирургическое извлечение сперматозоидов с изначально фиксированным сектором вмешательства, с учетом данных допплерографии яичек, позволяет получить потенциально качественный биоматериал для оплодотворения яйцеклеток при мужском факторе бесплодия, обусловленным высоким показателем ДНК-фрагментации эякуляторных гамет.

Супружеская пара с диагнозом: Первичное бесплодие. Мужской фактор. Астенотератозооспермия. Высокий показатель ДНК-фрагментации сперматозоидов неясного генеза. Неудачные попытки ЭКО/ИКСИ. Возраст пациента — 42 года. Длительность бесплодного брака 10 лет. Репродуктивный статус супруги без патологии. По результатам спермиологического исследования выраженная астенозооспермия, незначительное снижение процента морфологически нормальных сперматозоидов и высокие цифры индекса ДНК-фрагментации гамет — 65%. При обследовании мужчины данных за соматическую патологию и заболевания репродуктивного тракта не выявлено. Вредные привычки отрицает. До обращения в анамнезе у пары 2 неудачных попытки ЭКО/ИКСИ, в обоих случаях наблюдалась высокая степень фрагментации эмбрионов (эмбрионы b, be и с классов), беременность после эмбриотрансферов не наступила. Проведение антиоксидантной терапии улучшило параметры эякулята, как подвижность, так и число морфологически нормальных форм сперматозоидов. Существенной положительной динамики индекса фрагментации ДНК сперматозоидов не наблюдалось — он варьировал от 50-60%. Учитывая положительную динамику параметров эякулята, принято решение о проведении повторного протокола ЭКО/ИКСИ. В 3 попытке были получены эмбрионы со средней степенью фрагментации (класс ab и b), после переноса эмбриона беременность не наступила. На основании анализа предыдущих попыток ЭКО, решено провести протокол ЭКО/ИКСИ с использованием тестикулярных сперматозоидов. На предоперационном этапе выполнено цветное ультразвуковое допплерографическое исследование яичек с полипозиционным разделением по секторам. Показатели скорости систолического кровотока субкапсулярных отделов внутрияичковых артерий (см/сек) зафиксированы в каждом секторе. Результаты анатомо-топографически регистрированы. В день трансвагинальной пункции, после короткого протокола стимуляции супруги и получения 8 ооцитов качества МИ, выполнена открытая биопсия левого яичка. Выбор стороны вмешательства был обусловлен показателями гемодинамики. Биопсия яичка выполнена по общепринятой методике. Интраоперационно, в соответствии с данными секторальной допплерографии, из двух сегментов яичка (с максимальным и минимальным кровоснабжением — 5,4 и 2,5 см/сек соответственно) в достаточной концентрации получены сперматозоиды. На этапе предварительной микроскопической оценки различий в качестве материала зафиксировано не было. Гаметы помещены в 2 маркированные чашки с буферной средой — с учетом показателей перфузии. Часть сперматозоидов из обеих чашки в равных долях использована для оплодотворения яйцеклеток методом ИКСИ, остальной биоматериал проанализирован на степень фрагментации методом sperm chromatin dispersion test. Результат анализа тестикулярных сперматозоидов на фрагментацию составили 12% и 18% из участков с большими и меньшими значениями систолического кровотока в яичке соответственно. Число и качество эмбрионов на пятые сутки культивирования были достоверно выше при использовании гамет, полученных из локуса яичка с лучшим кровоснабжением, вследствие чего данные эмбрионы были использовали для переноса в полость матку. Зафиксирована клиническая беременность. Роды в срок 39 недель.

Супружеская пара с диагнозом: Вторичное бесплодие. Мужской фактор. Олигоастенозооспермия. Высокий показатель ДНК-фрагментации сперматозоидов неясного генеза. Неудачная попытки ЭКО/ИКСИ. Спорадическая потеря беременности. Возраст пациента — 32 года. Длительность бесплодного брака 7 лет. Репродуктивный статус супруги в пределах нормы. По результатам спермиологического исследования олигоастенозооспермия и высокий показатель ДНК-фрагментации сперматозоидов — 42%. Мужчина соматически здоров. Вредных привычек нет. В анамнезе одна попытка ЭКО/ИКСИ с низким показателем эмбриогенеза: остановка развития эмбрионов и формирование одной бластоцисты качества 2 ВС.После переноса эмбриона зафиксирована клиническая беременность, замершая на сроке 4-6 недель гестации. Проведение антиоксидантной терапии и назначение фолликулостимулирующего гонадотропина не улучшило параметры эякулята, фрагментация сперматозоидов составила 41%. Следующий протокол ЭКО/ИКСИ выполнялся с использованием тестикулярных сперматозоидов. На дооперационном этапе проведено цветное ультразвуковое допплерографическое исследование яичек с полипозиционным разделением по секторам. Показатели скорости систолического кровотока субкапсулярных отделов внутрияичковых артерий (см/сек) зафиксированы в каждом секторе. В день трансвагинальной пункции, после короткого протокола стимуляции супруги и получения 12 ооцитов качества МП, выполнена открытая биопсия правого яичка. Интраоперационно, в соответствии с данными секторальной допплерографии, из трех сегментов яичка (с максимальным, средним и минимальным кровоснабжением — 5,1; 4,7 и 2,2 см/сек соответственно) в достаточном количестве получены сперматозоиды. Предварительная световая микроскопическая оценка различий в качестве материала не зафиксировала. Гаметы помещены в 3 маркированные чашки (с учетом показателей гемодинамики) с буферной средой. Сперматозоиды из 3 участков в равных долях использованы для оплодотворения яйцеклеток методом ИКСИ, остальной биоматериал проанализирован на степень фрагментации методом sperm chromatin dispersion test. Результат анализа тестикулярных сперматозоидов на фрагментацию составили 10, 15 и 20% из участков с большим, средний и меньшим значениями систолического кровотока соответственно. Сравнительный анализ показал, что, несмотря на то, что показатель оплодотворения и число эмбрионов статистически не различались при использовании сперматозоидов из разных сегментов, качество эмбрионов было выше при оплодотворении гаметами, полученными из локуса яичка с лучшим кровоснабжением (более 5 см/сек). После эмбриотрансфера развилась клиническая беременность. Роды в срок 38 недель.

Способ лечения мужского бесплодия при высоком показателе ДНК-фрагментации эякуляторных сперматозоидов, включающий открытую биопсию яичка и забор тестикулярных сперматозоидов, отличающийся тем, что перед выполнением биопсии осуществляют цветное ультразвуковое доплерографическое исследование кровотока в субкапсулярных отделах внутрияичковых артерий, а забор сперматозоидов осуществляют из сектора яичка с показателем максимальной систолической скорости кровотока не менее 5,0 см/с, полученные сперматозоиды используют в процедуре интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов с ооцитами, полученными в тот же день путем трансвагинальной пункции.

источник

Фрагментация ДНК сперматозоидов — это расстройство, характеризующееся распадом цепей нуклеиновых кислот в ДНК, что приводит к разрушению структуры молекулы. Как известно, ДНК несёт генетический код. Генетический материал мужчины содержится в «головке» сперматозоида, а фрагментация этих молекулярных структур приводит к невозможности оплодотворения. То есть фрагментация, распад на отдельные фрагменты цепочек аминокислот, разрушение связей между ними под действием каких-либо факторов, фактически делает мужчину бесплодным.

Под действием каких-либо причин, которые могут быть как экзогенными, так и эндогенными, связи между фрагментами двойной цепи, содержащейся в молекуле дезоксирибонуклеиновой кислоты, разрушаются. В результате молекулярная структура нарушается. В таких условиях генетический материал просто не может быть передан.

В организме здорового мужчины протекание такого процесса вполне возможно, однако содержание сперматозоидов с фрагментированной ДНК не превышает 15% от общего количества. Если этот показатель выше, то оплодотворение продолжает оставаться возможным, однако потомства у мужчины не будет. Это происходит потому, что большинство сперматозоидов, в которых ДНК разрушена, сохраняют активность и способность к прогрессивному движению. Они могут достигнуть яйцеклетки и оплодотворить её, однако такая беременность быстро заканчивается непроизвольным абортом или замирает. Причинно тому — невозможность развития эмбриона из-за плохого качества генетического материала.

Причины повреждения ДНК могут крыться в организме мужчины, а могут быть спровоцированы негативными влияниями извне. К факторам внешнего влияния, способствующим распаду ДНК на отдельные фрагменты, относят:

влияние ионизирующих излучений,
действие отравляющих химических соединений,
применение химиотерапии по поводу лечения какого-либо заболевания,
проживание в неблагоприятных по экологической обстановке условиях,
интоксикация вследствие нездоровых пристрастий: злоупотребление спиртными напитками, курение, приём наркотических веществ,
нерациональное питание, отсутствие в диете полного набора необходимых питательных веществ, витаминов, микроэлементов, органических кислот,
инфекционные заболевания органов мочеполовой системы, особенно протекающие хронически,
нарушение на каком-либо этапе сперматогенеза вследствие варикозного расширения вен семенного канатика (варикоцеле).

По мнению некоторых исследователей проблемы, фрагментация ДНК сперматозоидов может быть обусловлена генетически.

В мужском организме могут происходить патологические процессы, которые приводят к повреждению собственного генетического материала. При нормальных условиях в организме здорового мужчины происходит своеобразный естественный отбор, который клетки с поврежденными ДНК, конечно, не проходят. Такие сперматозоиды подвергаются утилизации, в эякуляте оказываются единицы, сумевшие «ускользнуть» от отбраковки. Под действием каких-либо факторов механизм выбраковки нарушается или не действует вовсе, в результате чего в сперме оказываются сперматозоиды с фрагментированной ДНК.

Кроме того, к распаду цепочек ДНК в ядрах мужских половых клеток может приводить неправильное протекание какого-либо из этапов сперматогенеза и созревания клеток.

Оба описанных процесса относят к факторам внутреннего влияния, однако к их возникновению приводит именно влияние негативных внешних факторов. Только в редких случаях речь идёт об аутоиммунных нарушениях.

Даже при таких нарушениях возможно оплодотворение и нормальное развитие плода. Изредка (по разным оценкам от 1 до 5% случаев) яйцеклетка может сама «собрать» распавшийся генетический код в правильную цепочку, то есть восстановить разрушенную ДНК. Однако этот процесс может быть осуществлён только полностью здоровой яйцеклеткой, кроме того, имеет значение степень и характер повреждений.

Как известно, запас яйцеклеток у женщины конечен, он закладывается на этапе внутриутробного развития, а расходуется в течение жизни. Чем старше женщина, чем больше у неё вредных привычек, чем более влияние на неё негативных факторов среды, тем более оказываются повреждены её яйцеклетки. Эти структуры несут в себе печать всех воздействий, которым подвергалась женщина, «помнят» все её заболевания. Восстановить распавшиеся нуклеиновые цепи может только полностью здоровая клетка, не знавшая негативных влияний, а это, согласитесь, редкость.

Такое информативное исследование, как спермограмма, проводимое посредством изучения биоматериала под микроскопом, не даёт представления о нарушении ДНК в сперматозоидах. Этот метод предполагает изучение и оценку их активности и полноценности развития. Как уже отмечено ранее, половые клетки с фрагментированной ДНК вполне можно принять за здоровые, так как они сохраняют способность к прогрессивному движению. Для того чтобы понять, что в половых клетках поврежден генетический материал, необходимы более глубокие исследования.

Наиболее информативным в этом отношении является так называемый Tunel –тест. Показаниями к его назначению являются:

пара пытается зачать ребенка более года, но безуспешно, при этом спермограмма не показывает отклонений,
беременность наступает, но замирает или происходит непроизвольный аборт, такое явление наблюдается неоднократно,
у мужчины, желающего стать отцом, имеются хронические или острые воспалительные процессы в органах репродуктивной системы,
намерение осуществить экстракорпоральное оплодотворение,
желание мужчины подвергнуть сперму замораживанию с целью сохранения генетического материала,
сдача биоматериала в банк донорской спермы.

Определение фрагментации ДНК сперматозоидов методом Tunel –тестирования также желательно проводить всем мужчинам, которые собираются становиться отцами после 45-50 лет.

На анализ сдаётся сперма, как и при сдаче спермограммы. Пациенту необходимо собрать одноразовую порцию эякулята в специальный стерильный контейнер. Перед сбором биоматериала необходим период подготовки. Мужчине следует воздерживаться от сексуальных контактов, мастурбации. Если происходит непроизвольное семяизвержение, сдачу анализа также лучше отложить. Половой покой предписывается в течение трёх или четырёх дней.

На подготовительном этапе рекомендуется как можно более сбалансировать рацион питания, избегать воздействия экстремальных температур, токсических воздействий. Нельзя посещать парную, употреблять спиртное, употреблять медикаментозные препараты. Все эти меры позволяют получить наиболее достоверный результат обследования.

Кроме того, мужчина должен знать, что результат однократно сданного анализа всё равно не является основанием для постановки окончательного диагноза: необходимо, чтобы результаты были идентичными хотя бы в двух исследованиях. Для полной достоверности желательно сдать их в разных лабораториях. При этом необходимо соблюдать те же правила подготовки: как во временном, так и в качественном отношении.

Производить сбор спермы лучше всего в специально отведенном помещении при лаборатории. Это обусловлено необходимостью как можно быстрее сдать материал в лабораторию (должно пройти не более часа), а также возможностью избежать нарушений режима транспортировки.

В ходе проведения исследования лаборант подвергает эякулят воздействию специальных ферментов. В результате участки разрывов окрашиваются, и сперматозоиды с фрагментированными ДНК очень хорошо просматриваются под микроскопом. У здорового мужчины их насчитывается не более 15% от общей массы.

Показатели уровня фрагментации в отношении возможного наступления беременности градируются следующим образом:

Сперматозоидов с разрушенной ДНК менее 15% — нет препятствий для наступления беременности естественным способом, вероятность замершей или самопроизвольно прерванной беременности довольно мала,
Сперматозоидов с разрушенными ДНК от 15 до 30% — беременность возможна, как и её нормальное протекание, вероятен долгий период ожидания зачатия, высок риск прерывания беременности или остановка развития эмбриона,
Фрагментация ДНК прослеживается у 30-50%, сперматозоидов — оплодотворение маловероятно, рекомендуется прибегнуть к методам ЭКО,
Сперматозоидов с фрагментированными ДНК более 50-60% —зачатие при помощи экстракорпорального оплодотворения не рекомендуется, так как высока вероятность неудачи, рекомендуется метод ICSI,
Более 60% сперматозоидов с поврежденными ДНК — метод ICSI или, при невозможности, использование спермы стороннего донора.

Уровень содержания в сперме сперматозоидов с хромосомными аномалиями определяются также такими исследованиями, как Halo-тест и SCSA-тест. Во всех подобных исследованиях проводится определение уровня содержания в сперме клеток с поврежденными ДНК. Сдать такие анализы можно далеко не во всех медицинских учреждениях, нужно поискать лабораторию, где имеется необходимое оборудование.

Лечение подобных отклонений проводится в зависимости от того, какой провоцирующий фактор был выявлен в ходе диагностических исследований. Такие случаи поддаются коррекции далеко не всегда. В любом случае необходима консультация квалифицированного врача и консультантов по планированию беременности.

источник

Исследование фрагментации ДНК сперматозоидов методом TUNEL

Исследование не входит в число обязательных, назначаемых всем без исключения пациентам репродуктивных клиник. Наши репродуктологи и андрологи назначают его в следующих случаях:

Исследование фрагментации ДНК сперматозоидов методом TUNEL

По данным статистики в почти половине бесплодных браков к невозможности зачать приводят сбои в мужской репродуктивной функции. Возможных причин бесплодия у мужчины много, одна из них – нарушения целостности генетической структуры спермиев. Для выявления этой проблемы в репродуктологических клиниках используется исследование фрагментации ДНК. Анализ выявляет разрывы в ДНК-цепочках половых клеток. Чем выше процент таких повреждений, тем ниже шансы на наступление беременности.

Центр репродукции «Линия жизни» специализируется на диагностике и лечении бесплодия, как женского, так и мужского. В наших клиниках пациентов ведут кандидаты медицинских наук, лучшие московские репродуктологи и урологи-андрологи. Анализ фрагментации ДНК проводится наиболее эффективным методом.

Для выявления сперматозоидов с фрагментированной ДНК мы используем тест TUNEL – это самый авторитетный из существующих сегодня методов
Для уточнения диагноза могут быть проведены другие диагностические мероприятия с доказанной эффективностью
После выявления проблемы разрабатывается тактика достижения беременности.

Она может включать специализированную терапию, вспомогательные репродуктивные технологии

Когда причину мужского бесплодия не удалось выявить базовыми методами диагностики (спермограмма и др.).
При нескольких неудачных попыток ЭКО в анамнезе.
При получении в программах ЭКО эмбрионов низкого качества.
Если у мужчины диагностировано варикоцеле.
При привычном невынашивании беременности у партнерши.

В мужских половых клетках содержится генетический материал, который во время оплодотворения передается будущему ребенку. Если этот материал с повреждениями (разрывами цепочки ДНК), крайне маловероятно, что сперматозоид оплодотворит яйцеклетку.

Поврежденные спермии есть в эякуляте любого мужчины, даже если у него нет патологий репродуктивной системы. Но когда таких сперматозоидов слишком много, зачатие становится затрудненным или невозможным. Если даже оплодотворение происходит, то снижены шансы сохранить беременность.

Исследование фрагментации половых клеток позволяет подсчитать количество нормальных спермиев и спермиев с нарушенной генетической структурой. Это становится основанием для постановки или уточнения диагноза.

Спермограмма не дает возможности выявить спермии с разорванными цепочками ДНК, необходимы специализированные методы. Таких существует несколько, самым достоверным признан тест TUNEL.

В отличие от других методик исследования фрагментации TUNEL фиксирует реальные, а не вероятные повреждения. Отсюда высокая прогнозирующая способность теста.

Сперму для исследования получают тем же способом, как для спермограммы. Получив назначение доктора, пациент приходит в клинику и сдает эякулят через мастурбацию. Подготовка к исследованию фрагментации методом TUNEL аналогична спермограмме.

Подробнее о процедуре сдачи спермы и подготовке к ней читайте здесь

После получения биологического материала он сразу направляется в лабораторию центра «Линия жизни». Там специалист добавляет в эякулят специальный энзим. При контакте с реагентом сперматозоиды с некачественным генетическим материалом меняют цвет. После этого они легко выявляются под микроскопом.

Подсчитав количество патологических спермиев, специалист составляет заключение, в котором в процентах указывает количество половых клеток с выраженной фрагментацией ДНК.

Когда в эякуляте пациента не более 15 процентов патологических спермиев, это считается нормальным показателем. Если клеток с генетическими повреждениями больше, выводы о фертильности мужчины зависят от того, насколько превышена норма.

15-30 процентов – естественное зачатие хотя и затруднено, но возможно. Для него может потребоваться много времени.
30-50 процентов – естественное зачатие крайне маловероятно, но у пары хорошие шансы на ЭКО-беременность
50-60 процентов – зачать естественным путем невозможно, шансы на успех ЭКО остаются, но они невысокие.
60 процентов и больше – успех ЭКО с собственными сперматозоидами маловероятен.

Пациенты нашего центра не остаются один на один с «плохими» результатами исследования фрагментации ДНК. Если в сперме много клеток с некачественным генетическим материалов, врач разработает тактику дальнейших действий. Пациенту может быть назначена терапия, направленная на уменьшение количества «сломанных» сперматозоидов.

Но часто терапия заведомо бесперспективна. Чтобы не терять драгоценного времени, доктор рекомендует паре использовать для достижения беременности вспомогательные репродуктивные технологии. В большинстве случаев речь идет о программе ЭКО с ИКСИ. Врач выберет сперматозоид без повреждений и искусственно внедрит его в цитоплазму яйцеклетки. В тяжелых ситуациях сперматозоиды забираются из яичка пациента методом TESA. Внутри яичка процесс фрагментации менее интенсивен, есть шансы отыскать нормальные клетки.

Выбирайте для решения проблем с зачатием Центр репродукции «Линия жизни». Мы поможем вам в осуществлении заветной мечты о малыше! Записаться на консультацию репродуктолога или уролога-андролога можно по телефону или через сайт – воспользовавшись формой онлайн-записи.

Мама Юлия, двойняшки Даша и Тимофей (2 года). У Юлии с мужем есть уже взрослый сын, и когда они задумались о втором ребенке, гинеколог сказала им сразу — ЭКО. О беременности супруги узнали под Новый год — это был настоящий подарок. Юля уверена, если женщина захотела стать мамой, она ею станет!

Идя на прием к психологу, я не знала чего ожидать. Как можно понять другого человека. если иногда ты сам себя понять не можешь. Но Елене Владимировне это удалось. Удалось помочь понять себя и отпустить ту душевную боль с которой я жила много лет, причем я почувствовала это не только психологически но и физически.

Очень довольна работой Баркова Виталия Олеговича. Перед протоколами провел и биопсию, тщательное обследование, чтобы грамотно и спокойно пройти протокол, а не просто на авось. Сам доктор позитивный, с ним легко общаться, он предлагает максимум возможных вариантов для личной ситуации пациента. С ним можно связаться в любое разумное время, даже если у него не рабочий день. Приемы не задерживались. В результате работы репродуктора и команды эмбриолога с персоналом операционной, беременность состоялась и в июле 2018 родилась девочка Вероника. От нашей семьи вам огромное спасибо.

Хочу выразить огромную благодарность Юлии Алексеевне Колоде. В клинику мы пришли именно к ней — посоветовала подруга-медик. Юлия Алексеевна — очень внимательный, грамотный специалист, профессионал, заслуженно имеющий признание в медицинском сообществе. В общении спокойна и рассудительна, очень доходчиво все объясняет, всегда на связи. Наш удачный результат с первой же попытки &mdash.

Экспертный уровень квалификации сотрудников: в штате клиники доктора и кандидаты наук с большим опытом работы, авторскими методиками и статьями в престижных медицинских изданиях, в том числе англоязычных. Наши врачи регулярно повышают квалификацию и участвуют в международных конгрессах ESHRE по репродукции человека.

Мы предлагаем вам самостоятельно рассчитать наиболее благоприятные дни для зачатия ребенка с помощью нашего калькулятора.

«Почему вы не даете гарантий успеха ЭКО?» — один из частых вопросов, которые нам задают. Отвечает один из самых опытных и именитых репродуктологов нашего центра Михаил Евгеньевич Потапов .

Спермограмму можно у вас сдать?

Подскажите пожалуйста. При проведении ЭКО со стимуляцией, возможно докупить донорские ооциты, на случай если свои ЯК окажутся непригодными для оплодотворения, тогда использовать донорские? или это надо проводить отдельно другое ЭКО с дЯ?

Здравствуйте, работаете ли вы по программам ЭКО по ОМС, если да, то какие врачи ведут пациентов по ОМС? А так же хотела уточнить по анализам- те, что на сайте актуальные?

Добрый вечер! Скажите пожалуйста,могут ли отказать в получении квоты, если у пациентов 1 тип сахарного диабета и 3 отрицательная группа крови? Планируем детей уже 2 года, ничего не получается, не созревает овуляция и нарушение менструального цикла. Проводилась резекция яичников, но это тоже не увенчалось успехом. Спасибо.

Добрый день! Подскажите пожалуйста делают ли у вас ЭКО по ОМС? И что для этого нужно,какие справки и документы? Благодарю за ответ. Наталья.

амг-0,41 фсг-11,8. остальные гормоны в норме. снижен овариальный резерв. Имею ребенка-11лет, в 2017-2(ЗБ). Уважаемые доктора, подскажите, каковы шансы на ЭКО с собственными ЯК? Какой вид эко можно пробовать? При ЭКО с донорскими ЯК, возможно ли сохранить использование ДЯ в тайне от мужа?

источник

Мужское бесплодие днк фрагментация

Способ лечения мужского бесплодия при высоком показателе днк-фрагментации эякуляторных сперматозоидов

Добавить комментарий Отменить ответ